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羊多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌双重套式pcr检测方法的建立及应用

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动物医学进展 2022年第11期43卷 12-17页

作者：吴昊天满初日嘎刘昂何美荣侯思梦李崇瑞杜丽陈巧玲陈思王凤阳李昌金宁一海南大学动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228 军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122

为了建立一种高灵敏度和强特异性的羊多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌的双重检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和布鲁氏菌BCSP31基因序列分别设计了内外两对引物,构建了双重套式pcr检测方法。结果表明,该方法可以特异性扩增kmt1和BCSP3... 详细信息

为了建立一种高灵敏度和强特异性的羊多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌的双重检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和布鲁氏菌BCSP31基因序列分别设计了内外两对引物,构建了双重套式pcr检测方法。结果表明,该方法可以特异性扩增kmt1和BCSP31片段,并能从多种组织样本的DNA中准确检测到多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌的核酸片段。检测沙门氏菌、猪链球菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、海藻糖巴氏杆菌和斯氏假单胞菌均为阴性;对于kmt1的检测下限为70.9 copies/μL,对于BCSP31检测下限为89.5 copies/μL;用于检测动物的组织样本符合率为100%。建立的方法有良好的敏感性、特异性和适应性,可以用于动物检疫诊断。

关键词：多杀性巴氏杆菌布鲁氏菌套式pcr

套式pcr检测中国江苏省猪场猪鼻支原体和猪肺炎支原体的感染(英文)

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中国人兽共患病学报 2014年第8期30卷 800-805页

作者： Joyce Wanjiru Maingi 熊祺琰韦艳娜马庆红纪燕 William Kimaru 华立忠王佳邵国青鲍恩东南京农业大学兽医学院南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部国家兽医生物制品工程技术研究中心兽医生物工程技术重点实验室南京210014

目的猪鼻支原体和猪肺炎支原体的感染在中国养猪业较为普遍,本研究对江苏省猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)和猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)流行病学进行初步调查。方法从江苏省不同的猪场采集7、14、21、28及35日... 详细信息

目的猪鼻支原体和猪肺炎支原体的感染在中国养猪业较为普遍,本研究对江苏省猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)和猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)流行病学进行初步调查。方法从江苏省不同的猪场采集7、14、21、28及35日龄仔猪的鼻拭子样本,用套式pcr方法对收集的399份鼻拭子样本进行Mhr和Mhp的检测。结果江苏省不同猪场样本中Mhr的检出率为70.9%,Mhp检出率为13.5%。5周龄以下的猪Mhr的感染率要高于Mhp。其中30个样本(7.5%)的检测结果为两种病原体共感染。7-35日龄的猪Mhr的感染率随着日龄的增长呈现明显的上升趋势,但Mhp的感染率并未随着仔猪日龄的增长而显著上升。从本研究结果分析还发现,不同品种的猪Mhr的感染率存在显著差异,与其他品种猪相比姜曲海瘦肉型品种猪(Jiangquhai porcine lean strain,JQHPL)更易于感染Mhr(p0.05)。结论本试验调查了江苏地区猪场中仔猪感染Mhr和Mhp的情况,且研究结果表明Mhr的感染状况与日龄及品种有一定关系。

关键词：猪鼻支原体猪肺炎支原体感染套式pcr

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应用套式pcr早期快速诊断麻疹的研究

中华儿科杂志 2004年第8期42卷 625-628页

作者：邓洁钱渊朱汝南赵林清邓莉贾丽英首都儿科研究所北京感染与免疫中心实验室 100020 首都儿科研究所附属儿童医院感染消化科

目的建立从临床标本中快速检测麻疹病毒(MV)基因片段的方法,以便早期快速地对临床症状不典型的麻疹作出诊断。方法收集116例疑似麻疹患儿的咽拭子标本,74例尿液标本及110例血清标本,其中73名疑似麻疹患儿同时收集了咽拭子标本与尿液标... 详细信息

目的建立从临床标本中快速检测麻疹病毒(MV)基因片段的方法,以便早期快速地对临床症状不典型的麻疹作出诊断。方法收集116例疑似麻疹患儿的咽拭子标本,74例尿液标本及110例血清标本,其中73名疑似麻疹患儿同时收集了咽拭子标本与尿液标本,104名疑似麻疹患儿同时收集了咽拭子标本与血清标本。采用套式pcr扩增咽拭子和尿液标本中的MV N基因相关片段,用MV标准株进行空斑形成试验测定其敏感性,通过与常见呼吸道病毒pcr交叉扩增试验测定方法的特异性。用ELISA检测患儿血清中的MV特异性IgM抗体。结果套式pcr可检测到0.53空斑形成单位(pfu)的病毒。所设计的引物与其他病毒株均无交叉反应。临床疑似麻疹患儿咽拭子和尿液标本中MV检测阳性率分别为60.3％(70/116)和64.9％(48/74);在同时采集到咽拭子和尿液标本的73例患儿中,检测结果一致的有71例(97.3％)。用2种ELISA试剂盒测定麻疹特异性IgM阳性率分别为59.1％(65/110)和55.5％(61/110),检测结果一致的106例(96.4％)。在同时采集到咽拭子和血液标本的104例患儿中麻疹基因检测与抗体检测结果一致的84例(80.8％)。结论本研究建立的套式pcr检测MV N基因的方法有较好的敏感性和特异性,与血清中MV特异性IgM检测方法相比,基因检测可在临床症状出现后就检测到,并可以?

关键词：套式pcr 早期快速诊断麻疹小儿

绵羊肺腺瘤病特异性pcr及套式pcr诊断方法的建立

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病毒学报 2009年第2期25卷 125-130页

作者：罗军荣刘霄卉余群英张淑琴周建华马学恩内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018 江西农业大学动科院南昌330045 江西省铅山县农业局铅山334500 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷... 详细信息

绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性pcr检测法及套式pcr检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。

关键词：绵羊肺腺瘤绵羊肺腺瘤病毒特异性pcr 套式pcr

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套式pcr在支原体检测中的应用

中国预防兽医学报 2005年第3期27卷 237-240页

作者：李彦明张映山西农业大学现代教育技术学院山西太谷030801 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的原核微生物,它对猪、牛、禽以及实验动物等具有广泛的致病性,主要以侵害呼吸系统和生殖系统为主,还能引起关节炎、乳腺炎以及眼部感染.由于它为难培养的微生物,因而限制了一般实验室对其深入的研究... 详细信息

支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的原核微生物,它对猪、牛、禽以及实验动物等具有广泛的致病性,主要以侵害呼吸系统和生殖系统为主,还能引起关节炎、乳腺炎以及眼部感染.由于它为难培养的微生物,因而限制了一般实验室对其深入的研究.目前,其检测方法主要有分离培养法、电镜法、血清学方法以及核酸探针法等[1],但都存在着种种不足.进入20世纪90年代之后,国内外众多学者在pcr技术广泛应用的基础上,发展并形成了套式pcr方法(nested pcr,npcr)来研究支原体.目前,应用套式pcr技术已在组织细胞培养中的支原体污染、动物支原体病诊断和人类疾病与支原体感染中得到了广泛的应用.……

关键词：套式pcr 支原体诊断组织细胞检测

套式pcr扩增山羊吕氏泰勒虫18S rRNA基因

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畜牧与兽医 2020年第1期52卷 98-101页

作者：孔浩然闫艺洁吴尚桦施之强赵玉洁路桂霞汪菲孙裴王勇徐前明安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

泰勒虫是一种危害动物的重要血液寄生性原虫,常寄生于牛、羊、骆驼和其他野生动物,在中国的东北、西北等地较为流行。采集安徽定远县某山羊场疑似焦虫病的山羊血样,首先采用血涂片法检查,再用Blood DNA&Tissue kit提取血液基因组,参照Ki... 详细信息

泰勒虫是一种危害动物的重要血液寄生性原虫,常寄生于牛、羊、骆驼和其他野生动物,在中国的东北、西北等地较为流行。采集安徽定远县某山羊场疑似焦虫病的山羊血样,首先采用血涂片法检查,再用Blood DNA&Tissue kit提取血液基因组,参照Kim和Wei的方法设计2对引物用于泰勒虫18S rRNA基因的扩增,并对该方法进行敏感性和特异性分析。结果显示:血涂片检查明显可见红细胞内有典型的虫体,大小为0.6~2μm,初步怀疑为泰勒虫(Theileria);pcr扩增可扩增出359 bp大小目的片段,与预期结果相一致;基因序列同源性表明,该泰勒虫分离株基因与已报道泰勒虫毒株(JQ926740.1)核苷酸同源性最高,可达99.72%;在遗传进化方面,所分离的泰勒虫和吕氏泰勒虫(Theileria luwenshuni)Nanjingdong(JQ926740.1)最接近,而且在一个分支上。本试验所建立的套式pcr具有良好的特异性,且敏感性较高,最低测出量是3.8 fg/μL。本次分离的羊血液原虫为吕氏泰勒虫。

关键词：山羊泰勒虫分子鉴定套式pcr

套式pcr在猪流行性腹泻病毒感染病例诊断中的应用

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中国畜牧兽医 2012年第10期39卷 203-205页

作者：耿岗青海省海西州乌兰县畜牧兽医工作站青海乌兰817100

猪流行性腹泻是对养猪业危害较大的一种疾病,导致腹泻的原因多种多样,给临床诊断带来了困难。本研究将套式pcr技术成功应用于猪流行性腹泻临床病例的快速诊断中,旨在为猪流行性腹泻临床病例的快速鉴别诊断提供一种新的思路。

关键词：猪流行性腹泻套式pcr 临床诊断

新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的套式pcr检测及感染情况分析

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畜牧与饲料科学 2022年第6期43卷 124-128页

作者：彭霞赵乾明王凌云信璐瑶赵爱云余复昌齐萌塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

[目的]了解新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的感染情况。[方法]基于猪囊等孢球虫SSU rDNA基因位点设计引物,采用套式pcr法对采集自新疆7个规模化猪场的801份猪新鲜粪便DNA样本进行检测;对不同养殖场、不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感... 详细信息

[目的]了解新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的感染情况。[方法]基于猪囊等孢球虫SSU rDNA基因位点设计引物,采用套式pcr法对采集自新疆7个规模化猪场的801份猪新鲜粪便DNA样本进行检测;对不同养殖场、不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率进行比较分析,对获得的SSU rDNA序列进行比对分析并构建种系发育进化树。[结果]调查猪场中猪囊等孢球虫感染率为5.74%(46/801),以沙雅县养殖场感染率最高,为14.00%(14/100),不同养殖场猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=27.081,df=6,P<0.01)。未断奶仔猪、断奶仔猪、育肥猪和母猪的猪囊等孢球虫感染率分别为14.79%(25/169)、5.78%(13/225)、2.31%(4/173)和1.71%(4/234),不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=36.366,df=3,P<0.01)。序列比对和种系发育分析显示,获得的46条猪源囊等孢球虫SSU rDNA序列与安徽省凤阳县猪源猪囊等孢球虫分离株(GenBank登录号:KX808495)SSU rDNA序列的同源性均为100%,处于同一个亚群。[结论]新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫感染较常见,应加强检测和防治工作。

关键词：猪囊等孢球虫套式pcr 检测感染率

应用套式pcr提高肺炎支原体P1-RFLP基因分型检测敏感性

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第2期34卷 141-145页

作者：薛冠华王丽琼闫超冯燕玲赵汉青李少丽孙红妹首都儿科研究所细菌研究室北京100020

目的探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式pcr．P1一RFLP基因分型方法并对其应用进行评价。方法参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2／3序列，分别在两个序列内部设计4条内套引物，采用文献报道的外套引物及新设计内套引... 详细信息

目的探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式pcr．P1一RFLP基因分型方法并对其应用进行评价。方法参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2／3序列，分别在两个序列内部设计4条内套引物，采用文献报道的外套引物及新设计内套引物进行套式pcr扩增，扩增产物混合后用HaeⅢ酶切，根据不同的酶切图谱结果判断其型别，同时采用测序验证；对标准株DNA及临床标本DNA倍比稀释后进行检测，验证新改良方法敏感性；收集2012年肺炎支原体感染阳性标本，采用研究新改良的方法进行分型检测并与现有方法进行比较。结果经测序验证，以套式pcr为基础的P1-RFLP基因分型方法能够对临床标本进行很好的扩增；与现有的分型方法相比，新改良方法敏感性提高10^3倍，差异有统计学意义；北京地区2012年儿科肺炎支原体流行基因型为I型。结论套式pcr—P1-RFLP基因分型方法敏感性高，能够对临床标本进行很好的扩增。

关键词：肺炎支原体基因分型套式pcr P1-限制性片段酶切长度分析