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奇异变形杆菌脂多糖抗原的制备及其对小鼠免疫原性、毒性、安全性和保护性评价

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中国生物制品学杂志 2022年第8期35卷 943-948页

作者：杨文腰韩镌竹廖辉修雪亮张建侯雅丹周荔葆辽宁成大生物股份有限公司辽宁沈阳110179 辽宁省检验检测认证中心辽宁沈阳110016

目的筛选耐受抗生素种类多、毒力强、免疫原性好、安全性高及副反应小的奇异变形杆菌(Proteus mirabilis,PM),为预防用疫苗的生产提供生产用菌株。方法选择31株PM,通过检测抗生素耐药性、毒力,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抗原的免... 详细信息

目的筛选耐受抗生素种类多、毒力强、免疫原性好、安全性高及副反应小的奇异变形杆菌(Proteus mirabilis,PM),为预防用疫苗的生产提供生产用菌株。方法选择31株PM,通过检测抗生素耐药性、毒力,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抗原的免疫原性、安全性及毒性筛选候选菌株,进一步评价其多价抗原对候选株的保护性和同种属其他菌株的交叉保护性。结果大部分PM具有多重耐药性,对四环素、氯霉素的耐药性分别为83.87%和87.09%,但对亚胺培南、头孢噻肟敏感,仅为3.23%和29.03%,其中耐受4种以上抗生素的占57%。筛选出9株毒力较强的候选菌株。盐酸羟胺在位消化最佳时间在66~72 h之间,LPS抗原含量达到稳定,为1.150 mg/mL。候选株LPS抗原的免疫原性均低于10μg/mL;安全性符合要求;毒性试验LD50除PM15(0.379 mg/mL)、PM100(0.594 mg/mL)和PM109(0.424 mg/mL)外,其余菌株均不低于0.6 mg/mL;Dienes试验表明,6株PM均属于不同菌株。LPS多价抗原对候选株的保护率达70%以上,对PM其他菌株的交叉免疫保护率分布在20%~90%之间,50%以上的占77.78%。结论6株PM候选株LPS多价抗原对候选株具有保护性,也对PM其他菌株具有交叉保护性,为后续PM医院获得性感染的预防研究提供了数据支持。

关键词：奇异变形杆菌脂多糖抗原抗生素耐药性毒力免疫原性安全性毒性交叉保护性

奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体的制备和鉴定

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南方医科大学学报 2017年第3期37卷 312-316页

作者：彭亮区静怡潘嘉韵邓聪陈景红曹虹广州医科大学附属第二医院检验科广东广州510260 广州医科大学附属第二医院血液科广东广州510260 南方医科大学公共卫生学院//广东省热带病研究重点实验室微生物学系广东广州510515

目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶(PPK)蛋白,制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数,选取N端较保守的309个氨基酸,并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合成新的基因序... 详细信息

目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶(PPK)蛋白,制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数,选取N端较保守的309个氨基酸,并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合成新的基因序列后插入pET28b(+)质粒,转化入转化宿主菌BL21(DE3),诱导、表达融合蛋白。通过镍琼脂糖亲和层析技术,将获得的融合蛋白进行纯化。以纯化的蛋白作为免疫原并结合使用佐剂,背部多点注射新西兰大白兔,ELISA检测兔血清效价,Western Blotting验证抗体特异性。结果成功构建了奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,可在0.5 mmol/L IPTG、37℃条件下获得较好的诱导、表达;利用镍柱纯化后的PPK蛋白与免疫佐剂一起,采用背部多点接种新西兰大白兔,制备了效价高的兔抗血清。ELISA检测血清效价达到1∶512 000,Western Blotting对ppk基因缺失株及其野生株进行验证显示抗体特异性良好。结论利用pET28b(+)载体可构建奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,表达、纯化后的蛋白与佐剂共同免疫新西兰大白兔,可获得效价高、特异性良好的兔多克隆抗体血清,为奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶的检测以及深入研究PPK在奇异变形杆菌致病中的作用奠定了基础。

关键词：奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体

奇异变形杆菌疫苗候选抗原的鉴定及其免疫保护效果评价

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中国生物制品学杂志 2024年第4期37卷 391-396页

作者：郑华白云川杨睿付利芝王孝友张素辉沈克飞重庆市畜牧科学院重庆402460 国家动物疫病重庆观测实验站重庆402460 重庆市酉阳县农业农村委员会重庆409812

目的鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶(... 详细信息

目的鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶(serine hydrolase,SH)两种膜蛋白的编码基因,克隆至载体pET-28a,于E.coli BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,进行Western blot检测。重组蛋白通过Ni Sepharose High Performance纯化后,经腿部肌内注射15只雌性昆明小鼠,100μg/(0.2 mL·只),共免疫3次,间隔2周。末次免疫后15 d,经眶前静脉窦采血,分离血清,间接ELISA法检测特异性抗体水平;经小鼠腹腔接种致死剂量的奇异变形杆菌,接种1个月,观察小鼠存活情况,并计算抗原的免疫保护率。结果提取的膜蛋白可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,经质谱鉴定与奇异变形杆菌APB87305(OmpF)、WP_004247605(SH)的同源性为100%。原核表达的重组蛋白OmpF及SH可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,免疫小鼠后均可诱导较高水平的特异性抗体,对致死性奇异变形杆菌感染的保护率分别为100%和86.67%。结论 OmpF和SH是宿主免疫保护性抗原,有望成为制备奇异变形杆菌疫苗的新靶点。

关键词：奇异变形杆菌抗原外膜蛋白F 丝氨酸水解酶免疫保护

奇异变形杆菌Proteus mirabilis A57对Cr(Ⅵ)污染的生物修复研究

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生态科学 2023年第5期42卷 145-153页

作者：陈旭黄胜威吴丽芳中国科学院合肥物质科学研究院智能机械研究所合肥230031 中国科学技术大学合肥230026 安徽省环境毒理与污染控制技术安徽省重点实验室合肥230031

自铬污染工业废水中分离得到若干株Cr(Ⅵ)耐受菌株,并通过对比各耐受菌株MIC(最小抑菌浓度)以及去除效率,确定实验菌株A57。通过形态学、生理生化鉴定结合16SrDNA序列比对分析,鉴定为奇异变形杆菌Proteus mirabilis A57。生物修复试验... 详细信息

自铬污染工业废水中分离得到若干株Cr(Ⅵ)耐受菌株,并通过对比各耐受菌株MIC(最小抑菌浓度)以及去除效率,确定实验菌株A57。通过形态学、生理生化鉴定结合16SrDNA序列比对分析,鉴定为奇异变形杆菌Proteus mirabilis A57。生物修复试验结果表明, P. mirabilis在100 mg·L^(-1)的Cr(Ⅵ)浓度下即有较高的Cr(Ⅵ)去除能力, 28℃下培养24 h总去除率为44.79%。进一步的条件优化实验表明, P. mirabilis在最佳培养条件下(30℃,初始pH7.0),42 h可将150mg·L^(-1)的Cr(Ⅵ)完全去除。不同组分试验结果显示,菌株A57的菌体可以更有效地去除Cr(Ⅵ)(相对于上清液和细胞裂解物)。扫描电子显微镜(SEM)试验观察到细胞表面形成不规则非晶态物质,表明Cr(Ⅵ)的生物修复反应主要发生在细菌细胞表面,XPS结果证实了生物还原反应的发生,菌体表面Cr元素存在形式主要为Cr(OH)3及CrCl3。

关键词：铬污染奇异变形杆菌鉴定生物修复

奇异变形杆菌中赖氨酸-2-羟基异丁酰化蛋白的分析

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色谱 2016年第12期34卷 1215-1218页

作者：董瀚阳郭振昌田姗姗翟贵金张锴天津市医学表观遗传重点实验室天津医科大学生物化学与分子生物学系天津市医学表观遗传协同创新中心天津300070

蛋白质的赖氨酸修饰广泛参与基因调控、转录、代谢等重要的生物过程。在真核细胞组蛋白上发现了一种新的赖氨酸修饰——2-羟基异丁酰化,这种修饰对于生殖细胞分化具有调控功能。该研究旨在探索这种修饰在原核生物非组蛋白中的特征。通... 详细信息

蛋白质的赖氨酸修饰广泛参与基因调控、转录、代谢等重要的生物过程。在真核细胞组蛋白上发现了一种新的赖氨酸修饰——2-羟基异丁酰化,这种修饰对于生殖细胞分化具有调控功能。该研究旨在探索这种修饰在原核生物非组蛋白中的特征。通过亲和富集、高效液相色谱-串联质谱鉴定和生物信息学分析,在奇异变形杆菌中鉴定到大量未见报道的2-羟基异丁酰化蛋白及其位点,进而考察了原核生物中2-羟基异丁酰化修饰蛋白的分布特征、分子网络和通路特点。研究表明,赖氨酸-2-羟基异丁酰化在原核生物中具有广泛的分布,其生物学意义值得进一步研究。

关键词：高效液相色谱-串联质谱翻译后修饰 2-羟基异丁酰化赖氨酸奇异变形杆菌

奇异变形杆菌中基因岛介导的多重耐药传播研究进展

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微生物学通报 2021年第3期48卷 916-923页

作者：李博洋姚天歌栾仁栋王红宁雷昌伟四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室四川成都610065

奇异变形杆菌是导致医院内感染的重要条件致病菌,广泛分布于自然环境及人和动物的肠道中。基因岛是细菌染色体上约10-200 kb独立的DNA片段,能促进宿主细菌适应复杂多变的环境,与细菌适应性进化密切相关。近年来在奇异变形杆菌基因组中... 详细信息

奇异变形杆菌是导致医院内感染的重要条件致病菌,广泛分布于自然环境及人和动物的肠道中。基因岛是细菌染色体上约10-200 kb独立的DNA片段,能促进宿主细菌适应复杂多变的环境,与细菌适应性进化密切相关。近年来在奇异变形杆菌基因组中发现了多个与多重耐药密切相关的基因岛,包括沙门菌基因岛1及其相关基因岛、SXT/R391整合性接合元件、PmGRI1等,表明基因岛在奇异变形杆菌多重耐药形成和传播中具有重要作用。本文对奇异变形杆菌中与耐药相关基因岛的结构特征、传播机制、流行情况等进行综述,以期为奇异变形杆菌中多重耐药相关基因岛的深入研究提供参考。

关键词：奇异变形杆菌基因岛多重耐药沙门菌基因岛1 整合性接合元件

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奇异变形杆菌螺纹迁徙生长现象研究

生物医学工程学杂志 2015年第1期32卷 131-136页

作者：何先元廖巳祥刘俊康李坤刘艳霞喻录容重庆医科大学中医药学院重庆401331 第三军医大学微生态药学重庆400038

为探讨奇异变形杆菌(PM)螺纹迁徙生长现象产生的原因。通过对细菌波动培养的接种时间、湿度、接种手法、培养时平板放置、外加磁场和酸碱度等因素的改变,观察PM螺纹迁徙生长现象。结果显示在密封罐里进行波动培养的平板中出现螺纹迁徙... 详细信息

为探讨奇异变形杆菌(PM)螺纹迁徙生长现象产生的原因。通过对细菌波动培养的接种时间、湿度、接种手法、培养时平板放置、外加磁场和酸碱度等因素的改变,观察PM螺纹迁徙生长现象。结果显示在密封罐里进行波动培养的平板中出现螺纹迁徙生长现象的频率较高,不论什么时候接种、接种手法如何、磁场的有无、培养时平板放置的方式如何,细菌在迁徙生长过程都能表现出螺旋迁徙生长现象,而且细菌的螺旋环旋转的方向都是逆时针。实验结果证明,PM螺纹迁徙生长需要特定的酸碱度环境,它的螺纹迁徙生长现象产生可能与其遗传特性和地球的自转有关。

关键词：奇异变形杆菌螺纹迁徙生长酸碱度逆时针地球自转

奇异变形杆菌源外膜囊泡诱导小鼠巨噬细胞向M1型和M2b型极化

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热带生物学报 2024年

作者：韦君志刘师佳宗永泰张红覃尧安徽农业大学动物科技学院海南大学热带农林学院(农业农村学院乡村振兴学院)

为探究条件致病菌奇异变形杆菌源细菌外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）是否具备诱导巨噬细胞极化以调控肿瘤微环境的功能，本研究以奇异变形杆菌分泌的OMVs作为研究对象，将该OMVs刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后检测巨噬细胞极化... 详细信息

为探究条件致病菌奇异变形杆菌源细菌外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）是否具备诱导巨噬细胞极化以调控肿瘤微环境的功能，本研究以奇异变形杆菌分泌的OMVs作为研究对象，将该OMVs刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后检测巨噬细胞极化相关表型。首先通过超速离心的方法提取该细菌外膜囊泡，利用透射电镜进行表征鉴定。然后，用PKH67荧光染料示踪细菌外膜囊泡，观察RAW264.7小鼠巨噬细胞对OMVs的摄取。最后通过细胞分泌总一氧化氮测定和RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关生物标志物。结果表明，奇异变形杆菌源OMVs可被RAW264.7摄取并诱导该细胞分泌NO增多，同时上调表达IL-10、IL-1β、TNF-α和IL-6，即发生M1型和M2b型极化，激活巨噬细胞的抗肿瘤活性。上述结果说明奇异变形杆菌分泌的OMVs在该菌抗乳腺肿瘤生长和肺脏转移作用中发挥重要作用。

关键词：奇异变形杆菌细菌外膜囊泡巨噬细胞

基于多重计算设计策略提高奇异变形杆菌脂肪酶的热稳定性

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生物工程学报 2022年第4期38卷 1537-1553页

作者：张碧飞吕成张萌许菲江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

来自奇异变形杆菌的脂肪酶(Proteus mirabilis lipase,PML)具有较好的有机溶剂耐受性,在生产生物柴油等领域有广泛的应用潜力。然而,其热稳定性仍有待提高以更好地适应工业生产。近年来,基于计算机辅助的多种计算设计策略的发展为酶的... 详细信息

来自奇异变形杆菌的脂肪酶(Proteus mirabilis lipase,PML)具有较好的有机溶剂耐受性,在生产生物柴油等领域有广泛的应用潜力。然而,其热稳定性仍有待提高以更好地适应工业生产。近年来,基于计算机辅助的多种计算设计策略的发展为酶的热稳定性改造提供了更多的思路。文中首先选择了3种基于互补算法的软件ABACUS、PROSS以及FoldX为正筛对PML进行计算设计,选择其两两交集,利用PSSM序列保守性分析和GREMLIN共进化分析两种负筛进一步缩小突变文库,得到18个单点突变设计。经实验验证,有7个T_(m)提高的突变体,其中K208G和G206D的ΔT_(m)最高,分别为3.75℃和3.21℃。选择其中5个酶活高于野生型的突变体利用贪婪累积策略进行组合,最终五点组合突变体M10的T_(m)提高了10.63℃,相对酶活为野生型的140%。组合过程中K208G和G206D展现出了一定的上位性,为M10热稳定性的提高作出了主要贡献。分子动力学模拟表明在突变位点及附近区域有新的作用力产生,G206D/K208G附近作用力的重排可能稳定了对PML稳定性有关键作用的Ca2+结合位点。本研究为天然酶的热稳定性改造提供了高效且兼顾用户友好性的计算设计方案,并为PML的改造及其工业应用的拓展奠定了基础。

关键词：奇异变形杆菌脂肪酶热稳定性蛋白质计算设计分子动力学模拟