检索结果-南通市图书馆

顶头孢霉中过表达AcveA提高头孢菌素c产量

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中国医药工业杂志 2014年第8期45卷 719-723页

作者：龚桂花张伟胡又佳朱宝泉中国医药工业研究总院张江分院(上海欣生源药业有限公司) 上海201203 中国医药工业研究总院上海医药工业研究院上海200040

与构巢曲霉veA基因同源的AcveA是近年来在顶头孢霉Acremonium chrysogenum中发现的一个全局性调控子,主要调控头孢菌素c(cPc)生物合成基因的转录水平。本研究通过从顶头孢霉高产菌基因组DNA中扩增AcveA序列构建了一个AcveA表达载体pYG2... 详细信息

与构巢曲霉veA基因同源的AcveA是近年来在顶头孢霉Acremonium chrysogenum中发现的一个全局性调控子,主要调控头孢菌素c(cPc)生物合成基因的转录水平。本研究通过从顶头孢霉高产菌基因组DNA中扩增AcveA序列构建了一个AcveA表达载体pYG280,将其导入顶头孢霉高产菌株中,荧光实时定量PcR检测阳性转化子中AcveA的相对转录水平,结果比出发菌株提高了165%。同时检测到AcveA基因导入后的转化子中cPc合成限速步骤中的早期基因pcbc、晚期基因cefEF以及cefG基因的mRNA转录水平分别较出发菌株提高了825%、353%和25%。HPLc分析结果显示,转化子cPc的发酵水平较出发菌株提高了22.7%。证明AcveA是cPc生物合成中的一个正向调控子。

关键词： AcveA 转录头孢菌素c 顶头孢霉

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混合碳源发酵生产头孢菌素c过程优化

工业微生物 2014年第2期44卷 1-6页

作者：段生兵张敬书史仲平罗洪镇刘烦袁国强赵艳丽段作营江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 石药集团河北中润制药有限公司河北石家庄050041

本文对头孢菌素c(cephalospofin c,cPc)发酵过程中碳源补料控制策略进行了优化研究,提出了一种基于DO-Stat的混合碳源流加策略,提高了发酵整体性能。在7L发酵罐上对使用该策略和传统补油策略的头孢茵素发酵性能进行比较,结果表明,采用... 详细信息

本文对头孢菌素c(cephalospofin c,cPc)发酵过程中碳源补料控制策略进行了优化研究,提出了一种基于DO-Stat的混合碳源流加策略,提高了发酵整体性能。在7L发酵罐上对使用该策略和传统补油策略的头孢茵素发酵性能进行比较,结果表明,采用补加混合碳源(葡萄糖+豆油)策略时,cPc终浓度最高,达到36.99 g/L,cPc得率也从使用传统单纯补油策略时的11.39%提高到22.19%,代谢副产物去乙酰氧头孢菌素c(DAOc)的积累量少,DAOc/cPc只有0.38%,达到生产要求。

关键词：混合碳源头孢菌素c DO—Stat 流加策略发酵

紫外诱变和终产物抗性筛选头孢菌素c高产菌株

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沈阳药科大学学报 2010年第6期27卷 495-498页

作者：曹栋陈一鸣徐威沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016

目的建立筛选头孢菌素c高产菌株的有效方法。方法出发菌株cephalosporium acrem onium NS-1,经过紫外线诱变处理,筛选头孢菌素c高产菌株;然后通过头孢菌素c梯度平板筛选终产物抗性突变菌株。结果得到比出发菌株头孢菌素c产量提高45%的... 详细信息

目的建立筛选头孢菌素c高产菌株的有效方法。方法出发菌株cephalosporium acrem onium NS-1,经过紫外线诱变处理,筛选头孢菌素c高产菌株;然后通过头孢菌素c梯度平板筛选终产物抗性突变菌株。结果得到比出发菌株头孢菌素c产量提高45%的突变菌株RM-8。结论紫外线诱变结合终产物抗性筛选的方法是一种高效的头孢菌素c高产菌株选育方法。

关键词：紫外线头孢菌素c 终产物抗性菌株选育

增加cmcJ基因表达盒拷贝数对转化头孢菌素c效率的影响

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工业微生物 2013年第3期43卷 38-43页

作者：黄娟娟郭兆霞李继安刘伟邵雷陈代杰上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室上海200040 中国医药工业研究总院上海200040

研究表明利用棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus(ATcc27064)的粗酶液能够在头孢菌素c的7位添加一个甲氧基,得到的7α-甲氧基头孢菌素c,可以作为头霉素类抗生素的半合成前体。本研究首先构建含有棒状链霉菌中cmcJ基因的重组质粒pHJJ-2... 详细信息

研究表明利用棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus(ATcc27064)的粗酶液能够在头孢菌素c的7位添加一个甲氧基,得到的7α-甲氧基头孢菌素c,可以作为头霉素类抗生素的半合成前体。本研究首先构建含有棒状链霉菌中cmcJ基因的重组质粒pHJJ-2,再通过属间接合转移的方法将该基因片段导入棒状链霉菌中,得到cmcJ基因表达盒增加的棒状链霉菌重组突变株。结果表明,重组突变株将头孢菌素c转化为羟基化头孢菌素c的转化率,从野生型菌株的57.0%提高到重组突变株的67.4%;甲氧基头孢菌素c的转化率由野生型的43.1%提高到重组突变株的51.9%。

关键词：头孢菌素c 生物转化棒状链霉菌基因重组

发酵期间顶头孢霉细胞脂肪酸成分的变化与头孢菌素c产量的关系

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国外医药（抗生素分册） 1995年第3期16卷 165-168页

作者：杨天任

顶头孢霉的头孢霉素c(cPc)生物合成受到葡萄糖之类碳源的阻遏。受阻遏的关键靶位是催化青霉素N(PenN)扩环转化为脱乙酰氧头孢菌素c(DAOc)的酶——扩环酶。因此,在以葡萄糖作碳源的cPc发酵中,PenN积累增多,cPc产量减少。为了迥避葡萄糖... 详细信息

顶头孢霉的头孢霉素c(cPc)生物合成受到葡萄糖之类碳源的阻遏。受阻遏的关键靶位是催化青霉素N(PenN)扩环转化为脱乙酰氧头孢菌素c(DAOc)的酶——扩环酶。因此,在以葡萄糖作碳源的cPc发酵中,PenN积累增多,cPc产量减少。为了迥避葡萄糖的负调节,在工业生产上往往使用油酸甲酯,豆油或米糠油代替葡萄糖作为生物合成cPc的碳源,以提高cPc产量。

关键词：头孢菌素c 产量扩环酶发酵油酸甲酯

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响应面法优化头孢菌素c发酵条件

中国抗生素杂志 2019年第4期44卷 426-431页

作者：李宁慧李凌峰金志华浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院

目的研究顶头孢霉发酵制备头孢菌素c的过程,确定关键影响因素,优化发酵条件,提高发酵水平。方法采用Plackett-Burman方法对影响头孢菌素c发酵水平的11个因素进行考察,评估各因素的影响程度,筛查影响发酵水平的关键因素,再采用响应面方... 详细信息

目的研究顶头孢霉发酵制备头孢菌素c的过程,确定关键影响因素,优化发酵条件,提高发酵水平。方法采用Plackett-Burman方法对影响头孢菌素c发酵水平的11个因素进行考察,评估各因素的影响程度,筛查影响发酵水平的关键因素,再采用响应面方法建立这些因素与发酵水平间的数学模型,为发酵条件的优化提供指导。结果Plackett-Burman实验发现,金枪鱼浸膏浓度和蛋氨酸浓度是对头孢菌素c发酵产量影响最显著的2个因素,经响应面方法优化后头孢菌素c的产量从32.59g/L提高到了35.99g/L,提高了10.4%。结论合适浓度的金枪鱼浸膏和蛋氨酸可提高头孢菌素c发酵产量,通过统计优化方法,可有效提高头孢菌素c发酵水平。

关键词：头孢菌素c 顶头孢霉 Plackett-Burman设计响应面法发酵优化

农杆菌转化法高效构建顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株提高头孢菌素c产量

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中国抗生素杂志 2019年第7期44卷 805-810页

作者：陈国枝储炬华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

目的获得顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株,以阻断sorbicillinoids的合成,并研究其与头孢菌素c(cPc)产量的关系。方法通过根癌农杆菌转化法,依据同源双交换的原理,同时敲除合成sorbicillinoids骨架结构的两个聚酮合酶基因sorA和sorB,并通... 详细信息

目的获得顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株,以阻断sorbicillinoids的合成,并研究其与头孢菌素c(cPc)产量的关系。方法通过根癌农杆菌转化法,依据同源双交换的原理,同时敲除合成sorbicillinoids骨架结构的两个聚酮合酶基因sorA和sorB,并通过摇瓶发酵实验检测缺失菌和野生菌的产量。结果筛选并验证了6株A.chrysogenum-Δpks菌株,遗传稳定,转化效率约为20%。通过发酵实验测定发现,缺失菌株产cPc能力比野生菌提高了70%。结论农杆菌转化法是一个高效的顶头孢霉遗传操作系统,并且顶头孢霉中sorbicillinoids的缺失可以提高cPc产量。

关键词：农杆菌转化法顶头孢霉聚酮合酶同源重组头孢菌素c

不同补料控制方式下发酵生产头孢菌素c的性能比较研究

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不同补料控制方式下发酵生产头孢菌素C的性能比较研究

作者：桑美纳江南大学

学位级别：硕士

头孢菌素c（cephalosporin c,cPc）是一类半合成头孢类抗生素的中间体,主要由顶头孢霉菌发酵生产制得。头孢菌素c衍生类抗生素产品具有高效、低毒、抗菌谱广、对β-内酰胺酶稳定性好等优点,在临床上得到广泛应用。本学位论文在7 L规模... 详细信息

头孢菌素c（cephalosporin c,cPc）是一类半合成头孢类抗生素的中间体,主要由顶头孢霉菌发酵生产制得。头孢菌素c衍生类抗生素产品具有高效、低毒、抗菌谱广、对β-内酰胺酶稳定性好等优点,在临床上得到广泛应用。本学位论文在7 L规模发酵罐下,对利用顶头孢霉菌（cephalosporins acremonium Hc-3 ）发酵生产头孢菌素c过程的最优底物流加工艺进行了研究,探讨和比较了不同碳源和氮源流加方式对发酵性能的影响,并对cPc主合成期内不同豆油流加方式下的cPc发酵进行了代谢分析,找出了最优流加条件下cPc发酵得以高效进行的原因。论文主要内容和结果如下: （1）提出了一种新式、硫铵-豆油耦联型的硫铵流加策略。研究发现,采用与豆油流加相耦联的方式流加硫铵（豆油和硫铵的流加质量比为1:0.17）,可将发酵液中的氨态氮（NH4+-N）浓度控制在3-6 g/L之间,同时满足了发酵前期细胞生长与cPc合成对氮源和硫源的需求,促进了顶头孢霉菌菌丝分化,为cPc发酵主酵期的cPc高效合成创造了前提条件。（2）在耦联型的硫铵流加策略的基础上,比较了cPc合成期内间歇、匀速和DO-Stat自动流加三种不同豆油流加方式的发酵性能。研究发现,耦联使用硫铵+后程通富氧空气DO-Stat法进行硫铵和豆油的同时补料的cPc发酵,可将碳源浓度与溶解氧浓度DO同时控制于适中水平,使cPc合成以高浓度和低副产物积累的方式进行,最终cPc浓度和得率分别达到35.77 g/L和13.3%。主代谢副产物去乙酰氧头孢菌素c （DAOc）的积累量和DAOc/cPc分别仅有0.178 g/L和0.5%。（3）对cPc主合成期内不同豆油流加方式下的cPc发酵进行了代谢分析。研究发现,以DO-Stat法限制豆油流加,更多的碳流可以引向cPc前体的合成方向,外部添加的蛋氨酸可以得到有效利用。更加重要的是,基于DO-Stat法的限油流加方式可以适度弱化TcA循环的代谢通量,减少cO2的释放,使cPc和细胞得率同时得到提高。（4）将优化得到的流加发酵工艺用于50 L罐中试实验,流加控制程序在发酵后期正常启动,最高cPc发酵效价与现有工业发酵水平持平,自动控制的优越性得到体现,达到了预期效果。

关键词：补料控制代谢分析发酵头孢菌素c 中试放大

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树脂在分离纯化头孢菌素c中的工艺研究

树脂在分离纯化头孢菌素C中的工艺研究

作者：安志强河北科技大学

学位级别：硕士

树脂包括大孔吸附树脂和离子交换树脂,它种类繁多,应用广泛,在头孢菌素c的分离纯化中更是起到了至关重要的作用。本论文在总结和分析相关领域应用研究的基础上,首先研究了不同温度、pH值、浓度条件下头孢菌素c随时间的降解性能,对树脂... 详细信息

树脂包括大孔吸附树脂和离子交换树脂,它种类繁多,应用广泛,在头孢菌素c的分离纯化中更是起到了至关重要的作用。本论文在总结和分析相关领域应用研究的基础上,首先研究了不同温度、pH值、浓度条件下头孢菌素c随时间的降解性能,对树脂在头孢菌素c分离和提纯进行了重点研究,在进行树脂筛选的基础上,确定了吸附、解析的最佳操作条件;其次,进一步对树脂在头孢菌素c脱色中的应用进行了研究,在对不同型号的树脂筛选的基础上,设计并进行正交试验,根据正交试验结果,确立了脱色过程中合适的流速、pH、料液浓度、过料量。最后,对树脂在头孢菌素c脱除蛋白中的应用进行了研究,通过进行初步的树脂筛选,在此基础上,设计并进行了正交试验,根据正交试验结果,确定了脱除蛋白过程中,合适的过料量、流速、pH值、浓度条件。通过以上研究,验证了头部菌素c的降解性能,确定了树脂在头孢菌素c分离和提纯的应用上的很多工艺条件,为扩大树脂应用,改善头孢的分离提纯效果和成本,具有重要的理论和生产指导意义。

关键词：头孢菌素c 树脂分离提纯吸附