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天香丹通过GRP78/NLRP3信号通路调控内质网应激抗动脉粥样硬化的作用机制研究

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中西医结合心脑血管病杂志 2024年第11期22卷 1955-1960页

作者：张夏夏白银雪吴丹丹孙龙飞任珊安冬青新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属中医医院乌鲁木齐830000

目的:基于葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨天香丹通过调控内质网应激抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:将雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、天香丹组,每组11只,给予高脂... 详细信息

目的:基于葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨天香丹通过调控内质网应激抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:将雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、天香丹组,每组11只,给予高脂饲料诱导动脉粥样硬化模型;另取10只雄性C57BL/6J小鼠作为正常组。于造模10周后给予相应药物治疗,连续干预12周。采用苏木精-伊红(HE)染色观法察胸主动脉病理特点;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、活性氧(ROS)含量;免疫组织化学法(IHC-P)检测胸主动脉中GRP78和NLRP3蛋白阳性表达水平。结果:各实验组存活6只。与模型组比较,阿托伐他汀组和天香丹组IL-1β、IL-18、ROS表达含量均降低(P天香丹能有效改善动脉粥样硬化性心血管疾病小鼠炎症反应,其作用机制可能与调控内质网应激GRP78/NLRP3信号通路抑制炎症小体活化、减轻动脉粥样硬化炎症损伤有关。

关键词：动脉粥样硬化天香丹内质网应激葡萄糖调节蛋白78 NOD样受体蛋白3 实验研究

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天香丹改善心肌缺血再灌注损伤作用机制的网络药理学和分子对接技术研究

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中国中医急症 2024年第5期33卷 757-762,774页

作者：郭闫闫赵明芬袁茜茜新疆医科大学新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学附属中医医院新疆乌鲁木齐830000

目的通过网络药理学和分子对接技术研究天香丹改善心肌缺血再灌注损伤的药效物质基础和分子作用机制。方法借助中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)并查阅文献获得天香丹中4味中药的主要活性成分,并将与活性成分相联系的靶基因借助Un... 详细信息

目的通过网络药理学和分子对接技术研究天香丹改善心肌缺血再灌注损伤的药效物质基础和分子作用机制。方法借助中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)并查阅文献获得天香丹中4味中药的主要活性成分,并将与活性成分相联系的靶基因借助UniProt数据库翻译成相应基因。于PubChem数据库得到红景天、新塔花活性成分的详细信息,可以在TCMSP平台上找到该活性物质的靶基因,就使用TCMSP的结果,否则使用SwissTargetPrediction平台得到预测靶基因;利用GeneCards、OMIM、DISGENET和TTD数据库得到疾病相关靶点,对活性成分靶点与疾病靶点取交集后采用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;选择与本课题相关的通路cAMP、mTOR、核转录因子-κB(NF-κB)使用mapper工具构建KEGG通路图。最后通过AutoDock Vina软件对关键靶点和化合物进行分子对接。结果筛选出新塔花、红景天、丹参、降香针对心肌缺血再灌注损伤的128个活性成分和386个潜在作用靶点。蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络拓扑分析发现白细胞介素-6(IL-6)、蛋白激酶B1(Akt1)、肿瘤坏死因子(TNF)的含量、白细胞介素-1β(IL-1β)等是天香丹治疗心肌缺血再灌注损伤的关键靶点。GO功能分析发现天香丹生物过程主要集中在RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控、基因表达的正向调控、凋亡过程的负调控、对外源刺激的反应等多个方面;KEGG信号富集分析结果显示主要涉及血脂与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGERAGE信号通路、TNF信号通路、细胞凋亡、IL-17信号通路、前列腺癌、HIF-1信号通路、cAMP信号通路、NF-κB信号通路、mTOR信号通路等。分子对接结果显示活性物质与靶点蛋白之间存在较强的结合力,其中槲皮素与TNF的结合力最强。结论天香丹治疗心肌缺血再灌注损伤具有多成分、多靶点、多通路相互协同的特点,为今后天香丹的临床应用提供了理论基础和参考。

关键词：心肌缺血再灌注损伤天香丹网络药理学分子对接

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天香丹减轻心肌缺血损伤的作用机制研究

中国循证心血管医学杂志 2024年第1期16卷 35-38页

作者：岳远佳姜林吉钊王慧敏杜古加·嘎尔玛荣幸新疆医科大学第四临床医学院乌鲁木齐830000 省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室乌鲁木齐830000 新疆中药炮制研究重点实验室乌鲁木齐830000

目的研究天香丹胶囊激活雌激素受体α(ERα)抑制铁死亡减轻心肌缺血损伤的机制。方法将70只SD雌性大鼠(210±40)g随机分组,建立去势模型,灌胃60 d,可逆性结扎冠状动脉(冠脉)左前降支30 min,进行心功能数据实时监测;检测血清中雌激素和c... 详细信息

目的研究天香丹胶囊激活雌激素受体α(ERα)抑制铁死亡减轻心肌缺血损伤的机制。方法将70只SD雌性大鼠(210±40)g随机分组,建立去势模型,灌胃60 d,可逆性结扎冠状动脉(冠脉)左前降支30 min,进行心功能数据实时监测;检测血清中雌激素和cTnI含量;检测心肌组织中丙二醛(MDA)、氧化型谷胱甘肽(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、Fe2+含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态;Western blot检测心肌中的蛋白ERα、长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)。结果去势后,各组比空白组雌激素水平显著降低;在给药60 d后,给药组比模型组雌激素水平升高,而肌钙蛋白(cTnI)含量降低;给药组比模型组Fe2+、MDA含量降低,GSH-PX、SOD含量增加;HE染色显示给药组对心脏表现出不同程度的保护作用;Western blot结果显示给药组比模型组中ERα、GPX4、FTH1的蛋白表达增强,而ACSL4蛋白的表达显著减小,差异有统计学意义(P天香丹胶囊激活ERα,升高GPX4、FTH1表达,降低ACSL4表达,降低氧化应激水平,抑制铁死亡,从而减轻心肌缺血损伤。

关键词：天香丹雌激素受体α 铁死亡心肌缺血

天香丹抑制P2X7/NLRP3表达改善动脉粥样硬化的作用机制研究

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中西医结合心脑血管病杂志 2024年第7期22卷 1225-1228页

作者：白银雪张夏夏吴丹丹任珊安冬青新疆医科大学新疆名医名方与特色方剂学重点实验室乌鲁木齐830054

目的:探讨天香丹对动脉粥样硬化小鼠嘌呤能配体门控离子通道7(P2X7)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的影响。方法:选取8周龄无特定病原体(SPF)级雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠30只,予以高脂饲料喂养12周,造模成功后... 详细信息

目的:探讨天香丹对动脉粥样硬化小鼠嘌呤能配体门控离子通道7(P2X7)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的影响。方法:选取8周龄无特定病原体(SPF)级雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠30只,予以高脂饲料喂养12周,造模成功后随机分为模型组、阿托伐他汀组、天香丹组,每组10只;另选取C57BL/6J小鼠10只予普通饲料喂养,设为空白对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-18、IL-1β、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的水平;免疫组化检测组织中P2X7、NLRP3的表达。结果:ELISA结果显示:与空白对照组相比,模型组IL-18、IL-1β、ATP水平升高(P天香丹组IL-18、IL-1β、ATP水平降低(P天香丹组P2X7、NLRP3表达均明显降低(P天香丹改善动脉粥样硬化与调节钾稳态抑制炎症小体的激活有关。

关键词：动脉粥样硬化天香丹核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 嘌呤能配体门控离子通道7 腺嘌呤核苷三磷酸实验研究

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基于PI3K/AKT信号通路探讨天香丹调节血小板活化、聚集的机制

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基于PI3K/AKT信号通路探讨天香丹调节血小板活化、聚集的机制

作者：何欢新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过研究天香丹调控PI3K/AKT途径,探讨天香丹调节血小板活化、聚集改善动脉粥样硬化以及血栓形成的作用及其机制。方法:(一)天香丹体外用药抗血小板作用及其机制研究:取60只SPF级C57BL/6雄性小鼠中提取PRP,LDH试剂盒检测天香丹对... 详细信息

目的:通过研究天香丹调控PI3K/AKT途径,探讨天香丹调节血小板活化、聚集改善动脉粥样硬化以及血栓形成的作用及其机制。方法:(一)天香丹体外用药抗血小板作用及其机制研究:取60只SPF级C57BL/6雄性小鼠中提取PRP,LDH试剂盒检测天香丹对血小板的毒性作用,选择天香丹体外用药的合适浓度;将PRP分为空白组、模型组、天香丹组(100μg/ml)、LY294002组(10μmol/L)进行体外用药处理,再加入10μmol/L的ADP刺激;流式细胞仪检测血小板P-选择素的表达,酶标仪比浊法检测血小板的聚集率,扫描电镜观察血小板表面形态变化,Western blot技术检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。(二)天香丹保护内皮细胞功能抗血小板改善AS作用机制研究:取52只Apo E雄性小鼠,高脂饲料喂养8周建立AS模型,取14只正常C57BL/6雄性小鼠普食喂养作空白组(蒸馏水),模型建立成功后按照随机数字表法分为模型组(蒸馏水)、天香丹组(2.73g/kg·d)、阿司匹林组(11.38mg/kg·d)、Akt抑制剂组(7.58mg/kg·d),灌胃给药8周后取材。提取PRP,采用酶标仪比浊法检测ADP刺激的血小板聚集率,透射电镜观察血小板内部颗粒释放的情况;取血清ELISA检测ET-1、VEGF、NO水平;取胸主动脉HE染色观察AS斑块形成病理变化,Masson染色观察AS斑块胶原纤维病理变化,免疫组化观察VCAM-1蛋白表达情况;取腹主动脉提取蛋白采用Western blot技术检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。(三)天香丹改善Fe Cl损伤的左颈动脉血栓形成研究:取40只SPF级C57BL/6雄性小鼠,按照随机数字表法分为假手术组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、天香丹组(2.73g/kg·d)、阿司匹林组(11.38mg/kg·d),连续灌胃21天后,采用20%Fe Cl损伤小鼠左颈总动脉建立血栓模型,采用小动物超声检测系统观察颈动脉血栓形成及其血管腔情况,剪尾实验观察尾出血时间和出血量,剪取左颈动脉HE染色观察颈动脉血栓形成病理变化;制备PRP,采用酶标仪比浊法检测ADP刺激的血小板聚集率,Western blot技术检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果:(一)天香丹体外用药抗血小板作用及其机制研究:1.LDH结果显示,天香丹浓度在100μg/ml对血小板毒性作用最小;2.流式细胞术结果显示,与模型组相比,天香丹能明显抑制血小板CD62-P表达(P天香丹明显降低血小聚集率(P天香丹组血小板呈散在分布,表面形态较模型组明显改善;5.Western blot结果显示,与模型组比较,天香丹组p-PI3K、p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达降低(P天香丹保护内皮细胞功能抗血小板改善AS作用机制研究:1.ELISA结果显示,与模型组相比,天香丹可以降低ET-1水平,提高NO、VEGF水平(P天香丹可以明显减少AS斑块形成以及斑块形成面积(P天香丹组AS斑块形成减少,抑制胶原纤维分解;4.免疫组化结果显示,与模型组相比,天香丹组VCAM-1的表达降低(P天香丹能明显降低血小板血小板聚集率(P天香丹组胞内颗粒含量丰富,OCS开放不明显;7.Western blot结果显示,与模型组比较,天香丹组p-PI3K、p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达降低(P天香丹改善Fe Cl损伤的左颈动脉血栓形成研究:1.小动物超声显示模型组左侧颈总动脉内中膜不规则明显增厚,血管管径明显狭窄,与模型组比较,天香丹组能够明显减轻颈动脉血栓形成以及管腔狭窄程度(P天香丹组尾出血时间和出血量有所延长,但差异无统计学意义(P>0.05);3.酶标仪结果显示与模型组相比,天香丹可以抑制血小板聚集率(P天香丹组血栓形成病理状态明显改善;5.Western blot结果显示,与模型组比较,天香丹组p-PI3K、p-AKT、p-ERK1/2蛋白表达降低(P天香丹抑制ET-1水平,提高NO、VEGF表达改善AS内皮功能障碍;降低VCAM-1表达,减轻血小板在血管内皮上的黏附;降

关键词：动脉粥样硬化动脉血栓血小板天香丹 PI3K/AKT信号通路

基于Nrf2/ARE信号通路探讨天香丹对tBHP诱导的脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用及机制研究

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基于Nrf2/ARE信号通路探讨天香丹对tBHP诱导的脐静脉内皮细胞氧化...

作者：辛锦钰新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:1.评价天香丹预处理对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。2.从分子水平和Nrf2/ARE通路角度探讨天香丹抗氧化损伤的具体机制。方法:MTT法筛选tBHP和天香丹浓度,随后按照筛选出的药物浓度将HUVECs分为对照组、模型组... 详细信息

目的:1.评价天香丹预处理对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。2.从分子水平和Nrf2/ARE通路角度探讨天香丹抗氧化损伤的具体机制。方法:MTT法筛选tBHP和天香丹浓度,随后按照筛选出的药物浓度将HUVECs分为对照组、模型组、维生素C组（浓度为50μg/m L）和天香丹低、中、高剂量组（浓度分别为30、60、90μg/m L）,其中维生素C组和天香丹低、中、高剂量组各加入对应浓度含药无血清培养液预处理12h,对照组和模型组则加入等量无血清培养液预处理12h,随后弃去培养液,除对照组外各组加入240μmol/L tBHP作用24h。微板法和WST法检测各组细胞LDH活性、GSH含量和SOD活力值;Elisa法检测各组细胞8-OHd G、e NOS表达情况;Hoechst 33258和JC-1检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡率及ROS含量;RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞e NOS、Caspase 3及Nrf2/ARE通路中m RNA及相关蛋白表达情况。结果:1.经tBHP作用24h后,模型组细胞存活率、SOD活力、GSH和e NOS的含量、线粒体膜电位较对照组均有明显降低（P＜0.05）,LDH释放量、凋亡率和8OHd G含量明显升高（P＜0.05）,经维生素C和各剂量天香丹预处理后,与模型组相比较,各组细胞存活率、SOD活力、GSH和e NOS的含量、线粒体膜电位均明显升高（P＜0.05）,LDH释放量、凋亡率以及8OHd G含量明显降低（P＜0.05）。2.RT-qPCR和Western blot结果显示,相较对照组,模型组Keap1蛋白表达有所升高（P＜0.05）,Nrf2及通路下游CAT、NQO1、HO-1、GCLM等抗氧化因子m RNA及相应蛋白表达有所降低（P＜0.05）,经维生素C及各剂量天香丹预处理后,各组细胞Keap1 m RNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,Nrf2及通路下游抗氧化因子CAT、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM m RNA及相关蛋白表达升高（P＜0.05）。结论:天香丹可通过激活Nrf2/ARE信号通路,促进抗氧化因子的表达,提高HUVECs抗氧化能力,并部分逆转tBHP诱导的细胞凋亡,减轻细胞氧化损伤,从而改善冠脉微循环障碍。

关键词：氧化应激 tBHP 天香丹人脐静脉内皮细胞 Nrf/ARE信号通路

天香丹对冠状动脉微循环障碍大鼠微血管内皮结构及功能的影响

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中西医结合心脑血管病杂志 2022年第19期20卷 3554-3559页

作者：古丽葛娜·萨吾尔刘伟马学宽安冬青新疆医科大学附属乌鲁木齐市中医医院乌鲁木齐830000 新疆名医名方与特色方剂学重点实验室乌鲁木齐830000 新疆医科大学附属中医医院乌鲁木齐830000 新疆医科大学中医药传承创新中心乌鲁木齐830000

目的探讨天香丹对冠状动脉微循环障碍(CMD)大鼠微血管结构变化及内皮功能的影响。方法选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、天香丹低剂量组、天香丹中剂量组、天香丹高剂量组及尼可地尔组,每组8只。建立大鼠... 详细信息

目的探讨天香丹对冠状动脉微循环障碍(CMD)大鼠微血管结构变化及内皮功能的影响。方法选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、天香丹低剂量组、天香丹中剂量组、天香丹高剂量组及尼可地尔组,每组8只。建立大鼠CMD模型,造模完成后,按照体表面积法,假手术组给予生理盐水灌胃,每日2 mL;模型组给予生理盐水灌胃,每日2 mL;天香丹低剂量组给予天香丹灌胃,每日0.81 g/kg;天香丹中剂量组予天香丹灌胃,每日1.62 g/kg;天香丹高剂量组给予天香丹灌胃,每日3.24 g/kg;尼可地尔组给予尼可地尔灌胃,每日1.35 mg/kg,连续给药28 d。观察大鼠心肌微血管超微结构;测定大鼠心肌微血管密度;检测血清一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平及心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平。采用脂多糖(LPS)诱导心肌微血管内皮细胞(CMECs)建立CMECs损伤模型,分为对照组、脂多糖组、天香丹组、脂多糖+天香丹组,检测各组细胞eNOS蛋白的表达水平及上清液NO水平。结果在动物水平上,与模型组比较,天香丹可减轻冠状动脉微血管内皮肿胀、减少微血栓、增加微血管密度(P天香丹中剂量组、天香丹高剂量组血清NO水平及NO/ET-1的比值明显升高(P天香丹组CMECs内eNOS蛋白表达水平及上清液NO水平增加(P天香丹对CMD大鼠心肌微血管结构及内皮功能具有改善作用。

关键词：冠状动脉微循环障碍天香丹微血管结构内皮功能内皮型一氧化氮合酶

天香丹抑制血小板聚集改善颈动脉血栓形成的作用研究

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新疆医科大学学报 2022年第3期45卷 318-322页

作者：何欢张亚洁吴丹丹谢晓柳辛锦钰古丽葛娜·萨吾尔安冬青新疆医科大学中医学院新疆医科大学附属中医医院新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830011

目的采用三氯化铁(FeCl_(3))诱导小鼠颈动脉血栓模型,研究天香丹对颈动脉血栓形成的抑制作用。方法取 40 只 SPF 级健康雄性 C57BL/6 小鼠,随机分为假手术组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、天香丹组(2.7 g·kg^(-1)·d^(-1))、阿司匹林组(... 详细信息

目的采用三氯化铁(FeCl_(3))诱导小鼠颈动脉血栓模型,研究天香丹对颈动脉血栓形成的抑制作用。方法取 40 只 SPF 级健康雄性 C57BL/6 小鼠,随机分为假手术组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、天香丹组(2.7 g·kg^(-1)·d^(-1))、阿司匹林组(11.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)),预防性给药 21 d 后,用 20%FeCl_(3)溶液损伤小鼠左颈总动脉,建立颈动脉血栓模型。采用小动物超声影像系统检测各组造模前后血管管径变化;剪尾实验检测天香丹对小鼠尾出血时间、出血量的影响;取血浆采用酶标仪比浊法测定天香丹对二磷酸腺苷(ADP)刺激血小板后聚集率的影响;取左颈总动脉 HE染色观察天香丹对颈动脉血栓形成的病理状态。结果与模型组比较,天香丹组造模后血管管径增大、ADP 诱导的血小板聚集率降低,差异均有统计学意义(P天香丹组小鼠尾出血时间和出血量都有所降低,且差异有统计学意义(P天香丹可改善 FeCl_(3)诱导的左颈总动脉病理状态。结论天香丹可抑制血小板聚集率,改善颈动脉血栓形成,并且对出血时间和出血量影响较小,为临床防治血栓性疾病提供实验依据。

关键词：天香丹血小板聚集动脉血栓动脉粥样硬化超声检测

天香丹对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

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中医药学报 2022年第1期50卷 18-22页

作者：辛锦钰张亚洁古丽葛娜·萨吾尔何欢任珊安冬青新疆医科大学中医学院新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830011

目的:探讨天香丹对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用。方法:将HUVECs分为对照组、模型组、阳性对照药(维生素C)组和天香丹剂量组(30、60、90μg/mL)。MTT法筛选tBHP最佳造模浓度,并评价天香丹对内皮细胞氧化损伤的保护作用;微... 详细信息

目的:探讨天香丹对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用。方法:将HUVECs分为对照组、模型组、阳性对照药(维生素C)组和天香丹剂量组(30、60、90μg/mL)。MTT法筛选tBHP最佳造模浓度,并评价天香丹对内皮细胞氧化损伤的保护作用;微板法和WST法检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)表达情况;显微镜下观察各组细胞形态学变化,Hoechst 33258荧光染色法检测各组细胞凋亡情况。结果:经tBHP诱导24 h后,模型组细胞存活率、SOD活性和GSH含量较对照组显著降低(P天香丹预处理后,与模型组相比较,各组细胞存活率、SOD活性和GSH含量显著增加,LDH的释放和细胞凋亡率得到减轻(P天香丹具有保护HUVECs免于氧化损伤的作用,其机制可能与抗氧化通路的激活,抗氧化能力的增强及逆转细胞凋亡有关。

关键词：氧化应激 tBHP 天香丹人脐静脉内皮细胞