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天然抗体3B4的抗金黄色葡萄球菌作用及其机制研究

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天然抗体3B4的抗金黄色葡萄球菌作用及其机制研究

作者：顾伟杰第四军医大学

学位级别：硕士

天然抗体(natural antibodies, NAbs)是指在没有任何抗原免疫的情况下,正常机体产生的针对一种或多种自身或外源抗原的抗体[1],主要为IgM同种型,由未突变的胚系基因编码,具有维持自身稳定、抗感染、参与移植排斥、肿瘤监视等作用[2-4]。... 详细信息

天然抗体(natural antibodies, NAbs)是指在没有任何抗原免疫的情况下,正常机体产生的针对一种或多种自身或外源抗原的抗体[1],主要为IgM同种型,由未突变的胚系基因编码,具有维持自身稳定、抗感染、参与移植排斥、肿瘤监视等作用[2-4]。抗感染是天然抗体的重要功能,天然抗体与补体、单核-巨噬细胞等一起构成了机体抵御感染的第一道防线。通过多反应性,天然抗体可以和多种病原体结合。天然抗体主要结合微生物表面保守的结构,通过与Toll样受体等PRR相似的方式发挥对病原体的识别,并在细菌、病毒、真菌、寄生虫等的感染中发挥重要的保护作用。 B1细胞是产生天然抗体的主要细胞。目前研究认为成熟B细胞分为B1细胞、滤泡B细胞和边缘区B细胞三个亚群,其中B1细胞是近10余年来发现并命名的B细胞亚群,主要位于腹腔和胸膜腔,在天然免疫、自身免疫和粘膜免疫中具有重要的作用[5-6]。以往研究发现B1细胞缺陷的小鼠对细菌等病原微生物高度易感,然而,关于天然抗体和B1细胞在病原体感染时的效应机制尚不明确[7]。以往主要应用混合的血清天然抗体、分泌型IgM缺陷的小鼠和CD19转基因小鼠模型[8]以及B1细胞移植实验进行天然抗体及B1细胞在抗感染中作用的研究,取得了很多重要的结论。然而,由于没有纯化的特异性天然抗体及高天然抗体滴度转基因小鼠模型,使得关于天然抗体和B1细胞的作用机制的研究一直受到制约。近年来,随着耐药金黄色葡萄球菌的不断出现以及免疫受损人群增多,耐药金黄色葡萄球菌引起的感染越来越受到人们重视,成为医院感染的重要死亡原因之一。天然免疫特别是天然抗体在抗金黄色葡萄球菌感染中的作用引起了越来越多学者的兴趣。本课题组在前期工作中发现,来自未免疫小鼠B细胞的天然抗角蛋白自身抗体3B4可以识别金黄色葡萄球菌,并可以促进巨噬细胞对其的吞噬,从而提示天然抗体3B4在抵御金黄色葡萄球菌感染中可能具有的重要作用。结合天然抗体3B4转基因小鼠,我们对天然抗体的抗细菌感染作用进行了系统研究,并利用这一小鼠模型对B1细胞的应答进行了深入探索。一.天然抗体3B4的体外抗金黄色葡萄球菌作用采用ELISA、流式细胞术检测3B4对金黄色葡萄球菌的结合,结果发现天然抗体3B4可以结合于金黄色葡萄球菌表面的抗原。天然抗体3B4及对照抗体(MOPC)与金黄色葡萄球菌作用后,分别与小鼠腹腔细胞共孵育,结果菌落形成实验显示3B4作用组菌落形成单位少于对照组,流式细胞术检测到3B4作用组的吞噬指数显著高于同型对照,表明天然抗体可以促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬。二.利用转基因小鼠进行抗金黄色葡萄球菌感染的在体研究金黄色葡萄球菌腹腔接种后观察小鼠菌负荷、中性粒细胞浸润、炎症因子浓度等。结果发现,转基因小鼠的腹腔、肾脏细菌负荷显著低于对照小鼠;转基因小鼠腹腔中性粒细胞数显著低于对照小鼠,炎症因子IL-12、IFN-γ浓度与对照鼠相比无明显差异,而IL-6、IL-10、MCP-1、TNF-α浓度显著低于阴性对照小鼠。表明转基因小鼠对于金黄色葡萄球菌腹腔感染具有良好的抵抗。三.天然抗体3B4及B1细胞的作用机制研究流式细胞仪检测发现转基因小鼠腹腔细胞吞噬指数显著高于阴性对照小鼠。ELISA法检测转基因小鼠,阴性对照小鼠腹腔冲洗液总IgM、抗角蛋白IgM、抗金黄色葡萄球菌IgM水平。结果显示,转基因小鼠与阴性小鼠的总IgM水平无显著差异,但转基因小鼠的腹腔抗角蛋白IgM水平显著高于对照小鼠,并且转基因小鼠的腹腔冲洗液中抗金黄色葡萄球菌的IgM浓度显著高于对照小鼠。与腹腔抗角蛋白/金黄色葡萄球菌滴度相一致,感染后转基因小鼠的腹腔浆细胞数显著增多,提示细菌刺激后导致B细胞活化并转化成浆细胞。进一步检测了B1细胞的增殖,发现转基因小鼠的B1a细胞增殖显著强于对照小鼠,提示基于对病原体的识别,转基因小鼠的腹腔B1细胞发生了显著的活化和增殖,分泌大量的抗体,在抗细菌感染中发挥了重要的作用。同时,我们发现转基因小鼠腹腔内的B1细胞对细菌的结合/吞噬明显增加,为了区别是结合还是吞噬,进一步应用激光共聚焦显微镜进行了观察,发现B细胞胞浆内的绿色荧光颗粒,提示B1细胞可能吞噬了颗粒性细菌抗原,然而这一结果仍需大量的吞噬实验予以证实和完善。本研究从体外和在体水平揭示了天然抗体3B4对金黄色葡萄球菌感染的保护作用,并观察到B1细胞对金黄色葡萄球菌感染的应答,初步阐明了天然抗体及B1细胞抗感染作用的机制,丰富了对天然抗体的功能的认识,具有重要的理论创新意义。

关键词：天然抗体角蛋白吞噬细胞转基因小鼠金黄色葡萄球菌感染

基于动力学ELISA法检测血清天然抗体及其与HLA-DQB1携带差异分析的关联

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基于动力学ELISA法检测血清天然抗体及其与HLA-DQB1携带差异分析...

作者：代晓萌大连医科大学

学位级别：硕士

目的:本文基于常规酶联免疫吸附测定方法,建立了动力学酶联免疫吸附测定法,在无需改变原有仪器设备的基础上提高了试验的准确度和精密度,达到试验性能的提高;同时还使用此法对自身免疫病及其他疾病患者血清天然抗体进行检测,并在分子水... 详细信息

目的:本文基于常规酶联免疫吸附测定方法,建立了动力学酶联免疫吸附测定法,在无需改变原有仪器设备的基础上提高了试验的准确度和精密度,达到试验性能的提高;同时还使用此法对自身免疫病及其他疾病患者血清天然抗体进行检测,并在分子水平上研究HLA-DQB1基因携带差异与人体天然抗体的关联。方法:1.随机选择一份血清,使用常规酶联免疫吸附测定方法,针对其试验中的各个环节可能存在的影响因素进行多因素多水平定量分析,探究其对结果的影响,找出对实验结果影响较大的因素。2.建立动力学酶联免疫吸附测定的检测波长和方法,并对其线性、精密度和准确度进行考察,同时使用动力学酶联免疫吸附测定法对常规酶联免疫吸附测定法中存在的对试验结果影响较大的因素进行测定。3.随机选择50例患者血清,使用动力学酶联免疫吸附测定法对其四种天然抗体（抗卵清蛋白抗体、抗淀粉多糖抗体、抗卵核抗体、抗牛血清蛋白抗体）分布情况进行检测。同时采集其他疾病患者全血标本,采用PCR-SSP技术检测50例患者全血中的HLA-DQB1等位基因,分析HLA-DQB1等位基因携带差异与天然抗体分布的关联。4.随机选择176例自身免疫病患者血清,使用动力学酶联免疫吸附测定法对其四种天然抗体进行检测,分析各种自身免疫病人群天然抗体之间是否存在差异。结果:1.通过探索的酶联免疫吸附试验中的血清浓度、孵育温度、洗板次数、酶作用时间、加入终止液后测量时间、不同微孔板等6个影响因素,得出酶作用时间、血清浓度、微孔板、底物反应时间为影响最大的四种影响因素,其他三种因素孵育温度,洗板次数、加入终止液后测量时间虽然对测量结果也有部分影响,但是可在试验过程中通过严格控制反应条件得到有效控制。同时使用试剂盒验证结果,得出四种较大影响因素对试验结果的影响大小依次为:酶作用时间＞血清浓度＞微孔板＞底物反应时间,底物反应时间的影响大幅减少,几乎可以忽略（P＞0.005）。2.新建立的动力学酶联免疫吸附测定方法,其血清稀释试验具有良好的线性,在重复试验中,批内重复实验CV值为8.91%,批间重复实验CV值为8.02%,表明该方法具有良好的稳定性;在灵敏度考察试验中,常规方法检测的表面抗体阳性血清稀释倍度为10 mIU/ml,动力学方法为0.625 mIU/ml,表明本法具有良好的灵敏度和准确度;用本法测定影响因素,底物作用时间、微孔板对结果的影响基本得到消除,酶作用时间的影响也在较大程度上得到消除。3.在HLA-DQ B1基因多态性与天然抗体相关性分析中,发现人血清抗牛血清蛋白抗体的高低与HLA-DQB1*04位点呈现显著性相关。4.各组自身免疫病患者血清内天然抗体含量有显著差异。结论:1.动力学酶联免疫吸附测定方法具有良好的检测精密度和准确度,具有应用价值。2.HLA-DQB1*04基因可能与抗牛血清蛋白抗体的含量高低存在一定的关联。3.自身免疫病人群天然抗体含量有差异。

关键词：酶联免疫吸附测定动力学天然抗体 HLA 自身免疫病

天然抗体IgM 3B4体外抑制白念珠菌与宿主细胞相互作用的实验研究

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天然抗体IgM 3B4体外抑制白念珠菌与宿主细胞相互作用的实验研究

作者：陈新辉第四军医大学

学位级别：硕士

天然抗体(natural antibodies, NAbs)是指正常机体在没有任何抗原刺激的情况下由胚系基因编码的,正常机体产生的针对一种或多种自身和(或)外源性抗原的抗体,具有多反应性和低亲和力的特征。自NAbs被发现以来,人们对其可能具有的功能进... 详细信息

天然抗体(natural antibodies, NAbs)是指正常机体在没有任何抗原刺激的情况下由胚系基因编码的,正常机体产生的针对一种或多种自身和(或)外源性抗原的抗体,具有多反应性和低亲和力的特征。自NAbs被发现以来,人们对其可能具有的功能进行了一系列的深入研究。研究结果表明,NAbs是构成机体天然免疫系统的重要组成部分,在肿瘤监视、自身免疫、异体排斥、抗感染等方面均发挥着重要的作用。近年来,随着抗生素、皮质类固醇激素、免疫抑制剂等的广泛应用,以及HIV感染者增加、异种移植术的开展、肿瘤发病率的上升,真菌感染呈明显上升趋势,特别是白念珠菌引起的感染明显上升,越来越引起人们的重视。人们逐渐认识到体液免疫在抗真菌感染中起着重要作用,而天然体液免疫又构成了机体抵御外来感染的第一道防线,天然抗体的作用逐渐引起人们的重视。虽然有部分事实表明天然抗体可能具有抗真菌免疫的作用,但还缺乏直接的证据,为此倍受医学界学者的广泛关注。本课题组在国家自然科学基金(30330510、30300318, 30330550, 30425015)的支持下,应用未免疫小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合,成功筛选到了3株分泌IgM型天然抗体的杂交瘤细胞,它们的可变区基因与胚系基因高度同源,其中以天然抗体IgM 3B4与抗原的结合活性最好,并且已经证实在体外天然抗体IgM 3B4可以调理吞噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用和天然抗体IgM 3B4可以与白念珠菌孢壁的糖蛋白抗原结合。本研究在前期工作的基础上利用纯化得到的天然抗体IgM 3B4,在体外以白念珠菌为对象,初步探讨天然抗体IgM 3B4抗真菌感染的作用机制。本研究利用纯化得到的天然抗体IgM 3B4在体外证实:1在体外,不同浓度的天然抗体IgM 3B4可以抑制白念珠菌芽管生成,2在体外,天然抗体IgM 3B4可以抑制白念珠菌与宿主细胞之间的粘附;3采用ELISA和RT-PCR方法检测了天然抗体IgM 3B4在体外对感染了白念珠菌的脐静脉血管内皮细胞IL-6、IL-8、ICAM-1和VCAM-1表达和分泌的影响,证实天然抗体IgM 3B4明显促进了脐静脉血管内皮细胞上述细胞因子的表达和分泌。从而证实了天然抗体IgM 3B4抵抗白念珠菌感染的能力与其抑制白念珠菌芽管生成、抑制白念珠菌与宿主细胞之间的粘附以及促进脐静脉血管内皮细胞IL-6、IL-8、ICAM-1和VCAM-1的表达和分泌有关。

关键词：天然抗体白念珠菌血管内皮细胞

利用人血清中天然抗体Anti-Rha靶向肿瘤细胞

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利用人血清中天然抗体Anti-Rha靶向肿瘤细胞

作者：刘旭凌浙江大学

学位级别：硕士

利用自身免疫系统的自体免疫治疗正逐渐成为肿瘤治疗中一种很有前景的治疗方法。自体免疫治疗即通过肿瘤细胞表面特异性抗原与血清中天然抗体结合,利用人体免疫系统杀死肿瘤细胞,这样就避免了化学或者物理疗法所带来的副作用。糖基化是... 详细信息

利用自身免疫系统的自体免疫治疗正逐渐成为肿瘤治疗中一种很有前景的治疗方法。自体免疫治疗即通过肿瘤细胞表面特异性抗原与血清中天然抗体结合,利用人体免疫系统杀死肿瘤细胞,这样就避免了化学或者物理疗法所带来的副作用。糖基化是一种重要的蛋白翻译后修饰,可以将其作为肿瘤免疫治疗的治疗靶点。有文献报道人血清中存在丰富的糖链天然抗体,如anti-α-Gal、anti-Rhamnose、 anti-Forssman (GalNAc α 1-3GalNAcP)、anti-Mamnose、anti-GalNAc等,其中对anti-α-Gal、anti-Rhamnose的研究近几年来比较热门,多是利用这些抗体进行一些疾病尤其是肿瘤免疫治疗方法的研究。代谢糖工程是一种通过细胞代谢对活细胞的糖基复合物进行特异性糖基修饰的技术。利用这种技术可以将带有生物正交功能基团的天然糖基类似物加到细胞表面,再对其进行进一步修饰来作为检测靶点。叠氮就是这样一种生物正交功能基团,通过叠氮与炔基的环加成反应可以对细胞表面进行进一步修饰。有文献报道唾液酸生物合成途径对于非天然的N-乙酰甘露糖胺(N-acetylmannosamine, N-ManNAc)类似物具有兼容性。基于此原理我们用一种带有叠氮基团的N-ManNAc类似物,即N-ManNAz,作为代谢前体处理细胞使叠氮在细胞表面表达,再利用叠氮基与炔基的点击化学反应将带有炔基的鼠李糖(Rhamnose, Rha)标记到细胞表面,最后用人血清处理被标记的细胞。由于人类血清中存在大量的Anti-Rha天然抗体,可以特异性识别标记有Rha抗原表为的细胞,并通过补体依赖的细胞毒性(体内和体外)或者抗体依赖细胞介导的细胞毒性(体内)对标记有Rha的细胞进行杀伤。在这个过程中用到了代谢工程、生物正交化学工程和免疫学的相关方法,为治疗肿瘤提供了一种新策略。

关键词：鼠李糖自体免疫肿瘤治疗点击化学反应天然抗体

肾移植术后天然抗体对受者预后影响的相关性研究

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实用器官移植电子杂志 2020年第5期8卷 375-379页

作者：刘伟赵杰宋广平刘伟赵一贺李代红天津市第一中心医院输血科天津300192 天津市第一中心医院移植外科天津300192

目的探讨肾移植术后天然抗体(natural antibodies,Nabs)对移植肾长期存活与排斥反应的影响。方法回顾性分析44例发生抗体介导排斥反应肾移植受者的病例资料,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测Nabs,根据N... 详细信息

目的探讨肾移植术后天然抗体(natural antibodies,Nabs)对移植肾长期存活与排斥反应的影响。方法回顾性分析44例发生抗体介导排斥反应肾移植受者的病例资料,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测Nabs,根据Nabs的产生情况将受者分成Nabs+组(10例)和Nabs-组(34例),分别记录受者移植术后移植物存活情况,并同时观察发生排斥反应时各组肾功能和移植肾病理表现的差异。结果Nabs+组移植术后移植物存活率明显低于Nabs-组,差异有统计学意义(P=0.044)。移植后Nabs也与肾活检标本中移植物损伤的组织学征象的平均Banff评分增加相关。Nabs+组与Nab-组相比,肾小球滤过率估计值(estimated glomerular filtration rate,eGFR)有所下降,但差异无显著性(P>0.05)。结论Nabs与移植肾损伤及肾功能衰竭相关,从而提示Nabs可能参与了排斥反应的免疫机制。

关键词：肾移植天然抗体抗体介导排斥反应移植物损伤

基于微柱玻璃珠法自动血型分析探讨ABO血型天然抗体效价影响因素及临床意义

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基于微柱玻璃珠法自动血型分析探讨ABO血型天然抗体效价影响因素...

作者：陈海珊大连医科大学

学位级别：硕士

目的：对危重病人及随机住院病人血型天然抗体效价的检测，可以作为临床疾病诊断的辅助指标，为了更好的评价血型天然抗体效价，为临床检测提供更加直接，准确的依据。本文旨在研究不同人群ABO血型天然抗体效价的影响因素，在一些样本... 详细信息

目的：对危重病人及随机住院病人血型天然抗体效价的检测，可以作为临床疾病诊断的辅助指标，为了更好的评价血型天然抗体效价，为临床检测提供更加直接，准确的依据。本文旨在研究不同人群ABO血型天然抗体效价的影响因素，在一些样本统计的基础上，集中对年龄、性别、样本保存温度和时间及机体健康情况等因素进行分析，以评价不同因素对抗体效价的影响. 方法：本实验选取45名健康青年献血员，30名老年人，30名ICU患者，进行ABO血型抗体检测。通过倍比稀释方法，将血清加入ORTHO AutoVueInnova全自动血型分析仪进行效价检测，得出凝集强度，采用对应稀释度下凝集强度曲线的积分面积对比各个样本的抗体效价含量。并用奥林巴斯全自动生化分析仪对ICU患者和健康青年标本进行丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总蛋白、白蛋白、及肌酐进行检测，同时观察ICU组1个月内死亡率。以SPSS19.0统计软件进行实验数据分析，采用独立样本t检验和ANOVA方差分析比较各观察指标之间的差异。结果：ABO血型天然抗体效价随年龄增长而降低，青年组和老年组人群有显著差异（P＜0.05）。血清放置在4℃、37℃及室温保存一周左右抗体效价变化没有显著差异（P＞0.05），放置一个月左右4℃和室温有所降低，37℃效价衰减一半。血清放置在-25℃冰冻24h再复融，和对照组没有统计学显著性差异（P＞0.05），ICU组的转氨酶和肌酐均值高于健康对照组，蛋白含量均值低于健康组，血型天然抗体效价均值低于健康组，两组间有显著性差异（P＜0.05）。结论：4℃及室温保存血清一个月左右，效价变化不大，冻融血清对血型效价没有影响;血清在37℃保存半衰期大致为一个月，严重疾病及老年人天然抗体效价有相应的减少。

关键词：全自动血型分析系统天然抗体效价影响因素

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天然抗体3B4体外抗感染作用的初步探讨

天然抗体3B4体外抗感染作用的初步探讨

作者：安金刚第四军医大学

学位级别：硕士

天然抗体(natural antibodies，NAbs)可以定义为在没有任何抗原免疫的情况下，正常机体产生的针对一种或多种自身／外源性抗原的抗体。自从NAbs发现以来，人们对其可能具有的功能进行了深入而持久的研究。前期的研究结果表明，NAbs是天... 详细信息

天然抗体(natural antibodies，NAbs)可以定义为在没有任何抗原免疫的情况下，正常机体产生的针对一种或多种自身／外源性抗原的抗体。自从NAbs发现以来，人们对其可能具有的功能进行了深入而持久的研究。前期的研究结果表明，NAbs是天然免疫的重要组成部分，其在肿瘤监视、自身免疫、异体排斥、感染等方面均发挥着重要的作用。在对NAbs功能的研究中，人们发现最早也是研究较为透彻的是其抗细菌、病毒、寄生虫感染作用。如Boes等发现天然分泌型IgM缺陷小鼠对细菌感染的抵抗力较野生小鼠显著降低;Zinkemagel等发现天然IgM对病毒和细菌的感染具有显著的保护作用;Belperron等发现天然IgM影响Lyme病患者体内伯氏包柔(氏)螺旋体的生存率。然而在对于NAbs的研究中至少尚存在下列问题：(1)以往主要采用天然IgM缺陷或β链突变的动物模型以及混合的血清天然IgM进行研究，尚无单克隆NAbs体外抗感染模型使得关于作用机制的研究一直难以深入，这其中也包括天然抗体是否具有调理巨噬细胞吞噬病原菌的作用;(2)近年来，随着HIV感染者增加、异种移植术的开展、肿瘤

关键词：天然抗体金黄色葡萄球菌白念珠菌吞噬芽管

体内天然抗体与HLA-DQB1等位基因的关联及其临床意义

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体内天然抗体与HLA-DQB1等位基因的关联及其临床意义

作者：周素芹大连医科大学

学位级别：硕士

目的：通过对随机人群及不同年龄、不同性别体检正常人群进行四种天然抗体（抗卵核抗体、抗卵清抗体、抗牛血清抗体和抗伤寒多糖抗体）水平检测,研究其分布特点及与年龄性别的关系,并探索其与HLA-DQB1等位基因的关联。以抗核抗体阳性病... 详细信息

目的：通过对随机人群及不同年龄、不同性别体检正常人群进行四种天然抗体（抗卵核抗体、抗卵清抗体、抗牛血清抗体和抗伤寒多糖抗体）水平检测,研究其分布特点及与年龄性别的关系,并探索其与HLA-DQB1等位基因的关联。以抗核抗体阳性病人作研究对象探讨其临床意义。方法： 1.随机选取大连机车医院体检正常人群86人（男36人、女50人,平均年龄28.52岁）。同批样品在相同浓度卵核抗原包被酶标板上连续做5次,每天一次,一次13个样品;同一样本在相同浓度卵核抗原包被酶标板上连续做16次,每天一次。分别测定各个样品每次抗卵核抗体对数单位,分析基于酶联免疫建立的测定抗卵核抗体方法的精密度和稳定性。 2.从大连血液中心和大连医科大学附属二院体检中心随机挑选体检正常人群,其中＞70岁（老年）男18人、女19人,＜40岁（青年）男33人、女41人。分为老年组与青年组及男性组与女性组。用新建立的方法检测其他三种天然抗体,探讨该方法是否适用于这三种抗体的检测。研究四种天然抗体在不同年龄、不同性别人群中的分布情况。 3.在正常健康体检人群中随机抽取86人（男36人、女50人,年龄28.52±12.84）,对其静脉采血于EDTA抗凝管,提取其DNA。用PCR技术进行HLA-DQB1等位基因的扩增,用新建立的方法检测其四种天然抗体的抗体对数单位含量。探讨四种天然抗体与HLA-DQB1等位基因的关联。 4.选取抗核抗体阳性病人（大连医科大学附属一院检验科35人、附属二院检验科23人）作为疾病组,其中男12人、女46人,平均年龄41.93。在体检正常人群中随机挑选86人（男36人、女50人,平均年龄28.52）作为对照组。测定四种天然抗体的抗体对数单位含量方法同前,探究该抗体在抗核抗体阳性人群体内的分布特点及临床意义。结果： 1.同批样品在相同浓度卵核抗原包被酶标板上连续做5次,CV（%）平均值是7.157,P=0.013＜0.05。同一样本在相同浓度卵核抗原包被酶标板上连续做16次,所测得的16次抗体对数单位CV（%）为4.8。一般变异系数（CV）定为10%以内。 2.同一样本在卵清抗原板、牛血清抗原板、伤寒多糖抗原板上连续做16次,每天一次,测定相应抗体对数单位,所测得的相应抗体对数单位CV（%）分别为7.2、8.6、5.2。抗卵核抗体（P＜0.01）和抗伤寒多糖抗体（P＜0.05）在不同年龄组差别有统计学意义,且在老年组中该抗体对数单位含量偏低;其余两种抗体（P＞0.05）在不同年龄组无显著性差异。这四种天然抗体在不同性别组均无显著性差异（P＞0.05）。 3.体检正常人群中有无HLA-DQB1*02位点,其对应的抗牛血清抗体对数单位（P＜0.01）和抗伤寒多糖抗体对数单位（P＜0.05）均有显著性差异,且都是HLA-DQB1*02位点阴性者,该抗体对数单位偏高;体内有无HLA-DQB1*06位点,其对应的抗牛血清抗体对数单位水平有显著性差异（P＜0.05）,且HLA-DQB1*06位点阳性者,该抗体单位水平偏高。HLA-DQB1*03.04.05位点与四种天然抗体的抗体对数单位高低均无关。 4.在对照组和疾病组抗牛血清抗体对数单位水平有显著性差异（P＜0.01）,且抗核抗体阳性人群该抗体偏高。其它三种天然抗体在对照组和疾病组均无显著性差异（P＞0.05）。结论： 1.基于酶联免疫建立的检测天然抗体方法较一般方法为好,精密度高、稳定可靠,可被广泛用于检测体内天然抗体。 2.体内抗卵核抗体和抗伤寒多糖抗体受年龄影响,其它两种抗体未发现这种现象。这四种天然抗体水平均不受性别影响。 3.HLA-DQB1*02位点是抗牛血清抗体和抗伤寒多糖抗体的抑制基因,HLA-DQB1*06位点是抗牛血清抗体的促发基因。在这四种天然抗体等位基因HLA-DQB1*03.04.05位点未表现促发或抑制作用。 4.抗核抗体阳性人群中抗牛血清抗体对数单位水平偏高,提示抗牛血清抗体可作为抗核抗体阳性人群筛查的一个指标,可能对病情评估有一定的指导意义。

关键词：天然抗体 HLA-DQB1 抗核抗体

长期献血对男性献血者血型天然抗体、一般健康状况及有关血液学指标的影响

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长期献血对男性献血者血型天然抗体、一般健康状况及有关血液学指...

作者：陈玫大连医科大学

学位级别：硕士

目的:本文通过对血型抗体进行定量分析,以及对机体的免疫状态包括CD4、CD8,CD34及NK细胞进行研究,来评价长期的血液捐助行为对机体免疫功能的影响。方法:本实验选取38名年均献血（全血或机采血小板）≥2次,累计≥30次的非AB型男性... 详细信息

目的:本文通过对血型抗体进行定量分析,以及对机体的免疫状态包括CD4、CD8,CD34及NK细胞进行研究,来评价长期的血液捐助行为对机体免疫功能的影响。方法:本实验选取38名年均献血（全血或机采血小板）≥2次,累计≥30次的非AB型男性献血者作为观察组,以34名无献血经历的非AB型男性为对照组,进行一般生理健康、精神心理健康、社会功能和生活态度等方面的问卷调查和血液检测。血液检测包括使用流式细胞仪对血清中IgG抗A（B）抗体定量和CD4、CD8、CD34及NK细胞测定,同时对流式细胞仪定量检测IgG抗A（B）抗体的方法进行重复性试验和回收试验,来验证该方法的精确度与重复性。采用Sysmex全自动血细胞计数仪对血小板、红细胞、白细胞及血红蛋白计数。以SPSS12.0统计软件进实验数据分析:采用独立样本t检验比较观察组与对照组各项观察指标之间的差异。结果:在健康状况、焦虑和失眠、社会功能障碍和沮丧程度等方面,长期献血人群和不献血人群没有显著性差异（P＞0.05）。流式细胞仪定量检测IgG抗A（B）抗体的重复性试验中,其批内相对标准偏差均值为2.97%,回收试验的回归曲线相关性均大于0.95。B型血组间IgG抗体有显著性差异（P＜0.05）,对照组的均值低于观察组。A型和O型组间无明显差异。CD4/CD8的比值和CD34+的数量两组间无显著性差异（P＞0.05）。但观察组NK细胞数明显高于对照组,血小板计数均值却低于对照组（仍在正常范围内）,两组间均有显著性差异（P＜0.05）。结论:流式细胞仪检测IgG抗体含量的方法是有效、可靠的;长期献血对B型献血者天然抗血型抗体的产生有影响;长期献血对NK细胞的数量升高可能有促进作用;长期献血使外周血中血小板数量有所降低。

关键词：流式细胞术长期献血者天然抗体调查问卷血液学指标