检索结果-南通市图书馆

作者：徐敏复旦大学

学位级别：硕士

虽然高效免疫抑制剂的应用明显提高了肝移植患者生存率,但急性排斥反应(Acute Rejection,AR)仍然是肝移植术后最严重的并发症之一,其发生率仍然高达40%～60%,因此急性排斥仍然是肝移植研究的重点之一。急性排斥是由受体效应细胞对供体... 详细信息

虽然高效免疫抑制剂的应用明显提高了肝移植患者生存率,但急性排斥反应(Acute Rejection,AR)仍然是肝移植术后最严重的并发症之一,其发生率仍然高达40%～60%,因此急性排斥仍然是肝移植研究的重点之一。急性排斥是由受体效应细胞对供体的同种异体抗原识别后而产生的一个免疫过程,在此过程中同种异体抗原通过抗原呈递细胞的MHC—II类分子呈递给效应细胞,随者各种细胞因子分泌受体免疫系统激活。传统研究认为,Th1/Th2动态平衡和AR的预后相关,在肝移植和肾移植中Th1功能激活在AR发生前就被观察到,Th2细胞则被证实与移植物耐受相关。然而最近,随着一个新的细胞系Th17的发现及对iTreg细胞免疫作用研究的日益深入,Th17/iTreg平衡已成为Th1/Th2平衡在移植免疫中的作用的一个重要补充,然而迄今Th17和iTreg在移植免疫中的作用尚未完全阐明。新兴的蛋白组学,是对基因组所编码的所有蛋白质进行研究的学科。通过蛋白质组学使我们对肝移植急性排斥的发生、发展有了更详尽的理解,并能够通过发现特异的分子标志物来预测患者预后和治疗效果。基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术(matriXassistcd laserdesorption,time of flight/time of flight,mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF MS)和LTQ是蛋白质组学新兴运用的技术,已有众多的研究组利用该技术在患者体液中发现了能够早期诊断疾病的标志物;本课题研究希望通过研究在肝移植术后大鼠血清中寻找与急性排斥相关的分子标记物,并对具有潜在价值的标记进行调控。第一部分LEWIS→BN大鼠肝移植急性排斥模型的建立本部分研究目的是建立近交系LEWIS→BN大鼠原位肝移植急性排斥模型,分析手术成功率的影响因素及该模型的稳定性,并总结该模型区别于常规使用的SD、Wistar等封闭群大鼠间原位肝移植的特点结果: ***→BN及BN→BN,总共29对大鼠OLT成功率为74%,手术失败原因构成:肝上下腔静脉出血(4对);门静脉结构性错误(3对);急性肺部损伤,可能与乙醚过度吸入有关(2对);尸体解剖未发现明显死亡原因(1对)。 2.供受体体重差异对手术的影响可通过控制体重及调整手术技术改善,抗生素对术后生存有明显影响。 3.与封闭群大鼠肝移植比较,该模型具有自身特点即在排斥出现的时间、程度和结果转归上表现并非完全一致,然而所有受体均出现了排斥现象。第二部分T-bet、GATA-3、RORγt和FOXP3细胞在大鼠肝移植术后动态变化的研究为了评估Th1,Th2,Th17和iTreg在肝移植急性排斥中的作用,我们使用近交系LEWIS大鼠做供体,BN大鼠做受体建立肝移植急性排斥模型,并应用Banff标准对AR急性分级,然后应用免疫组织化学方法检测Th1,Th2c,Th17和iTreg特征性表达的核转录因子以评估相应的作用。结果: ***→BN组未出现明显排斥现象,LEW→BN组出现不同程度的排斥,对照组、轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组各选取5例进行T-bet、GATA-3、RORγt和FOXP3细胞检测。 2.T-bet、GATA-3、RORγt和FOXP3细胞在同种异体移植物中的表达:与对照组相比,轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组中T-bet细胞数和RORγt细胞数显著升高(P值均大鼠肝移植急性排斥血清蛋白质组学研究本部分研究目的筛选大鼠肝移植术后与急性排斥相关的血清差异蛋白,为进一步寻找与预后相关的生物标记物提供研究基础。并对有意义的靶蛋白进行干预,观察干预对大鼠肝移植急性排斥的影响。结果: I.应用2D-DIGE技术发现,在对照组、轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组中,有35个生物标记表达差异有统计学意义(P<0.01)。 ***-TOF-TOF MS对具有统计学差异的30个蛋白进行鉴定,16个点鉴定出,剩余14个点使用LTQ鉴定出:血液结合素(hemopexin,HPX)结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)的前体Preprohaptoglobin、C3补体、C4补体、Alphal-Macroglobulin Receptor Binding Domain、Mbll Mannose-bindin

关键词：大鼠肝移植急性排斥 T-bet+,GATA-3+, RORγt+和FOXP3+细胞2D-DIGE MALDI-TOF/TOF MS LTQ

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单人直视下大鼠肝移植模型供肝获取不同灌注方式比较

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器官移植 2020年第3期11卷 356-361页

作者：李蕾李善宝汪涛沃琪曹婉悦徐军明上海交通大学附属第一人民医院普外科 200080

目的单人直视下建立大鼠肝移植模型,并探讨不同灌注方法对供肝质量的影响。方法在Kamada建立的"二袖套法"基础上改进手术细节,建立大鼠肝移植模型。根据不同的灌注方式将受体大鼠分为A(经腹主动脉灌注)、B(经门静脉灌注)两组。比较两组... 详细信息

目的单人直视下建立大鼠肝移植模型,并探讨不同灌注方法对供肝质量的影响。方法在Kamada建立的"二袖套法"基础上改进手术细节,建立大鼠肝移植模型。根据不同的灌注方式将受体大鼠分为A(经腹主动脉灌注)、B(经门静脉灌注)两组。比较两组的灌注效果、手术时间、手术成功率、术后肝功能、肝脏移植物病理学表现及生存情况等。结果灌注完成后,B组肝血窦内残留红细胞较A组多。A组在供肝灌注时间及供体手术时间上均较B组时间长,差异均有统计学意义(均为P大鼠肝移植术后3 d,两组受体丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TB)水平均较正常值明显升高;术后7、30 d,与A组比较,B组ALT、AST、TB水平均明显升高,差异均有统计学意义(均为P大鼠肝移植模型虽稍延长了灌注时间及供体手术时间,但灌注效果更佳,可减轻术后肝组织损伤,使肝功能更快地恢复正常水平。

关键词：供肝灌注经腹主动脉灌注经门静脉灌注大鼠肝移植改良二袖套法丙氨酸转氨酶天冬氨酸转氨酶总胆红素

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缺血预处理对大鼠肝移植早期的保护作用

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基础医学与临床 2008年第12期28卷 1317-1318页

作者：侯建存李玉民强喆何明彦天津市第一中心医院移植科天津300192 兰州大学附属第一医院普外科甘肃兰州730000 天津市第一中心医院麻醉科天津300192

缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)可调动机体内源性保护机制对组织或器官提供保护作用,越来越多地引起人们的关注[1]。本研究采用大鼠原位肝移植动物模型探讨IPC对肝脏及补体的作用。1实验1.1材料:健康雄性Wistar及SD大鼠各40... 详细信息

缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)可调动机体内源性保护机制对组织或器官提供保护作用,越来越多地引起人们的关注[1]。本研究采用大鼠原位肝移植动物模型探讨IPC对肝脏及补体的作用。1实验1.1材料:健康雄性Wistar及SD大鼠各40只,体重200~230g(陕西医学实验动物中心)。超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所);肿瘤坏死因子(TNFα)试剂盒(北京北方生物技术研究所);SABC补体C3免疫组化试剂盒(武汉博士德生物制品有限公司)。1.2大鼠肝移植动物模型的制备:采用二袖套法建立大鼠原位肝移植动物模型,其中供体为SD大鼠,受体为Wistar大鼠,受体术前禁食12h,自由饮水。具体手术方法详见参考文献[2]。1.3实验设计:将40对配对的大鼠随机分为IP组及对照组,每组20例,IP组在获取供肝前行阻断供肝血供10min,再灌注10min预处理,之后用冷肝素生理盐水经PV灌注;对照组在获取供肝前暂停止手术操作20min,之后用冷肝素生理盐水经PV灌注。两组供肝切取后置于4℃乳酸平衡盐溶液中保存60min,受体无肝期20min。移植后的各...

关键词：大鼠肝移植缺血预处理保护作用内源性保护机制早期原位肝移植动物模型 IPC

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CD8^+CD45RC^low调节性T细胞在大鼠肝移植自然免疫耐受中的作用机制

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中华实验外科杂志 2019年第5期36卷 849-851页

作者：白纯李先亮杨龙刘焕业寇建涛朱继巧马军吕少诚贺强首都医科大学北京100069 首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科 100020

目的探讨CD8^+CD45RC^low的调节性T细胞及相关细胞因子在大鼠同种异体原位肝移植耐受过程中的分布规律。方法近交系BN大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,双套袖法同种异体原位肝脏移植。实验分为:肝移植短期组10只,肝移植耐受组10只和对照... 详细信息

目的探讨CD8^+CD45RC^low的调节性T细胞及相关细胞因子在大鼠同种异体原位肝移植耐受过程中的分布规律。方法近交系BN大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,双套袖法同种异体原位肝脏移植。实验分为:肝移植短期组10只,肝移植耐受组10只和对照组6只,各组术后常规检测肝功能。苏木精-伊红(HE)染色用于判定移植物达到自然免疫耐受。流式细胞术分析外周血、移植物、淋巴结中淋巴细胞亚群的变化,Luminex技术进行细胞因子定量检测。结果有70%的移植术后大鼠自然免疫耐受。长期耐受组与对照组的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)比较,差异无统计学意义[(456±54)U/ml比(460±151)U/ml,(122±35)U/ml比(121±46)U/ml,P>0.05]。与早期移植实验组比较,在免疫耐受大鼠外周血中CD8+CD45RClowT细胞显著增加,移肝脏局部随着耐受时间的延长其相对含量不断增加;移植物周围淋巴结中该类细胞的表达差异无统计学意义(P>0.05);外周血中pDC在与对照组比较短期组明显增加。移植物局部细胞因子检测发现干扰素(IFN)-γ在早期升高,随后恢复到正常水平;白细胞介素(IL)-10出现持续升高的表现。结论在大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受过程中,CD8^+CD45RC^low调节性T细胞显著升高,并在外周血和肝脏中高表达,通过提高抑制性的细胞因子IL-10对长期免疫耐受起重要调节作用。

关键词：调节性T细胞大鼠肝移植免疫耐受白细胞介素-10 树突状细胞

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半乳凝集素-9在诱导大鼠肝移植免疫耐受中的作用

半乳凝集素-9在诱导大鼠肝移植免疫耐受中的作用

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作者：刘一鸣重庆医科大学

学位级别：硕士

目的通过上调半乳凝集素-9(Galectin-9)在大鼠肝脏移植急性排斥反应模型中的表达，探寻其在诱导大鼠肝脏移植免疫耐受中的可能作用机制。方法(1)运用改良Kamada“二袖套法”建立Lewis大鼠到BN大鼠的原位肝脏移植(OrthotopicLiverTransp... 详细信息

目的通过上调半乳凝集素-9(Galectin-9)在大鼠肝脏移植急性排斥反应模型中的表达，探寻其在诱导大鼠肝脏移植免疫耐受中的可能作用机制。方法(1)运用改良Kamada“二袖套法”建立Lewis大鼠到BN大鼠的原位肝脏移植(OrthotopicLiverTransplantationOLT)急性排斥动物反应模型。(2)受体随机分为3组，分别为转染组(n=10)、空白质粒对照组(n=10)以及生理盐水对照组(n=10)，转染组于冷缺血期使用无损伤血管夹夹闭供肝肝上下腔静脉、肝下下腔静脉以及门静脉，经由门静脉注入2ml滴度为1×109IU/ml的Galectin-9的腺病毒载体，保存60分钟;空白质粒对照组同样于移植肝脏冷缺血期夹闭三根主要血管，经门静脉灌注2ml滴度为1×109IU/ml空载体，保存60分钟;对照组采用上述同样的方法灌注0.9%生理盐水2ml。(3)术后第7天，三组分别处死5只大鼠，抽取下腔静脉血5ml，并切取肝脏中叶组织备检，余大鼠观察移植术后生存率。(4)肝脏标本经HE染色后在光学显微镜下观察肝脏组织病理学改变，Banff分级评定排斥程度;全自动生化分析仪检测各组总胆红素(TotalBilirubin，TBIL)、谷丙转氨酶(Alanineaminotransferase,ALT)以及谷草转氨酶(AspartateAminotransferase，AST)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肝脏组织中半乳凝集素-9、T-bet以及RORγt基因表达水平;蛋白免疫印迹法测量肝组织中干扰素γ(IFN-γ)和白介素-17(IL-17)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附法检测血清IFN-γ及IL-17的含量。结果(1)建立稳定Lewis-BN大鼠肝移植急性排斥模型。(2)术后七天转染组尚有4只大鼠存活，生存率80%，而空白质粒组及对照组均只有1只大鼠存活，生存率20%。转染组大鼠生存率明显改善(P＜0.05)(3)根据Banff评分，转染组肝组织评分为Ⅰ级，其余两组为Ⅲ级。(4)转染组、空白质粒组、对照组血清TBIL含量分别为：21.35±0.47μmol/L、89.46±17.42μmol/L、92.35±15.45μmol/L;ALT含量分别为：216.47±13.62U/L、912.56±44.21U/L、957.71±32.58U/L;AST含量分别为：136.68±21.32U/L、687.93±64.18U/L、697.37±53.42U/L;转染组TBIL、ALT以及AST含量明显低于其余两组(P＜0.05)(5)Real-TimePCR结果提示转染组、空白质粒组及对照组Galectin-9mRNA水平依次为1.14±0.05，0.46±0.03，0.49±0.07，转染组Galectin-9mRNA水平较其余两组明显增加(P移植肝脏组织病理改变，并通过清除效应Th1以及Th17细胞及其相关细胞因子的分泌，促使免疫平衡向Th2/Treg偏移，有助于诱导免疫耐受。

关键词：半乳凝集素-9 大鼠肝移植免疫耐受

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Treg联合imDC诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

Treg联合imDC诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

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作者：罗柳平福建医科大学

学位级别：硕士

目的探讨受体大鼠脾脏来源的Treg联合供体大鼠骨髓来源的imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力。方法 DA→Lewis大鼠同种异体原位肝移植100例,分5组:急排组、mDC组、imDC组、Treg组、imDC+ Treg组(共输入组);分别于移植前5d... 详细信息

目的探讨受体大鼠脾脏来源的Treg联合供体大鼠骨髓来源的imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力。方法 DA→Lewis大鼠同种异体原位肝移植100例,分5组:急排组、mDC组、imDC组、Treg组、imDC+ Treg组(共输入组);分别于移植前5d给Lewis大鼠尾静脉注射mDC、imDC、Treg、Treg+imDC细胞(细胞数:mDC 2×10个、imDC 2×10个、Treg 1x10个),于肝移植术后3d、7d、10d各处死4只,观察大鼠肝移植术后外周血肝功能(ALT和TBIL)、血清细胞因子水平(IL-2、IL-10、TGF-β)、移植肝急性排斥反应(RAI评分)、移植肝汇管区淋巴细胞凋亡的改变,分析各实验组大鼠生存时间。结果肝功能检测表明:imDC组、Treg组和共输入组移植后3d、7d、10d的肝功能优于急排组和mDC组,其中Treg与imDC共输入组肝移植大鼠术后ALT及TBIL升高程度低,恢复时间快。 ELISA检测表明:肝移植术后7d Treg与imDC共输入组外周血IL-10浓度高于急排组、mDC组、Treg组,但与imDC组相比差异无统计学意义(P>0.05);其外周血TGF-β浓度高于急排组、mDC组、imDC组,但与Treg组相比差异无统计学意义(P>0.05);其外周血IL-2浓度低于急排组、mDC组,但与imDC组和Treg组相比虽然浓度偏低,但无统计学差异(P>0.05)。急性排斥反应评分表明:Treg与imDC共输入组大鼠肝移植术后仅有较少量的单核细胞浸润,RAI评分1～5分,属非确定型急性排斥反应到轻度急性排斥反应,术后10d开始出现肝细胞再生,有少量的中性粒细胞浸润。mDC组大鼠肝移植术后3天就出现轻度急性排斥反应,7d后出现重度排斥反应,较急排组出现早,且程度重。而Treg组和imDC组大鼠肝移植术7d后才开始出现轻度排斥反应,10d后Treg组出现重度度排斥反应,imDC组仅出现中度排斥反应。 TUNEL染色表明:急排组和mDC组大鼠肝移植后肝脏组织汇管区仅有少量淋巴细胞凋亡,imDC组和Treg组肝脏组织汇管区淋巴细胞凋亡数量高于mDC组,但低于共输入组,共输入组肝脏汇管区淋巴细胞凋亡数量最多。同时,在大鼠肝移植术后3d、7d、10d中,mDC组汇管区淋巴细胞凋亡逐渐消失,而共输入组的汇管区淋巴细胞凋亡数量逐渐递增。肝移植术后生存时间观察表明:共输入组出现较长存活时间的大鼠,中位生存时间为37天,长于imDC(23d)组和Treg(15d)(P大鼠肝移植长期存活;Treg联合imDC诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受的能力显著增强,可显著延长同种异体肝移植大鼠的生存时间。

关键词：树突状细胞调节性T细胞免疫耐受大鼠肝移植急性排斥反应

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转录因子YY1在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用研究

转录因子YY1在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用研究

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作者：洪丽萍福建医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:肝移植是终末期良性肝病的首选治疗方法,免疫排斥反应是制约肝移植术后供肝存活的瓶颈。辅助性T细胞17(Helper T 17 cells,Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)在免疫排斥反应中起到关键作用,前者促进免疫排斥... 详细信息

研究背景及目的:肝移植是终末期良性肝病的首选治疗方法,免疫排斥反应是制约肝移植术后供肝存活的瓶颈。辅助性T细胞17(Helper T 17 cells,Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)在免疫排斥反应中起到关键作用,前者促进免疫排斥,而后者维持免疫耐受。阴阳1(Yin-yang 1,YY1)作为核转录因子,在许多生物学过程中发挥作用。研究发现,YY1可以通过启动白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的转录表达而促进Th17的分化,同时可以阻断叉头状转录因子p3(Forkhead box protein p3,Foxp3)的表达和活性来抑制Treg的分化和功能,从而导致Th17/Treg细胞失衡。而YY1介导的Th17/Treg细胞失衡对肝移植免疫排斥反应的作用,尚不可知。因此,本实验拟通过观察YY1在大鼠原位肝移植急性排斥模型供肝中的表达改变,过表达YY1质粒和诱导培养Lewis大鼠骨髓来源树突状细胞(Dendritic cells,DCs)及磁珠分选BN大鼠脾脏来源的CD4T淋巴细胞,进而探讨YY1在肝移植免疫排斥中的作用,为临床诊治提供相关思路及理论依据。研究方法:1)构建大鼠原位肝移植模型:采用的是改良式Kamada’s“二袖套法”,假手术组(Sham组):未做肝移植手术的Brown Norway大鼠(BN大鼠),同基因移植组(Syngraft组):供体为BN大鼠,受体亦为BN大鼠,异基因移植组(Allograft组):供体为Lewis大鼠,受体为BN大鼠。收集术后5 d及10 d的供肝组织和血清,对供肝组织进行形态学观察,利用免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining,IHC)检测CD3的表达,血清进行肝功能检测(AST、ALT),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-6及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平。2)将术后10 d的供肝组织(异基因移植组5例、同基因移植组3例)进行蛋白质组学分析,以蛋白质定量跑胶、预质谱数据库比对、标记效率为质量控制点进行样品的质控,以组间蛋白表达差异倍数大于1.2且P移植组及异基因移植组术后5 d和10 d移植肝组织中YY1的表达,通过定量聚合酶链反应(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测mRNA表达水平,利用IHC检测CD86的表达。4)构建YY1过表达质粒,利用293T细胞进行慢病毒的包装,然后进行病毒的浓缩和滴度测定。5)体外培养Lewis大鼠骨髓来源的DCs及磁珠分选BN大鼠脾脏来源的CD4T淋巴细胞。将YY1过表达慢病毒感染im DCs(Immature dendritic cells,im DCs)后利用倒置显微镜观察细胞形态,利用流式细胞术对其进行表型鉴定,通过流式细胞术检测Th1细胞和Th17细胞相关胞内细胞因子的含量。研究结果:1)成功构建了大鼠原位肝移植模型,术后5 d和10 d异基因移植组表现为急性排斥反应改变,汇管区CD3T淋巴细胞明显浸润,血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α的表达较同基因移植组高(P移植组相比,异基因移植组中差异表达蛋白有2175个上调,1101个下调。YY1蛋白在异基因移植组中是上调的,组间差异表达倍数为1.255且P=0.00307。3)大鼠原位肝移植术后10 d异基因移植组肝组织中YY1 mRNA的表达水平高于同基因移植组及假手术组(P移植组术后5 d YY1的蛋白表达量高于同基因移植组及假手术组(P移植组中YY1和CD86的IHC阳性表达均高于同基因移植组及假手术组。4)构建的YY1过表达质粒经测序后显示基因序列完全正确,慢病毒包装后进行滴度测定,结果为:5×10TU/m L、1×10TU/m L。5)分离培养Lewis大鼠骨髓来源的DCs,YY1过表达慢病毒感染im DCs的感染效率为80%左右,摸索得最适MOI值为15。流式细胞术显示:m DCs表面分子CD80、CD86及MHCⅡ的表达均高于im DCs,YY1过表达质粒组的DCs表面分子CD80、CD86和M

关键词：转录因子YY1 树突状细胞大鼠肝移植急性排斥反应

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AMPK激动剂在非热量限制大鼠肝移植急性排斥反应中的研究

AMPK激动剂在非热量限制大鼠肝移植急性排斥反应中的研究

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作者：董云昆明医科大学

学位级别：硕士

第一部分:大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立及经验总结[目的]通过不断练习建立稳定的大鼠肝移植急性排斥反应模型,为后续的实验奠定模型基础。[方法]通过经典的“二袖套”法进行大鼠肝移植手术,前期预实验使用SD大鼠进行模型建立的... 详细信息

第一部分:大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立及经验总结[目的]通过不断练习建立稳定的大鼠肝移植急性排斥反应模型,为后续的实验奠定模型基础。[方法]通过经典的“二袖套”法进行大鼠肝移植手术,前期预实验使用SD大鼠进行模型建立的练习。模型建立稳定后,使用Lewis大鼠作为供体,BN大鼠作为受体建立大鼠肝移植术后急性排斥反应模型。术后随机将大鼠分为2组,实验组:非热量限制使用AMPK激动剂组:术后自由进食外,每日使用AMPK激动剂二甲双胍给予灌胃注药处理,60mg/kg。对照组:作为非热量限制的对照组,自由进食,不做任何处理。[结果]预试验早期,肝移植术后48小时存活率:13%,平均无肝期时间:29.27±3.77min。预试验第二阶段中期肝移植手术后48小时存活率:40%,平均无肝期时间:25.07±1.33min。预试验第三阶段肝移植手术后48小时存活率:70%,平均无肝期时间:23.30±1.49min,大鼠肝移植模型建模稳定。正式实验总体肝移植手术成功率:76.6%,平均无肝期时间:21.15±2.25min,顺利建立肝移植急性排斥模型。[结论]通过经典的“二袖套”法,成功建立大鼠肝移植急性排斥反应模型,影响成功率的主要因素是无肝期时间及SHVC的吻合效果。通过建立大鼠肝移植急性排斥反应模型为后续的实验奠定基础。第二部分:AMPK激动剂在非热量限制对排斥反应的影响[目的]初步评估AMPK激动剂对非热量限制的大鼠肝移植术后术后急性排斥反应的作用。[方法]使用第一部分建立的大鼠肝移植急性排斥反应模型,分别于术后7天、10天、14天,收集各组的血清检测TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP表达情况,收集肝脏组织进行病理分析,按照Banff评分分析每组肝移植术后实验组及对照组排斥情况,使用RAI评分评估急性排斥程度。[结果]实验组和对照组术后7天、10天、14天血清TBIL、DBIL、IBIL以及ALT、AST、ALP水平均无统计学差异。取移植肝组织,病理切片HE染色,按照Banff标准评估排斥反应程度,使用对应的RAI评分做出急性排斥诊断。结果显示在肝移植术后早期的7天及10天,非热量限制条件下使用AMPK激动剂二甲双胍组急性排斥反应的程度较对照组有减轻。而14天则无明显差异。[结论]在非热量限制的条件下AMPK激动剂二甲双胍在大鼠肝移植急性排斥反应早期的7-10天内有减轻急性排斥反应的作用。第三部分:非热量限制条件下AMPK激动剂减轻大鼠肝移植术后排斥反应分子机制的研究[目的]在非热量限制条件下,探究AMPK激动剂在大鼠肝移植术后排斥反应中减轻急性排斥反应可能的分子机制。[方法]使用实验一取材的移植后大鼠的肝脏及血清,应用免疫组织化学染色技术,对实验组和对照组进行免疫组化染色。对比P-mTOR在实验组和对照组之间的差异,使用ELISA测量各组术后血清的IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ表达情况。并根据收集到的信息,探究非热量限制条件下,激活AMPK在抑制mTORC1对于大鼠肝移植术后急性排斥反应的影响。[结果]免疫组化显示使用AMPK激动剂二甲双胍激活了 AMPK,影响了 mTOR的磷酸化。实验组和对照组术后7天、10天、14天的IL-2、IL-4、IL-10表达均无差异,而IL-12及IFN-γ在术后7天、10天,实验组组和对照组二者指标存在差异。AMPK激活后,在急性排斥反应早期IL-12、IFN-γ在血清表达下调,二者在术后14天的表达则无明显差异。[结论]在非热量限制条件下,探究AMPK激活后,在早期延缓大鼠肝移植术后急性排斥反应的机制。其机制可能是通过抑制mTOR,在免疫代谢方面调节了 T细胞的代谢过程,延缓了 Th0向Th1的分化而发生作用。

关键词：大鼠肝移植急性排斥反应模型动物麻醉二甲双胍热量限制 AMPK 肝移植急性排斥反应免疫代谢

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单人显微操作下大鼠肝移植模型的建立

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大连医科大学学报 2021年第6期43卷 487-493页

作者：王洪东葛新兰潘可李崇辉大连医科大学附属第二医院肝胆胰外二科辽宁大连116023 解放军总医院肝胆外科研究所北京100853

目的评价新的肝上下腔静脉显微缝合方法、新的袖套和支架制作技术。方法将186只SD大鼠分为4组,前3组予肝移植,每组60只,供、受体各30只;第4组为假手术对照6只。肝移植第1组和第2组采用新的肝上下腔静脉缝合方法+新的单槽袖套,其中第1组... 详细信息

目的评价新的肝上下腔静脉显微缝合方法、新的袖套和支架制作技术。方法将186只SD大鼠分为4组,前3组予肝移植,每组60只,供、受体各30只;第4组为假手术对照6只。肝移植第1组和第2组采用新的肝上下腔静脉缝合方法+新的单槽袖套,其中第1组采用新的无损胆道支架,第2组采用传统的粗制支架。第3组采用传统的双定点肝上下腔静脉缝合方法+传统的多痕袖套+无损支架。第4组为开腹后仅游离肝周韧带的假手术组。记录肝上下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉的重建时长和无肝期时长,1周和1个月生存率。测定术后1个月肝功能,并明确有无血管扭转、血栓形成和胆汁瘤、胆道梗阻等并发症。结果第1组肝上下腔静脉显微缝合时间为(661±69) s、第2组(662±67) s,第3组(826±73) s,第1组、第2组均较第3组快,差异有统计学意义(P<0.05)。第1组肝下下腔静脉重建时间为(61±12) s,第2组(58±10) s,第3组(72±12) s;第1组门静脉重建时间为(73±11) s、第2组(76±10) s,第3组(91±17) s;第1组、第2组均较第3组快,差异有统计学意义(P<0.05)。第1组无肝期(758±68) s,第2组(760±67) s,第3组(939±73) s,第1组、第2组均短于第3组,差异有统计学意义(P<0.05)。第1组、第3组的胆道并发症发生率低于第2组。第1组、第3组的1周、1个月生存率均高于第2组。结论新的肝上下腔静脉显微缝合方法结合单槽袖套的重建时间短、显著缩短无肝期。无损胆道支架术后并发症更少。

关键词：大鼠肝移植显微外科静脉和胆管重建

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TGF-β_1与大鼠肝移植免疫耐受的关系

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岭南现代临床外科 2001年第1期1卷 25-26页

作者：刘超王捷熊茂明李俊中山医科大学孙逸仙纪念医院普外科 510120 德国埃森大学医学院移植与普通外科

在大鼠不同品系间行肝移植,某些品系的移植肝可以被受体自发性免疫耐受.例如将BN大鼠的肝脏移植到Lewis大鼠中可以发生自发性免疫耐受,但是反过来却发生急性排斥反应.在肝移植的实践中,由于供体的缺乏,促进了劈肝移植(splitting liver t... 详细信息

在大鼠不同品系间行肝移植,某些品系的移植肝可以被受体自发性免疫耐受.例如将BN大鼠的肝脏移植到Lewis大鼠中可以发生自发性免疫耐受,但是反过来却发生急性排斥反应.在肝移植的实践中,由于供体的缺乏,促进了劈肝移植(splitting liver transplantation)和活体肝移植(living liver transplantation)的迅速发展.在这两种术式中,均可能发生移植肝与受体体重之比小于正常,该移植物称为"小体积移植物"(small for size).移植后的"小体积移植物"如同肝切除一样发生肝再生现象.已有实验报道,肝再生可以诱导移植后排斥反应.我们的实验也发现,虽然Lewis大鼠能自发性耐受BN大鼠全肝移植后的急性排斥反应,但移植50%体积的BN大鼠却不能.鉴于转化生长因子-β1(TGF-β1)不仅是肝细胞增生中的主要负性调节因子,也是一强有力的免疫抑制因子,本实验研究了TGF-β1在BN和Lewis大鼠肝中的基因表达;移植肝再生中TGF-β1基因表达与排斥反应的关系.

关键词：大鼠肝移植肝体积肝组织 TGF 全肝移植免疫耐受

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