检索结果-南通市图书馆

作者：王立娜北京中医药大学

学位级别：硕士

含有马兜铃酸成分的中药及复方制剂品种繁多,且临床中仍有应用,因此,对含有马兜铃酸的中药及其复方制剂开展肾毒性安全评价工作十分必要,大青木香是马兜铃属植物广西马兜铃,其提取组分是通迪胶囊的重要组成部分之一。药物高内涵筛选分... 详细信息

含有马兜铃酸成分的中药及复方制剂品种繁多,且临床中仍有应用,因此,对含有马兜铃酸的中药及其复方制剂开展肾毒性安全评价工作十分必要,大青木香是马兜铃属植物广西马兜铃,其提取组分是通迪胶囊的重要组成部分之一。药物高内涵筛选分析技术(high content screening,HCS)是指在细胞水平研究与受试药相关细胞的生物学变化,研究受试药物和靶点之间彼此作用的关系,还能透过荧光染料标记不同指标并进行拍照,观察细胞形态等变化来评估受试药的毒性,从而针对受试药物的生物活性和毒性,完成早期、快速的高通量检测。本课题尝试利用高内涵技术建立体外肾细胞毒性筛选方法,对有肾毒性风险的中药开展体外肾毒评价工作,因此,通过肾毒性明确的药物考察高内涵肾细胞毒性筛选方法;以大青木香95%醇提组分、75%醇提组分水浸提组分为研究对象,基于HK-2肾细胞,通过MTT实验、LDH释放实验及高内涵肾细胞毒性分析实验对大青木香不同组分开展体外肾细胞毒性研究;通过动物整体实验对细胞实验结果的准确性进行验证并探讨大青木香肾毒特点。本文从体内药物代谢和毒理的角度出发,对艾迪注射液对顺铂的药代动力学及顺铂所致肝肾毒性的影响进行了探索研究,主要内容及结果如下：一、高内涵HK-2肾细胞毒性筛选方法的考察实验结果显示: 顺铂和马兜铃酸A可以检测到明确的HK-2肾细胞毒性,并且对于顺铂来说,最早发生变化的指标是细胞膜通透性的降低;对于马兜铃酸A来说,最早发生变化的指标是线粒体膜电位的升高和细胞膜通透性的降低,罗格列酮即使在药物浓度为最大血药浓度的1000倍情况下仍然不会检测到明显的HK-2肾细胞毒性。该结果与临床中的实际情况保持一致,以上结果说明基于HK-2肾细胞,利用高内涵平台可以用于对药物进行肾细胞毒性筛选工作,为药物体外肾细胞毒性的筛选提供了更为灵敏、高效的方法。二、大青木香不同提取组分体外肾细胞毒性研究1MTT法研究大青木香不同组分对细胞活力的影响实验结果显示：马兜铃酸A作用48h计算所得IC50值为52.58ug·mL-1,大青木香95%醇提组分作用48h计算所得IC50值为59.43 ug·mL-1,大青木香75%醇提组分作用48h其IC50值为122.6 ug·mL-1,对HK-2肾细胞活力的影响进行排序依次为马兜铃酸A>95%醇提组分>75%醇提组分>水浸提组分。2LDH释放实验研究大青木香不同组分对细胞膜的影响实验结果显示：马兜铃酸A在浓度为7.81～62.5ug·mL-1范围内,使细胞LDH释放率逐渐增加,95%醇提组分在浓度为125 ug·mL-1能够检测到其LDH释放率显著升高,在其余浓度下未见LDH显著升高;大青木香75%醇提组分和大青木香水浸提组分在实验浓度范围内,不能显著升高细胞LDH的释放率。3大青木香不同组分HK-2肾细胞毒性高内涵分析实验结果显示：大青木香95%醇提组分毒性在低浓度即可检出,比75%醇提组分毒性强;大青木香95%醇提组分与75%醇提组分在毒性早期以损伤细胞膜完整性为主,随着浓度升高会导致细胞凋亡增加,细胞增殖抑制明显,提示95%醇提组分以及75%醇提组分的毒性成分可能相同,但是含量不同;大青木香水浸提组分HK-2肾细胞毒性不明显,且对细胞影响以线粒体变化最为敏感,这一特征与95%以及75%醇提组分不同,提示我们水浸提组分毒性小,且其影响细胞的机制与95%以及75%醇提组分不同;三种成分毒性对比中,高内涵分析结果与MTT实验及LDH实验结果保持一致,与不同组分小鼠急性毒性结果一致,但是较MTT和LDH实验更加灵敏、直观,较动物更加经济、快速,说明利用高内涵技术可以实现对中药不同提取组分进行体外肾细胞毒性分析,不仅能够比较不同组分的毒性强弱,而且能根据指标变化情况对毒性机制进行简单探讨。三、大青木香整体动物肾毒性研究1大青木香不同提取组分小鼠急性毒性对比实验实验结果显示：大青木香95%乙醇提取组分按生药量计算小鼠灌胃给药的LD5o值为47.973 g·kg-1,大青木香75%7,醇提取组分按生药量计算小鼠灌胃给药的LD5o值为59.981 g·kg-1,大青木香水浸提组分按生药量计算小鼠灌胃给药的MTD为320 g·kg-1,小鼠死亡的时间主要集中在给药后的4-7天,大青木香3种组分对小鼠的急性毒性顺序为95%乙醇提取组分>75%乙醇提取组分>大青木香水浸提组分,该顺序与3种组分中马兜铃酸A成分的含量顺序一致。2大青木香95%醇提组分大鼠急性肾毒实验实验结果显示：大青木香95%醇提组分高剂量组与空白组相比,体重降低,肾脏系数升高;血清生化指标尿素、肌苷、碱性磷酸酶显著升高;尿常规检测显著异常,尿液NAG酶含量显著升高,中剂量组除尿液NAG酶含量显著升高外,其余各项指标均未见明显改变;肾脏病理切片可见高剂量组大鼠肾脏损伤严重,中

关键词：大青木香高内涵分析技术肾毒性体外实验

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大青木香水溶性成分HPLC指纹图谱研究

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广东化工 2018年第10期45卷 106-107页

作者：余渊王倩欧邦露马贤鹏肖雪贵州景诚制药有限公司贵州贵阳550018 广东药科大学中医药研究院广东广州510006

目的:建立大青木香水溶性成分的指纹图谱,为其质量控制提供比较全面快速的评价方法。方法:本文采用高效液相色谱法对大青木香建立高效液相指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件对8批大青木香水溶性成分的指纹图... 详细信息

目的:建立大青木香水溶性成分的指纹图谱,为其质量控制提供比较全面快速的评价方法。方法:本文采用高效液相色谱法对大青木香建立高效液相指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件对8批大青木香水溶性成分的指纹图谱进行分析。结果:建立了大青木香水溶性成分的指纹图谱,并确定15个共有峰,大青木香水溶性成分相似度均大于0.85。结论:该实验建立的大青木香HPLC指纹图谱可以为大青木香的质量控制提供科学的评价。

关键词：大青木香高效液相指纹图谱

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大青木香乙醇提取物HPLC指纹图谱研究

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广东化工 2018年第9期45卷 71-72页

作者：余渊王倩欧邦露马贤鹏肖雪贵州景诚制药有限公司贵州贵阳550018 广东药科大学中医药研究院广东广州510006

目的:建立大青木香乙醇提取物的HPLC指纹图谱。方法:采用COSMSIL 5C_(18)-MS-Ⅱ(4.6×250 mm)色谱柱,0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温25℃,对8批大青木香乙醇提取物进行HPLC指纹图谱研究... 详细信息

目的:建立大青木香乙醇提取物的HPLC指纹图谱。方法:采用COSMSIL 5C_(18)-MS-Ⅱ(4.6×250 mm)色谱柱,0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温25℃,对8批大青木香乙醇提取物进行HPLC指纹图谱研究,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)进行相似度评价。结果:建立了大青木香乙醇提取物指纹图谱,确定32个共有峰,大青木香乙醇提取物相似度均大于0.90。结论:指纹图谱及相似度评价技术可以作为控制大青木香质量的有效手段。

关键词：大青木香高效液相指纹图谱

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