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大青木化学成分及抗奶牛乳房炎活性组分纯化工艺研究

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大青木化学成分及抗奶牛乳房炎活性组分纯化工艺研究

作者：霍晓敏贵州民族大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎的抗生素防治,不仅诱导耐药菌的产生,也会残留至奶制品中,严重影响公共卫生安全。中草药临床应用广泛,安全性较高,且不易产生耐药,成为抗奶牛乳房炎药物研究的重要方向。大青木(Clerodendrum cyrotophyllum Turcz)具有清热解... 详细信息

奶牛乳房炎的抗生素防治,不仅诱导耐药菌的产生,也会残留至奶制品中,严重影响公共卫生安全。中草药临床应用广泛,安全性较高,且不易产生耐药,成为抗奶牛乳房炎药物研究的重要方向。大青木(Clerodendrum cyrotophyllum Turcz)具有清热解毒、凉血止血、祛风除湿的作用,是贵州省苗族地区常用的一种抗菌消炎药物。本研究首先通过大青木化学成分分离鉴定,探究抗奶牛乳房炎的活性组分,然后对活性组分进行提取、纯化工艺优化,并对活性组分的抗氧化活性进行测试。主要研究内容及结果如下:1、大青木中化学成分的研究对大青木醇提物采用各种色谱方法进行分离纯化,共得到18个化合物,分别为木栓酮(1)、α-amyrin palmitate(2)、Sambuculin A(3)、22-dehydroclerosterol(4)、Isopetasin(5)、Taraxasteryl palmitate(6)、豆甾醇(7)、22-dehydroclerosterol-3-O-β-D-(6’-O-margaroyl)-glucopyranoside(8)、3-O-β-D-galactopyranosyl-(24β)-ethylcholesta-5,22,25-trien(9)、肉苁蓉苷D(10)、Tortoside F(11)、Balanophonin(12)、木犀草苷(13)、类叶升麻苷(14)、木犀草素(15)、Acantrifoside E(16)、Trichotomside B(17)、肉苁蓉苷C(18)。化合物2、3、5、6、8、17为首次从大青木中分离得到。2、大青木中抗奶牛乳房炎活性组分提取工艺研究在单因素试验的基础上结合Box-Behnken响应面法对大青木中抗奶牛乳房炎活性组分——类叶升麻苷和木犀草苷进行提取工艺的优化,确定最佳提取工艺条件:粒度目数100目、乙醇浓度62%、料液比1∶22、提取次数3次、提取时间1.5 h、提取温度83℃。在此条件下,类叶升麻苷及木犀草苷的平均得率分别为9.62 mg/g、2.25mg/g,相对标准偏差分别为1.00%、1.26%。3、大孔树脂富集纯化大青木中抗奶牛乳房炎活性组分工艺研究在6种大孔吸附树脂中筛选得到富集纯化大青木中抗奶牛乳房炎活性组分的最优树脂型号为HPD600,在单因素试验的基础上结合Box-Behnken响应面法对大青木中抗奶牛乳房炎活性组分进行纯化工艺的优化,确定最佳纯化工艺条件:上样液浓度8.4 mg/m L、上样液体积2.0 BV、上样液流速3.0 m L/min、洗脱液浓度53%、洗脱液体积3.0 BV、洗脱液流速4.0 m L/min。在此条件下,类叶升麻苷及木犀草苷回收率分别为75.40%、86.59%,类叶升麻苷及木犀草苷的纯度由16.56%、2.47%提高至55.57%、8.35%。4、大青木中抗奶牛乳房炎活性组分抗氧化研究以抗坏血酸为阳性对照,测定经过提取、纯化工艺优化得到的大青木中抗奶牛乳房炎活性组分的粗提物和纯化物对自由基的清除能力。活性组分的粗提物清除DPPH、ABTS、OH自由基的IC值分别为63.53、56.37、93.76μg/m L,经过大孔吸附树脂纯化得到的活性组分的纯化物清除DPPH、ABTS、OH自由基的IC值分别为39.74、32.66、47.07μg/m L。综上所述,本文对大青木的化学成分及抗奶牛乳房炎活性组分的提取纯化工艺进行优化研究,丰富了大青木化学成分的物质基础,同时对大青木在抗奶牛乳房炎药物研发提供了必要的技术支撑。

关键词：大青木奶牛乳房炎活性组分类叶升麻苷木犀草苷

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大青木化学成分及类叶升麻苷纯化工艺研究

大青木化学成分及类叶升麻苷纯化工艺研究

作者：田雯贵州民族大学

学位级别：硕士

大青木(Clerodendron cyrtophyllum Turcz.)为马鞭草科大青属植物,是贵州常用的苗族医药之一,资源丰富。为探究大青木化学成分,为该资源利用提供依据,本研究对大青木化学成分及类叶升麻苷提取纯化工艺进行研究,结果如下:1.大青木化学成... 详细信息

大青木(Clerodendron cyrtophyllum Turcz.)为马鞭草科大青属植物,是贵州常用的苗族医药之一,资源丰富。为探究大青木化学成分,为该资源利用提供依据,本研究对大青木化学成分及类叶升麻苷提取纯化工艺进行研究,结果如下:1.大青木化学成分及生物活性研究采用液质联用法,对大青木正丁醇萃取部位进行定性分析。结果从中鉴定出42个化合物。苯丙素类共有15个,分别为类叶升麻苷、连翘酯苷E、绿原酸、七叶亭、咖啡酸、甲氧基香豆素、异补骨脂素、茵芋苷、阿魏酸、4-羟基肉桂酸甲酯、升麻素、亚麻木酚素、异麦角甾苷、松柏醛、阿魏酸甲酯;黄酮类共有12个,分别为木犀草苷、野黄芩苷、灯盏花乙素甲酯、木犀草素、金丝桃苷、木蝴蝶苷A、香叶木素、高车前苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、棕矢车菊素、芒柄花苷;萜类共有4个,分别为莪术醇、莪术二酮、冬凌草乙素、甜菊醇-19-葡萄糖苷;脂肪酸共有11个,分别为没食子酸甲酯、异香草酸、藁本内酯、α-亚麻酸、硬脂酸(Stearic acid)、原儿茶酸、原儿茶醛、香兰素、丁香醛、壬二酸、对甲氧基苯甲醛,共计42个化合物。对大青木正丁醇部位采用大孔树脂柱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱、RP-18反相柱、半制备HPLC柱等方法进行分离纯化,使用IR、UV、MS、NMR等技术鉴定化合物结构。从中分离得到4个单体化合物,分别鉴定为Cyrtophyllumoside A、类叶升麻苷、木犀草苷、Acantrifoside E,其中Cyrtophyllumoside A是新化合物,Acantrifoside E首次从大青木中分离的得到。Cyrtophyllumoside A有较好的DPPH自由基清除活性,其IC为26.974±0.442μg/mL。2.大青木中类叶升麻苷提取纯化工艺设计L(4)正交试验法,以类叶升麻苷的质量为考察指标,从乙醇浓度30%、50%、70%、90%,粗粉粒度20目、40目、60目、80目,料液比(g/mL)1:15、1:20、1:25、1:30,提取次数:1、2、3、4,提取时间1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h优选提取工艺,探究温度对类叶升麻苷得率的影响,得到最优结果。确定了类叶升麻苷最佳的提取工艺为大青木粗粉粒度60目、50%乙醇、料液比(g/mL)1:15、提取4次、每次提取1 h、提取温度为81.9℃。此工艺条件下,平均浸膏得率为18.60%±0.66%,平均类叶升麻苷得率为1.59%±0.51%。采用静态吸附、解吸附实验从D-101、LSA-21、AB-8、HPD600、NKA-9、S-8筛选确定富集类叶升麻苷的最佳树脂类型。静态实验考察上样浓度、乙醇洗脱液浓度,并通过动态吸附实验考察上样液流速、冲洗水量、洗脱流速优化类叶升麻苷的纯化工艺。最佳纯化工艺条件为:1.25 BV浓度为7 mg/mL大青木初提液,以5 mL/min的流速上样,树脂HPD600装柱,4 BV纯水洗脱大孔树脂柱,再用5 BV的50%乙醇溶液以3 mL/min流速洗脱。此工艺条件下可从大青木中得到回收率、纯度较高的类叶升麻苷,平均回收率、平均纯度分别为91.65%±0.49%、28.17%±0.32%。通过核磁表征为类叶升麻苷提取物。DPPH自由基清除活性实验表明类叶升麻苷提取物具有较强的抗氧化活性,其IC为7.341±0.422μg/mL。本文对化学成分和类叶升麻苷提取纯化工艺的研究,丰富了对大青木化学成分的认识,也为后续资源化提供一定依据。

关键词：大青木类叶升麻苷大孔树脂提取工艺纯化

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大青木在贵州侗族民间的应用及科学性探究

大青木在贵州侗族民间的应用及科学性探究

作者：李丽君贵州民族大学

学位级别：硕士

大青木(Clerodendrum cyrtophyllum Turcz.)为马鞭草科(Verbenaceae)大青属(Clerodendrum)植物,是我国民间常用的民族药之一,本研究以民族学实地调研结合现代科学的手段对大青木进行研究,以期验证其侗族民间用途的科学性,为大青木的开... 详细信息

大青木(Clerodendrum cyrtophyllum Turcz.)为马鞭草科(Verbenaceae)大青属(Clerodendrum)植物,是我国民间常用的民族药之一,本研究以民族学实地调研结合现代科学的手段对大青木进行研究,以期验证其侗族民间用途的科学性,为大青木的开发利用提供理论基础。1.对大青木在黔东南黎平地区侗医对它的药用情况及资源分布进行调查研究。结果显示,大青木在该地区有5个民间用途:(1)红色的果实治疗结石病;(2)叶子捣碎后止血;(3)枝干捣碎后可做外伤药;(4)在养鱼的稻田里焚烧其枝叶能起到消毒杀菌作用;(5)根搭配其它药有接骨的作用。同时,调查发现大青木在该地区蕴藏量丰富,且开发利用较少。2.采用工业乙醇热回流提取大青木地上部分得到总浸膏(979g),沸水捻溶总浸膏,分别用石油醚、二氯甲烷、正丁醇对浸膏进行萃取,减压浓缩得到相应的石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取部位。通过植物化学的手段,采用大孔树脂(DM101、MCI)柱色谱、硅胶柱层析、凝胶柱层析、RP18反相柱层析、中压制备色谱、半制备高效液相色谱等多种色谱手段对大青木正丁醇部位进行分离纯化,通过理化常数、波谱数据(IR、UV、MS、1D/2DNMR)等方法对其结构进行鉴定。共从大青木正丁醇部位分离鉴定出7个单体化合物,分别是类叶升麻苷(1,Acteoside)、肉苁蓉苷C(2,Cistanoside C)、木犀草苷(3,Luteoloside)、Balanophonin(4)、肉苁蓉苷D(5,CistanosideD)、Tortoside F(6)、木犀草素(7,Luteolin),除化合物1,其余6个化合物均为首次从大青木中分离得到。3.采用MTT法对大青木正丁醇部位、部分粗提物和单体化合物进行体外抗菌活性研究。正丁醇部位经大孔树脂DM101(用不同浓度的工业乙醇洗提)分离后的粗提物FrC、FrC、FrD对乳房链球菌有抗菌活性,IC分别为8 mg/mL、1 mg/mL、8 mg/mL;FrC、FrC、FrC、FrC、FrD五种粗提物对无乳链球菌有抑制活性,IC分别为1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL、1 mg/mL、1 mg/mL。采用同样的方法测定了单体化合物1、3对乳房链球菌和无乳链球菌的抑制活性,测定结果为化合物1对两种菌均无明显抑制活性;化合物3对乳房链球菌有抑菌活性,MIC为8 mg/mL,对无乳链球菌无明显抑菌活性。化合物7金黄色葡萄球菌有一定抑制作用。4.分析大青木民间药用的科学性。通过对其正丁醇部位化学成分的分析以及抑菌活性的测定,再结合大青木相关医学典籍记载和目前的研究概况分析其民间药用的科学性。从现有研究结果来看,大青木在补药、抗菌消炎及外伤止血的民间应用具有一定科学性。补体及利于产后恢复可能与其中所含抗氧化活性的苯乙醇苷类化合物相关,其止血、外伤药与医学典籍中记载验方的吻合,抗感冒疗效很可能与其中具有抗菌活性的黄酮和苯乙醇苷类化合物相关。

关键词：大青木化学成分药理活性

黔产大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分的提取工艺及抗氧化活性研究

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饲料研究 2021年第23期44卷 78-83页

作者：霍晓敏薛站张雅昆王亭亭田雯谭承建贵州民族大学民族医药学院贵州贵阳550025 贵州民族大学化学工程学院贵州贵阳550025

试验旨在优化黔产大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分——类叶升麻苷及木樨草苷的提取工艺,并研究其抗氧化活性。在单因素试验的基础上,结合Box-Behnken响应面法以类叶升麻苷与木樨草苷得率的总评"归一值"为指标,优化提取工艺;测定其对D... 详细信息

试验旨在优化黔产大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分——类叶升麻苷及木樨草苷的提取工艺,并研究其抗氧化活性。在单因素试验的基础上,结合Box-Behnken响应面法以类叶升麻苷与木樨草苷得率的总评"归一值"为指标,优化提取工艺;测定其对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基的清除能力。结果显示,最佳提取工艺条件为粒度目数100目、乙醇浓度62%、液料比22 mL/g、提取3次、提取时间1.5 h、提取温度83℃。此条件下,类叶升麻苷与木樨草苷得率分别为9.62、2.25 mg/g;两者对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基具有一定的清除能力。研究表明,提取工艺优化后大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分得率较高,具有较好的抗氧化活性,可为后续抗奶牛乳房炎的饲料添加剂研发提供参考。

关键词：大青木类叶升麻苷木樨草苷提取抗氧化

苗药大青木在黔东南地区的应用及化学成分研究

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苗药大青木在黔东南地区的应用及化学成分研究

作者：冉坚强贵州民族大学

学位级别：硕士

苗族是我国古老的少数民族之一,绝大多数分布于我国云贵高原及其边缘地带。在其长期的历史发展过程中,苗族人民创造了众多优秀的传统文化,医药文化并是其中之一。苗族同胞在其漫长的有疾病做斗争的历史中,创造了独具特色而又适应其生存... 详细信息

苗族是我国古老的少数民族之一,绝大多数分布于我国云贵高原及其边缘地带。在其长期的历史发展过程中,苗族人民创造了众多优秀的传统文化,医药文化并是其中之一。苗族同胞在其漫长的有疾病做斗争的历史中,创造了独具特色而又适应其生存环境的传统药用植物利用的知识。但是随着现代社会的发展和外来文化的冲击,苗族人民的传统生活生计方式和生活环境发生了改变,对其各文化的传承造成了很大的影响,传统医药文化也一样。传统医药知识在苗族地区的传承仅靠口传心授,没有本民族文字记载,面临流失。因此调查和收集、完善苗族传统医药知识,结合植物化学和药理学研究,为苗族传统药用知识提供理论支持,有利于促进苗族传统医药文化的保护和传承。在文献研究、野外调查的基础上,通过关键人物访谈、半结构式访谈等方法获取苗族相关的传统医药知识,采集药物凭证标本,记录和整理调查所得信息,与前人研究结果做对比,完善苗族传统医药文化知识。就苗药大青木(Clerodendron cyrtophyllum)在民间的认知及药用情况作出调查,对其化学成分及相关活性作出研究。采用GC-MS法分析大青木中位挥发性成分,同时采用多种色谱分离方法(硅胶柱层析、凝胶层析、ODS、高速逆流色谱、中压制备色谱、高效液相色谱等)分离石油醚部位化合物,通过理化常数和光谱、波普(IR、UV、MS、1D∕2DNMR)等方法分析鉴定结构,通过药理学方法进行评估和筛选活性成分。1.共走访调查了黎平、榕江、丹寨等地8个苗族村寨、3个侗族村寨、2个水族村寨,访谈了25名关键人物(14名当地草医),了解了大青木在当地分布,认知及应用情况,以及其它的一些常见、常用的草药的命名、用法、用药习惯,结合文献研究结果,总结了部分苗药的命名方法,用药习惯等。2.采用GC-MS法从大青木的95%乙醇提取,石油醚萃取部位分离检测出28个化合物,二氯甲烷萃取部位分离检测出12个化合物;从大青木的石油醚萃取部位分离得到20个化合物,鉴定了5个化合物结构3.测定大青木粗提物于人肺癌细胞株A549、人口腔上皮癌细胞株KB、人口腔上皮癌细胞株KB-VIN、人乳腺癌细胞株MCF、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制率,研究结果表明大青木粗提物没有抗肿瘤活性。本研究对于苗药大青木在贵州部分少数民族地区的分布、命名、用法、等作了初步了解。同时对于苗药大青木的化学成分、药理活性作了较为系统的研究,对于大青木的民族民间应用的合理性做出了解释。为大青木的研究、开发和利用提供理论依据。

关键词：民族医药大青木 GC-MS 化学成分

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大青木人工栽培技术

农技服务 2011年第11期28卷 1622-1623页

作者：潘建平杜一新李永青浙江省景宁畲族自治县鹤溪镇农技站浙江景宁323500 浙江省景宁畲族自治县农业局

通过试验、实践观察和农户访谈,从种苗繁育、地块选择、翻耕整地、适时移栽、园地管理等方面对大青木的人工栽培技术进行了阐述,以期为提高大青木人工栽培技术和产出效益,推进产业化发展。

关键词：大青木食药用植物栽培技术

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大青木研究进展

贵州医药 2019年第3期43卷 369-372页

作者：李丽君潘蝶周康盛谭承建贵州民族大学化学工程学院(民族医药学院) 贵阳贵州550025

目的本文概述了大青木化学成分和药理作用研究进展。迄今为止,从大青木中共发现近100个化合物,包括萜类、黄酮类、苯乙醇苷类、甾体等类型化合物。生物活性方面,乙酸乙酯和正丁醇部位具有良好的抗氧化作用,苯乙醇苷类化合物为其抗氧化... 详细信息

目的本文概述了大青木化学成分和药理作用研究进展。迄今为止,从大青木中共发现近100个化合物,包括萜类、黄酮类、苯乙醇苷类、甾体等类型化合物。生物活性方面,乙酸乙酯和正丁醇部位具有良好的抗氧化作用,苯乙醇苷类化合物为其抗氧化的物质基础;萜类、甾体和叶绿素类化合物表现出抗肿瘤活性;此外,水煎剂表现出一定抗人巨细胞病毒、痢疾杆菌效果。

关键词：大青木化学成分药理作用

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大青木中黄酮苷的分离与结构鉴定

云南化工 2014年第4期41卷 40-41,45页

作者：胡士现赵庆昆明源瑞制药有限公司研发中心昆明651701 云南中医学院昆明650500

分离、鉴定了大青木中化学成分。采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法和反复重结晶等方法进行分离纯化,并通过理化方法及1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC等光谱分析确定化合物结构。从大青木中分离得1个化合物I,鉴定为5-羟... 详细信息

分离、鉴定了大青木中化学成分。采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法和反复重结晶等方法进行分离纯化,并通过理化方法及1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC等光谱分析确定化合物结构。从大青木中分离得1个化合物I,鉴定为5-羟基-3,7,3'-三甲氧基-4'-β-D-吡喃葡萄糖基黄酮甙,为首次从该植物中分离得到。

关键词：大青木黄酮甙分离纯化结构鉴定

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大青木药理作用的初步研究

华夏医学 1993年第1期6卷 11-13页

作者：张惠勤黄崇基王育生桂林医学院药学系药理学教研室桂林医学院生药学教研室

本文报告了大青木醇提取液镇痛、抗炎作用的初步实验研究。结果表明本药对小鼠热板法致痛及扭体法致痛都有明显的镇痛作用。

关键词：大青木止痛抗炎