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大蜡螟感染模型在肺炎克雷伯菌毒力研究中的应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第8期38卷 611-615页

作者：汤怡颖胡仁静无锡市第二人民医院检验科 214002

目的评价肝脓肿相关肺炎克雷伯菌的大蜡螟感染模型,建立肺炎克雷伯菌毒力检测的新方法.方法收集无锡市第二人民医院2016年1月至2017年12月分离肝脓肿相关肺炎克雷伯菌12株,痰液、尿液中分离的20株肺炎克雷伯菌作为经典非高毒力肺炎克... 详细信息

目的评价肝脓肿相关肺炎克雷伯菌的大蜡螟感染模型,建立肺炎克雷伯菌毒力检测的新方法.方法收集无锡市第二人民医院2016年1月至2017年12月分离肝脓肿相关肺炎克雷伯菌12株,痰液、尿液中分离的20株肺炎克雷伯菌作为经典非高毒力肺炎克雷伯菌（经典组）;所有菌株进行黏液丝试验,PCR检测肺炎克雷伯菌常见的高毒力的荚膜血清型（K1、K2、K5、K16、K20、K54、K57）,大蜡螟毒力试验测定同一时间段不同血清荚膜型的80％致死量（80％lethal dose,LD80）以及在同一浓度下达到80％幼虫死亡的时间（80％lethal time,LT80）.结果肝脓肿组荚膜血清型主要为K1、K2、K5、K20、K57,分别占41.7％（5/12）、8.3％（1/12）、8.3％（1/12）、8.3％（1/12）、33.4％（4/12）;经典组未检出高毒力荚膜血清型.肝脓肿组黏液丝试验阳性率为75％（9/12）,经典组的黏液丝试验的阳性率为10％（2/20）.大蜡螟毒力试验显示在浓度为1×105 CFU/ml至1×108 CFU/ml时,不同的菌株对大蜡螟幼虫的致死率呈现浓度依赖性,接种12 h后,K1、K57组的死亡幼虫数量显著高于K2、K5、K20组及经典组;接种96 h肝脓肿组的LD80分别为：1×106 CFU/ml（K1、K57）;1×107 CFU/ml（K2、K5、K20）.结论我院分离的肝脓肿相关肺炎克雷伯菌均为高毒力菌株,大蜡螟模型菌液接种后12 h可进行肺炎克雷伯菌毒力的检测.

关键词：肺炎克雷伯菌荚膜血清型毒力黏液丝试验大蜡螟

伯氏致病杆菌IDP16蛋白抑制大蜡螟的免疫反应

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微生物学报 2012年第7期52卷 885-893页

作者：石怀兴曾洪梅邱德文中国农业科学院植物保护研究所农业部有害生物综合治理重点实验室北京100081

【目的】从伯氏致病杆菌(Xenorhabdus bovienii)胞外组分中分离纯化出能够抑制大蜡螟(Galleriamellonella)免疫反应的一种蛋白,研究其在昆虫病原线虫及其共生菌致病过程中的作用。【方法】采用硫酸铵沉淀和柱层析的方法对活性蛋白进行... 详细信息

【目的】从伯氏致病杆菌(Xenorhabdus bovienii)胞外组分中分离纯化出能够抑制大蜡螟(Galleriamellonella)免疫反应的一种蛋白,研究其在昆虫病原线虫及其共生菌致病过程中的作用。【方法】采用硫酸铵沉淀和柱层析的方法对活性蛋白进行分离和纯化,通过体内注射并观察血淋巴黑化进行活性蛋白的筛选;采用荧光微球和琼脂糖小球评价活性蛋白对血细胞吞噬、包被作用的影响;采用双向电泳结合质谱分析对活性蛋白进行鉴定,设计引物用PCR的方法克隆其编码基因,利用pET 30a载体进行原核表达,以亲和层析纯化重组蛋白。【结果】纯化得到一个昆虫免疫抑制蛋白,命名为IDP16,该蛋白可显著抑制大蜡螟血淋巴中的多酚氧化酶活性,降低血细胞的吞噬和包被作用。克隆得到其编码基因并进行了原核表达,重组蛋白仍具有免疫抑制活性。【结论】伯氏致病杆菌产生的IDP16蛋白能够抑制昆虫的免疫反应,在共生菌和宿主昆虫互作过程中起着重要的作用。

关键词：伯氏致病杆菌 IDP16蛋白大蜡螟免疫抑制

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温度对大蜡螟生长发育和繁殖的影响

植物保护学报 2022年第2期49卷 644-653页

作者：罗丽林杨广明龙立炎王兴红黄振兴乙天慈罗雪丹刘曼贵州省生物研究所贵阳550009 台江县农业农村局贵州凯里556300 贵州大学昆虫研究所贵阳550025

为预测大蜡螟Galleria mellonella的发生期并为其田间有效防控提供参考依据,采用室内人工恒温饲养方法,测定27、29、31、33、35℃五个温度下大蜡螟幼虫龄期、各虫态存活率和发育历期及成虫寿命和繁殖力,对其发育速率与温度进行回归分析... 详细信息

为预测大蜡螟Galleria mellonella的发生期并为其田间有效防控提供参考依据,采用室内人工恒温饲养方法,测定27、29、31、33、35℃五个温度下大蜡螟幼虫龄期、各虫态存活率和发育历期及成虫寿命和繁殖力,对其发育速率与温度进行回归分析,计算各虫态发育起点温度和有效积温。结果显示,27~35℃范围内,大蜡螟能正常发育,但低温会使幼虫龄期减少,29~35℃下大蜡螟有7~10龄幼虫,而27℃下,大蜡螟仅有6~8龄幼虫。温度显著影响各虫态存活率,低龄尤其1龄幼虫受温度的影响较大,27~33℃下其存活率低于26.06%,当温度为35℃时其存活率高达87.27%。世代及各虫态的发育历期均与温度呈负相关,卵期、幼虫期、蛹期及世代发育历期均在35℃降至最小值,分别为5.00、25.90、7.05和37.95 d。各虫态发育速率与温度符合二次回归模型。由直接最优法计算得到大蜡螟卵、幼虫、蛹及世代的发育起点温度分别为13.11、13.69、19.83和13.19℃,有效积温依次为100.32、514.09、95.13和789.87日·度。雌雄成虫的寿命和雌成虫产卵历期均随温度升高而缩短,温度对单雌产卵量无显著影响,但35℃下单雌日均产卵量最高,为342.59粒。表明温度是影响大蜡螟生长发育和繁殖的关键因素,35℃是大蜡螟生长发育和繁殖的最适温度。

关键词：大蜡螟温度生长发育繁殖

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大蜡螟触角转录组及嗅觉相关基因分析

应用昆虫学报 2019年第6期56卷 1279-1291页

作者：杨爽赵慧婷徐凯郭丽娜杜亚丽李新宇苏文婷冯宇佳龙登隆姜玉锁云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所蒙自661101 山西农业大学动物科技学院太谷030801 山西农业大学生命科学学院太谷030801

【目的】大蜡螟Galleria mellonella Linnaeus是世界范围内蜂群中普遍存在的害虫,给世界养蜂业带来了巨大的危害。本研究旨在建立大蜡螟触角转录组数据库,挖掘大蜡螟嗅觉相关基因,为今后利用嗅觉基因靶标防治大蜡螟提供分子生物学信息... 详细信息

【目的】大蜡螟Galleria mellonella Linnaeus是世界范围内蜂群中普遍存在的害虫,给世界养蜂业带来了巨大的危害。本研究旨在建立大蜡螟触角转录组数据库,挖掘大蜡螟嗅觉相关基因,为今后利用嗅觉基因靶标防治大蜡螟提供分子生物学信息数据。【方法】利用高通量测序平台(Illumina HiSeq^TM 2500)对大蜡螟触角进行转录组测序和组装,通过筛选转录组数据库,鉴定出嗅觉相关基因。【结果】成功构建了大蜡螟触角转录组,经序列拼接获得188278条unigenes,平均长度为781 bp,N50为1161 bp。使用BLAST软件将大蜡螟触角unigenes序列与7大公共数据库比对,共注释到108047条unigenes,其中NR数据库注释的unigenes最多,为78746条,占41.82%,且NR注释的大蜡螟unigenes中与家蚕Bombyx mori类似基因最多,为18.4%。将unigenes与GO数据库比对发现,共有69794条unigenes注释到GO数据库中,按照其所参与的生物过程、细胞组分和分子功能对其进行GO功能分类,共含有55个亚类,其中参与结合和催化功能及代谢过程的unigenes比例较大;KEGG代谢途径分析表明,14699条unigenes形成231条代谢通路,其中被注释在信号传导通路中的unigenes最多,为2401条,占16.33%。进一步基因注释分析,鉴定得到226个候选嗅觉相关基因,包括52个气味结合蛋白(Odorant binding proteins,OBPs)基因,36个化学感受蛋白(Chemosensory proteins,CSPs)基因,80个气味受体(Odorant receptors,ORs)基因,56个离子型受体(Ionotropic receptors,IRs)基因和2个感觉神经元膜蛋白(Sensory neuron membrane proteins,SNMPs)基因;通过比较雌、雄大蜡螟转录组鉴定出114个差异表达基因,包括5个嗅觉相关基因(OBP8、OBP17、CSP3、CSP34和OR15);114个差异表达基因中,66个基因在雌蛾触角中高表达,48个基因在雄蛾触角中高表达。【结论】本研究获得了大蜡螟触角转录组数据,并鉴定出候选嗅觉相关基因,结果为进一步研究大蜡螟的基因功能及嗅觉感受机制奠定分子基础。

关键词：大蜡螟触角转录组高通量测序基因注释嗅觉相关基因差异表达基因

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大蜡螟的性选择行为

应用昆虫学报 2022年第1期59卷 84-92页

作者：罗丽林李从春龙立炎黄振兴王兴红杨广明乙天慈罗雪丹刘曼姜文娜贵州省生物研究所贵阳550009 广饶县职业中等专业学校广饶257335 台江县农业农村局台江556300 贵州大学昆虫研究所贵阳550025

【目的】针对大蜡螟Galleria mellonella L.的性选择行为进行系统观察分析,为大蜡螟性信息素全组分的结构鉴定及利用信息素行为调控技术防控该虫提供依据。【方法】分别对不同体重、不同日龄和不同交配经历的大蜡螟成虫进行标记,在红光... 详细信息

【目的】针对大蜡螟Galleria mellonella L.的性选择行为进行系统观察分析,为大蜡螟性信息素全组分的结构鉴定及利用信息素行为调控技术防控该虫提供依据。【方法】分别对不同体重、不同日龄和不同交配经历的大蜡螟成虫进行标记,在红光灯下观察并记录大蜡螟雌雄虫的性选择行为。【结果】在(26±0.5)℃、相对湿度60%、全黑暗条件下,无论雌虫还是雄虫,均倾向于选择与之体重相接近的异性个体进行交配。雌雄成虫均偏向于选择3日龄的异性个体进行交配;雌虫对不同日龄雄虫的选择率大小顺序为3日龄>5日龄>1日龄,而雄虫对不同日龄雌虫的选择率大小顺序为3日龄>1日龄>5日龄。交配经历影响大蜡螟的性选择行为,雌虫优先选择已交配的雄虫进行交配,选择率为74.6%;雄虫也优先选择已交配的雌虫进行交配,选择率为79.4%。【结论】雌雄虫体重、日龄和交配经历能不同程度的影响大蜡螟的性选择行为,这为进一步研究雌雄交配信号奠定基础。

关键词：大蜡螟性选择体重日龄交配经历

大蜡螟中类肽聚糖识别蛋白Gm21的鉴定、基因克隆及序列分析

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应用昆虫学报 2013年第1期50卷 118-125页

作者：石怀兴曾洪梅邱德文中国农业科学院植物保护研究所农业部有害生物综合治理重点实验室北京100081

为了调查毒素蛋白免疫下大蜡螟Galleria mellonella L.产生的免疫相关蛋白,采用双向电泳的方法,从大蜡螟血淋巴中鉴定得到一种昆虫肽聚糖识别蛋白Gm21,通过RT-PCR、cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到其全长基因,该基因全长cDNA具有完... 详细信息

为了调查毒素蛋白免疫下大蜡螟Galleria mellonella L.产生的免疫相关蛋白,采用双向电泳的方法,从大蜡螟血淋巴中鉴定得到一种昆虫肽聚糖识别蛋白Gm21,通过RT-PCR、cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到其全长基因,该基因全长cDNA具有完整的编码框,编码211个氨基酸,序列分析表明该蛋白是一种具有潜在酰胺酶活性的S型肽聚糖识别蛋白。本研究中Gm21蛋白在免疫压力下的上调表达及其cDNA序列的克隆,对进一步深入研究昆虫肽聚糖识别蛋白的功能具有重要的意义。

关键词：大蜡螟肽聚糖识别蛋白免疫

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大蜡螟工厂化生产流程及环境因素的控制

中国农业大学学报 2002年第5期7卷 85-89页

作者：熊延坤张青文徐静段灿星周明■ 中国农业大学植物保护学院北京100094 中国农业科学院作物品种资源研究所北京100081

为了寻找大蜡螟工厂化生产过程中的适宜环境条件 ,定量控制研究了幼虫期环境因素对大蜡螟合格产品的影响。结果表明幼虫期适宜的环境条件为温度 (2 9± 1)℃、相对湿度 5 0 %～ 70 %、虫口密度 30 0头 /盒。

关键词：大蜡螟工厂化生产流程环境因素控制温度相对湿度虫口密度光照实验昆虫蜜蜂害虫

大蜡螟成虫3个醛氧化酶基因的鉴定、序列特征与组织表达模式

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环境昆虫学报 2021年第2期43卷 397-405页

作者：刘苏蒋秀云陈诚汪正威蒋兴川作物有害生物综合治理安徽省重点实验室植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室安徽农业大学植物保护学院合肥230036 安徽审计职业学院合肥230601 中国科学院热带森林生态重点实验室化学生态学组中国科学院西双版纳热带植物园昆明650000

醛氧化酶(AOXs)在昆虫的嗅觉生理代谢过程中起重要作用。本研究从大蜡螟Galleria mellonella成虫中鉴定了3个AOX s基因,命名为GmelAOX1、GmelAOX2和GmelAOX3。这3个基因均含有完整的开放阅读框,所编码的蛋白质均具有醛氧化酶的典型特征... 详细信息

醛氧化酶(AOXs)在昆虫的嗅觉生理代谢过程中起重要作用。本研究从大蜡螟Galleria mellonella成虫中鉴定了3个AOX s基因,命名为GmelAOX1、GmelAOX2和GmelAOX3。这3个基因均含有完整的开放阅读框,所编码的蛋白质均具有醛氧化酶的典型特征,如具有铁硫氧化还原中心、黄素腺嘌呤二核苷酸结合区域和钼辅因子结合区域。系统进化分析显示3个GmelAOX s被聚在不同的进化分支,且GmelAOX s与鳞翅目AOX s亲缘关系最近。GmelAOX1和GmelAOX3位于同一个基因组框架(scaffold69)上,而GmelAOX2位于scaffold96。GmelAOX1、GmelAOX2和GmelAOX3的外显子数量分别为17个、16个和21个。GmelAOX2高量表达于成虫触角,且在触角中的表达量显著高于其它组织,推测GmelAOX2可能编码一个气味降解酶并参与醛类气味分子的降解。GmelAOX1和GmelAOX3的表达没有组织特异性,二者编码的蛋白可能兼具气味降解和外源醛类代谢的功能。

关键词：大蜡螟醛氧化酶系统进化分析基因组分布表达谱

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大蜡螟作为试验昆虫资源的利用现状

昆虫知识 2009年第3期46卷 485-489页

作者：刘奇志田里蒲恒浒中国农业大学农学与生物技术学院昆虫与线虫学试验室北京100193

随着对资源昆虫的不断认识,人们的目光开始逐渐转到对大蜡螟Galleria mellonella L.的开发利用方面,而不再仅仅局限于对它的防治方面。近些年来,大蜡螟逐渐被作为试验昆虫用于一些生物的研究。文章主要介绍大蜡螟被用于昆虫病原线虫、... 详细信息

随着对资源昆虫的不断认识,人们的目光开始逐渐转到对大蜡螟Galleria mellonella L.的开发利用方面,而不再仅仅局限于对它的防治方面。近些年来,大蜡螟逐渐被作为试验昆虫用于一些生物的研究。文章主要介绍大蜡螟被用于昆虫病原线虫、寄生蜂、新型隐球菌Cryptococcus neoformans、抗菌肽、抗菌免疫机制等方面的研究。

关键词：大蜡螟试验昆虫昆虫病原线虫寄生蜂新型隐球菌抗菌免疫机制