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产肠毒素大肠杆菌k88诱导仔猪炎症反应的分子机制

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中国畜牧兽医 2017年第1期44卷 262-267页

作者：李海花朱琪王世琼杨春蕾赵向华乔家运王文杰天津市畜牧兽医研究所天津300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津300381

为探讨产肠毒素大肠杆菌(ETEC)k88感染仔猪发生炎症反应的分子机制,试验用ETEC k88灌服断奶仔猪,ELISA法检测攻毒后仔猪血清中白细胞介素8(IL-8)含量,实时荧光定量PCR方法检测淋巴结中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)及其信号通... 详细信息

为探讨产肠毒素大肠杆菌(ETEC)k88感染仔猪发生炎症反应的分子机制,试验用ETEC k88灌服断奶仔猪,ELISA法检测攻毒后仔猪血清中白细胞介素8(IL-8)含量,实时荧光定量PCR方法检测淋巴结中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)及其信号通路相关基因(髓样分化因子88(MyD88)、Toll相互作用蛋白(Tollip)、B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3))的mRNA相对表达水平。结果发现,仔猪攻毒ETEC k88后6和24h血清IL-8含量和淋巴结TLR2/4的表达水平均极显著或显著高于对照组(Pk88后24h淋巴结中MyD88、Tollip和Bcl3的表达水平均极显著高于对照组(P0.05)。综上所述,ETEC k88感染仔猪可能是通过TLR2/4-MyD88信号通路产生炎症因子IL-8,促使仔猪出现炎症反应,且该炎症反应可能受Tollip和Bcl3蛋白的调控而被减弱。

关键词：大肠杆菌k88 仔猪炎症反应 Toll-样受体炎症调控

壳寡糖对大肠杆菌k88感染肉鸡生长性能、抗氧化能力及肠道屏障功能的影响

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中国畜牧杂志 2024年第4期60卷 292-297页

作者：皮得金滕奕李冰杨雨珠臧佳佳郭双双李鹏易丹丁斌鹰查宇动物营养与饲料科学湖北省重点实验室武汉轻工大学湖北武汉430023 湖北蓝谷中微生物技术有限公司湖北宜昌443100

本试验旨在研究壳寡糖(Chitosan,COS)对大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染肉鸡生长性能、抗氧化能力及肠道屏障功能的影响。将288只1日龄体重均一、健康的罗斯308肉仔鸡随机分为4个处理,即对照组、ETEC感染组、ETEC+... 详细信息

本试验旨在研究壳寡糖(Chitosan,COS)对大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染肉鸡生长性能、抗氧化能力及肠道屏障功能的影响。将288只1日龄体重均一、健康的罗斯308肉仔鸡随机分为4个处理,即对照组、ETEC感染组、ETEC+PS1组(ETEC+150 mg/kg壳寡糖)和ETEC+PS2组(ETEC+200 mg/kg壳寡糖),每个处理6个重复,每个重复12只鸡(公母各半)。于10日龄时给ETEC组、ETEC+PS1组和ETEC+PS2组肉鸡灌服1 mL ***菌悬液(1.0×10^(8) CFU/mL),对照组灌服1 mL无菌培养基。试验期42 d。结果显示:与对照组相比,ETEC组21~42日龄肉鸡平均日采食量有降低趋势(P=0.07),21、42日龄空肠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力与丙二醛(MDA)含量下调(Pkg壳寡糖可能通过增强肠道物理屏障和抗氧化功能进而缓解ETEC感染对肉鸡肠道的不利影响。

关键词：壳寡糖大肠杆菌k88 肉鸡屏障功能生长性能

氧化锌对大肠杆菌k88杀菌机理的原子力显微镜研究

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黑龙江畜牧兽医 2008年第7期 93-94页

作者：江霞徐铭张丽滨州医学院山东食品药品职业学院山东威海264210

许多研究表明,高剂量的氧化锌对抑制仔猪腹泻有良好的效果,这可能与高剂量的氧化锌对大肠杆菌有杀伤作用有关.

关键词：大肠杆菌k88 原子力显微镜杀菌机理氧化锌扫描探针显微镜 force 横向分辨率纵向分辨率

动物病原大肠杆菌k88的绿色荧光蛋白基因标记及其稳定性研究

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生物技术通报 2010年第9期26卷 198-204,209页

作者：车建美刘波蓝江林福建省农业科学院农业生物资源研究所福州350003

成功地将gfp/luxAB双标记基因整合到k88染色体上,得到绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌k88∶gfp/lux,其菌体和菌落形态与原始菌株k88完全一致,引入的新质粒不影响菌株的基本形态。从含gfp基因的质粒DNA和k88∶gfp/lux基因组DNA上均可扩... 详细信息

成功地将gfp/luxAB双标记基因整合到k88染色体上,得到绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌k88∶gfp/lux,其菌体和菌落形态与原始菌株k88完全一致,引入的新质粒不影响菌株的基本形态。从含gfp基因的质粒DNA和k88∶gfp/lux基因组DNA上均可扩增出大小约700 bp的gfp基因片段。大肠杆菌特异性基因检测结果表明,从大肠杆菌k88和k88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约260 bp的大肠杆菌特异性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株均为大肠杆菌。在相同的培养条件下,k88∶gfp/lux和k88的生长曲线的变化趋势基本相同。通过检测肠毒性基因(estA)发现,从大肠杆菌k88和k88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约158 bp的肠毒性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株在肠毒性方面未发生变化。在无选择压力条件下将k88∶gfp/lux菌株每隔12 h连续转接10次后,所有菌落均保持着均匀并且强烈的绿色荧光,说明标记基因在k88∶gfp/lux中的表达稳定性很高。k88∶gfp/lux和k88在中性偏酸性的环境中生长较好,当初始pH值偏碱性时,生长较差。

关键词：大肠杆菌k88 绿色荧光蛋白 gfp/luxAB基因

表达猪乳铁蛋白的戊糖乳杆菌对感染大肠杆菌k88小鼠的保护作用

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 889-893页

作者：于慧王雷何佳乔薪瑗姜艳平崔文葛俊伟李一经唐丽杰东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究猪抗大肠杆菌(***)k88的口服疫苗,本研究构建了表达猪乳铁蛋白的重组戊糖乳杆菌(pPG2-pLF/***),并将其连续10 d灌喂小鼠后,采用***88口服攻毒。攻毒后7d,取小肠样本通过扫描电镜检测,并对盲肠内容物进行菌落分离计数,取血液样本,... 详细信息

为研究猪抗大肠杆菌(***)k88的口服疫苗,本研究构建了表达猪乳铁蛋白的重组戊糖乳杆菌(pPG2-pLF/***),并将其连续10 d灌喂小鼠后,采用***88口服攻毒。攻毒后7d,取小肠样本通过扫描电镜检测,并对盲肠内容物进行菌落分离计数,取血液样本,检测IgG、sIgA、IL-2、IL-4和INF-α指标评价其免疫效果。结果显示:灌服pPG2-p LF/***组小鼠肠绒毛高度与健康对照组无显著变化,其IgG、sIgA、IL-2和INF-α水平显著提高;小鼠肠道中***总数显著低于攻毒对照组,而且攻毒后小鼠的死亡率显著降低(pk88对小鼠的致病力,减轻病原菌攻毒对小鼠肠道组织的功能损伤,降低肠道内致病菌数量,提高小鼠免疫机能。

关键词：猪乳铁蛋白戊糖乳杆菌表达大肠杆菌k88 攻毒

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甜菜碱对大肠杆菌k88的抑菌效果研究

饲料工业 2017年第20期38卷 47-49页

作者：曲恒漫文媛王佳荣周岩民温超南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

研究旨在测定无水甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌k88的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),比较不同浓度、不同时间条件下甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌k88的抑菌效果。运用大肠杆菌k88进行体外抑菌试验,进行研究分析,结果表明:... 详细信息

研究旨在测定无水甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌k88的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),比较不同浓度、不同时间条件下甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌k88的抑菌效果。运用大肠杆菌k88进行体外抑菌试验,进行研究分析,结果表明:无水甜菜碱对大肠杆菌k88无明显的抑菌作用,甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌k88有明显抑菌作用,最小抑菌浓度(MIC)为6.25 mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)为8.125 mg/ml,且随着甜菜碱盐酸盐浓度提高或培养时间延长,抑菌率提高。试验结果提示,甜菜碱盐酸盐的抑菌作用可能与其呈强酸性有关。

关键词：无水甜菜碱甜菜碱盐酸盐大肠杆菌k88 最小抑菌浓度最小杀菌浓度

大肠杆菌k88影响仔猪肠道先天免疫反应的定量蛋白组学研究

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大肠杆菌K88影响仔猪肠道先天免疫反应的定量蛋白组学研究

大肠杆菌k88诱导的仔猪肠上皮细胞转录组学变化的研究

中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨...

作者：贝锦龙张琪朱翠陈庄孔谦崔百元杨宽民蒋宗勇广东省农业科学院农业生物基因研究中心广东省农业科学院动物科学研究所

本试验主要探讨产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E coli,ETEC)k88影响仔猪肠道黏膜蛋白质组学的研究。选取体重相似、健康状况良好的4日龄杜×长×大三元杂公猪36头,按照窝别和体重随机分成对照组与k88感染组,每组6个重复,每个重复各... 详细信息

本试验主要探讨产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E coli,ETEC)k88影响仔猪肠道黏膜蛋白质组学的研究。选取体重相似、健康状况良好的4日龄杜×长×大三元杂公猪36头,按照窝别和体重随机分成对照组与k88感染组,每组6个重复,每个重复各3头。所有仔猪饲喂相同的基础饲粮。在试验第15天进行ETEC k88攻毒(血清型为O149:k91:k88ac,购自中国兽医药品监察所),k88感染组按1头108 CFU/头的量进行口服灌服,对照组灌服相同量的PBS缓冲液。试验第18天清晨,在每个组内随机挑选3个重复的各1头仔猪,进行屠宰,并刮取空肠中段黏膜。对来自上述6头仔猪空肠黏膜的总蛋白进行基于同量异序标签Tandem Mass Tag(TMT)的定量蛋白质组学检测。首先对蛋白质样品分别进行还原、烷基化与胰蛋白酶切等处理,获得6个水解肽段混合物;使用TMT-126、-127、-128与TMT-129、-130与-131标签分别标记来自感染组与对照组的各3个肽段混合物后,将所有标记样品等量混匀。然后通过二维液相色谱(2D-LC)降低肽段混合物复杂度:第一维,在HPLC(Dionex,UltiMate 3000 RSLC)上使用高pH反相分级技术将6标肽段混合物分12个组分;第二维,在纳升级HPLC(Dionex,UltiMate 3 000 RSLCnano)上使用C18毛细管色谱(3μm,75μm×15 cm)分别分离上述组分。高分辨率质谱nano-ESI-Orbitrap(Thermo,Obitrap Fusion Tribrid)通过与第二维液相直接耦联分析样品;MS1与MS2分辨率分别设置为120 000与30 000。最后,先后通过蛋白质组学软件Proteome Discoverer(V1.4,Thermo)、Mascot(V 2.4.1,Matrix Science)与Scaffold Q+(V4.4.3,Proteome Software Inc.)处理质谱数据。结果显示:1)质谱结果显示总共产出1 456 885张谱图,其中可定量Unique PSM数为225 841(FDRk88攻毒处理显著上调的蛋白有55个,其中溶菌酶、猪源抗菌肽、钙卫蛋白等抗菌应激物质表达显著提高。4)而ETEC k88攻毒处理显著下调的蛋白有46个,主要表现为RSAD2、Ube216、RIG-I、2’-5’寡腺苷酸合成酶(OASL)、Mx蛋白与ISG15等与Ⅰ型干扰素密切相关的蛋白表达显著下调。本研究发现,ETEC k88可能通过抑制I型干扰素通路相关基因表达来调节仔猪肠道的先天免疫反应。

关键词：大肠杆菌k88 仔猪肠道黏膜定量蛋白质组学 Ⅰ型干扰素

来源： cnki会议评论

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大肠杆菌K88诱导的仔猪肠上皮细胞转录组学变化的研究

有机酸、癸酸和地衣芽孢杆菌对感染大肠杆菌k88的仔猪的保护作用

中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会

作者：吴云鹏朱翠俞婷陈庄王丽蒋宗勇广东省农业科学院农业生物基因研究中心广东省农业科学院动物科学研究所

大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli)是导致仔猪肠道功能紊乱及腹泻的重要致病菌,其中ETEC k88是比较常见的致病菌之一,给养猪生产带来重大损失。因此,为了揭示ETEC k88影响仔猪肠上皮细胞免疫功能的具体作用机制,我们研究了ETE... 详细信息

大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli)是导致仔猪肠道功能紊乱及腹泻的重要致病菌,其中ETEC k88是比较常见的致病菌之一,给养猪生产带来重大损失。因此,为了揭示ETEC k88影响仔猪肠上皮细胞免疫功能的具体作用机制,我们研究了ETEC k88攻毒(或不攻毒)的IPEC-J2细胞转录组学的变化。ETEC k88血清型为O149:k91:k88ac,购自中国兽医药品监察所。试验共分为2个处理组(对照组、k88组),每个处理组3个重复。将肠上皮细胞IPEC-J2接种于Transwell 6孔板上室,加入DMEM/F12完全培养基,待细胞分化后(约为1.3×10个/孔),用ETEC k88攻毒处理细胞(k88:细胞=50:1),于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养3 h。培养结束后,PBS清洗细胞2遍后收集细胞。采用RNA-Seq技术研究2组细胞的转录组,并对差异表达基因进行统计分析。结果显示:与对照组相比,ETEC k88攻毒后,得到差异表达基因共126个,其中上调基因为80个,下调基因为46个。对差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的GO(gene ontology)分析显示,共553个DEGs注释到21个GO条目,这些条目主要参与细胞过程、生物过程、代谢调节、信号调节、发育过程及免疫过程等。通过对差异表达基因的Pathway分析表明,差异表达的基因显著富集于22个代谢通路。表明ETEC k88攻毒后显著影响了IPEC-J2细胞的Toll-like受体信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、NF-κB信号通路、T细胞信号通路、MAPk信号通路以及趋化因子等信号通路。这些差异表达的基因大多富集于免疫反应及炎症反应的相关通路中,表明差异表达基因在细胞中发挥了类似的功能。综上,ETEC k88攻毒后,细胞发生相应的免疫反应及炎症反应,这可能是ETECk88导致仔猪腹泻的重要原因之一。

关键词：大肠杆菌k88 IPEC-J2 仔猪肠道转录组学

来源： cnki会议评论

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有机酸、癸酸和地衣芽孢杆菌对感染大肠杆菌K88的仔猪的保护作用

作者：周琪琪华南农业大学

学位级别：硕士

本试验分为有机酸体外筛选试验和仔猪大肠杆菌k88攻毒试验两部分。试验一:1.有机酸体外筛选试验选取了4种复合有机酸LC、LCN、LM和LMN,通过比较有机酸对五株仔猪常见病原菌和两株仔猪胃肠道乳酸乳杆菌的抑菌活性和杀菌活性筛选出抗菌能... 详细信息

本试验分为有机酸体外筛选试验和仔猪大肠杆菌k88攻毒试验两部分。试验一:1.有机酸体外筛选试验选取了4种复合有机酸LC、LCN、LM和LMN,通过比较有机酸对五株仔猪常见病原菌和两株仔猪胃肠道乳酸乳杆菌的抑菌活性和杀菌活性筛选出抗菌能力最强的一种有机酸。2.将4种复合有机酸和癸酸(中链脂肪酸)进行体外组合试验,通过联合抑菌试验筛选出协同抗菌活性最强的一组组合。试验一结果表明:1.在中性条件下(pH=6):四种复合型有机酸中LMN较其它三种有机酸对大肠杆菌的抑菌性较弱,LCN较其它三种有机酸对金黄色葡萄球菌的抑菌性较弱。LC和LM对五种病原菌的抑菌活性基本接近。约氏乳杆菌和罗伊氏乳酸杆菌对有机酸均有较强的耐受性。有机酸在近中性条件下的杀菌活性较弱,在浓度为32 mg/mL的条件下均没有杀死病原菌和乳酸乳杆菌。2.在低pH条件下(pH=4.5):四种有机酸的抑菌和杀菌活性均强于近中性条件,其中LC对五种病原菌抑菌和杀菌活性优于其他三种有机酸;乳酸乳杆菌较病原菌对有机酸有较强的耐受性。3.在近中性和低pH条件下,有机酸和癸酸的组合对大肠杆菌和乳酸杆菌的抗菌活性表现为相加的效应,在试验中没有发现明显的协同作用。综上所述,筛选出LC和LC+CRA组合。试验二:仔猪大肠杆菌k88攻毒试验,选取遗传背景一致、日龄相近、体重相近(7.9±0.5 kg)、健康、精神状态良好的杜长大三元杂断奶仔猪(阉公猪)30头。随机分为5组:(1)对照组(CON):基础日粮;(2)抗生素组(ATB):基础日粮+喹烯酮50 ppm,金霉素75 ppm,吉他霉素50 ppm;(3)有机酸组(OA):基础日粮+1%LC;(4)有机酸中链脂肪酸组合组(OA+CRA):基础日粮+1%LC+0.2%CRA;(5)有机酸益生菌组合组(OA+PB):基础日粮+1%LC+0.02%益生菌。研究基础日粮添加有机酸、有机酸+癸酸组合、有机酸+益生菌组合对缓解仔猪大肠杆菌k88感染的作用效果。每个处理6个重复,每个重复1头猪。试验共23天,其中适应期6天,预饲期10天,正式试验期7天。在预饲期结束后对仔猪全部攻毒,于攻毒后0 h、9 h、24 h、48 h、96 h、168 h采集血液和粪样,并对仔猪粪便进行评分。于攻毒后0 h、9h、24 h、33 h、48 h、96 h、168 h测定仔猪直肠温度。试验二结果表明:(1)大肠杆菌k88攻毒升高了CON组、OA+CRA组仔猪直肠温度(P大肠杆菌k88攻毒之后,处理组仔猪腹泻指数均升高(P大肠杆菌k88攻毒增加了CON组、OA组、OA+CRA组血浆TNF-α含量(P大肠杆菌k88攻毒增加了CON组、OA+CRA组、OA+PB组血浆IFN-γ含量(P大肠杆菌k88攻毒增加了CON组血浆IL-1β含量(P大肠杆菌k88攻毒增加了CON组和OA+CRA组血浆IL-6含量(P大肠杆菌k88攻毒增加OA+CRA组血浆IL-12含量的趋势(P=0.063)和CON组IgG含量的趋势(P=0.061),显著增加OA+CRA血浆IgG含量(P大肠杆菌k88攻毒试验验证了:添加1%有机酸可缓解仔猪大肠杆菌k88感染引起的炎症反应,进而降低由炎症引起的发热和腹泻,且缓解效果与添加抗生素相当,但在有机酸基础上额外添加中链脂肪酸和益生菌并没有取得进一步改善作用。

关键词：有机酸癸酸地衣芽孢杆菌仔猪大肠杆菌k88