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动物源大肠埃希菌o157∶h7多重PCR检测方法的初步研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第3期39卷 34-39页

作者：胡慧段志刚崔保安张龙现陈雅君陈丽颖张红英彭新然孟振北王亚宾河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 漯河出入境检验检疫局河南漯河462000

【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌o157∶h7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌o157抗原的rfbE基因、编码h7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希... 详细信息

【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌o157∶h7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌o157抗原的rfbE基因、编码h7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌o157∶h7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临床应用效果进行了初步验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠埃希菌o157∶h7rfbE、fliC和hylA基因的多重PCR方法,该方法特异性较好,灵敏度较高,可达2.0×102CFU/mL。【结论】初步建立了检测动物源大肠埃希菌o157∶h7的多重PCR方法,该方法可用于携带大肠埃希菌o157∶h7临床动物的分子流行病学调查。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 多重PCR rfbE基因 fliC基因 hylA基因

长沙市岳麓地区大肠埃希菌o157∶h7宿主动物带菌情况调查

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武汉大学学报（医学版） 2012年第2期33卷 178-181页

作者：邓思敏钟巍禹华旭高劲松胡孝洪罗海莲肖海英李佳森扈凤平龙一兵熊燕长沙医学院湖南长沙410219 武汉市疾病预防控制中心湖北武汉430015

目的:调查湖南省长沙市岳麓地区不同乡镇大肠埃希菌o157∶h7宿主动物带菌情况。方法:2011年5月采集长沙市岳麓地区境内鸡、鸭、猪、牛等家畜家禽的粪便标本307份,按国标常规培养法检测大肠埃希菌o157∶h7。并采用PCR对分离菌株o157的抗... 详细信息

目的:调查湖南省长沙市岳麓地区不同乡镇大肠埃希菌o157∶h7宿主动物带菌情况。方法:2011年5月采集长沙市岳麓地区境内鸡、鸭、猪、牛等家畜家禽的粪便标本307份,按国标常规培养法检测大肠埃希菌o157∶h7。并采用PCR对分离菌株o157的抗原特异性基因rfb Eo157进行检测。结果:307份标本中共检出阳性标本6份,总阳性率为1.95%(6/307),其中散放的鸡、鸭、猪带菌阳性率分别为1.67%(3/180)、14.29%(1/7)、2%(2/100)。且分离的6株大肠埃希菌o157∶h7特异性基因rfb Eo157均为阳性。结论:长沙市岳麓地区家畜家禽已存在大肠埃希菌o157∶h7感染,应引起足够的重视。提示加强宿主动物大肠埃希菌o157∶h7监测,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 宿主动物岳麓地区带菌情况调查

大肠埃希菌o157:h7新型多重PCR检测方法的建立及其初步应用

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中国生物制品学杂志 2015年第9期28卷 956-960页

作者：李争卜昭阳卢晓冉李诗语郎需龙王兴龙吴大成吉林农业大学动物科技学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062 广东省农科院动物卫生研究所广东广州510640

目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌o157∶h7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌o157∶h7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳... 详细信息

目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌o157∶h7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌o157∶h7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌o157∶h7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌o157∶h7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌o157∶h7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌o157∶h7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌o157∶h7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 多重PCR

应用免疫磁珠分离法及荧光定量PCR技术快速检测肠出血性大肠埃希菌o157:h7

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 291-293,315页

作者：王涛刘凯王艳綦廷娜叶长芸熊衍文贵阳医学院微生物学教研室贵阳550004 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(real-time PCR)技术快速检测肠出血性大肠埃希菌o157∶h7的方法。方法根据肠出血性大肠埃希菌o157∶h7抗原特异性基因rfbEo157设计引物和荧光探针,建立real-time... 详细信息

目的建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(real-time PCR)技术快速检测肠出血性大肠埃希菌o157∶h7的方法。方法根据肠出血性大肠埃希菌o157∶h7抗原特异性基因rfbEo157设计引物和荧光探针,建立real-time PCR检测体系,并检测其特异性及敏感性;用o157免疫磁珠特异性捕获标本菌液中的o157∶h7大肠埃希菌,结合real-time PCR对磁珠捕获菌细胞的DNA进行检测分析。结果 Real-time PCR检测结果显示,o157∶h7大肠埃希菌可产生荧光信号,而其他常见致病菌均未见明显荧光信号;采用IMS-real-time PCR方法检测标本,菌液含菌量为3.3×102CFU/mL时即可被检出,检测全过程需时约4h。结论 IMS-real-time PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、快速易操作等特点,该检测方法能提高o157∶h7大肠埃希菌的检出率和准确性,可用于标本的快速诊断、疾病监测和暴发疫情的病原学调查。

关键词：免疫磁珠分离法荧光定量PCR 大肠埃希菌o157∶h7

我国分离的大肠埃希菌o157∶h7的毒力基因检测分析

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中国人兽共患病学报 2010年第6期26卷 515-518页

作者：王涛刘丽云王娉熊衍文白雪梅叶长芸徐建国贵阳医学院微生物学教研室贵阳550004 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的了解我国部分省区分离的大肠埃希菌o157∶h7菌株特异基因和毒力基因携带特点及在不同动物宿主来源的菌株分布情况。方法采用PCR对分离菌株的o157、h7抗原特异基因rfbEo157、fliCh7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因进行检测... 详细信息

目的了解我国部分省区分离的大肠埃希菌o157∶h7菌株特异基因和毒力基因携带特点及在不同动物宿主来源的菌株分布情况。方法采用PCR对分离菌株的o157、h7抗原特异基因rfbEo157、fliCh7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因进行检测。结果在1992-2006年收集的o157及h7抗原阳性的345株大肠埃希菌株中,rfbEo157、fliCh7特异基因均为阳性,eaeA和hlyA的阳性率分别为99.4%和99.1%,stx2的阳性率为91.9%,stx1阳性率仅为13.3%,stx1+stx2的阳性率为13.0%,来源于病人和动物菌株的stx2阳性率均高于stx1。检测菌株中毒力基因型以eaeA+hlyA+stx2为主。携带毒力基因的o157∶h7菌株在羊、牛等动物宿主中广泛存在。结论 stx2是病人及羊、牛等动物来源的产志贺毒素大肠埃希菌o157∶h7携带的主要毒素基因型。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 毒力基因检测

小鼠肠道菌群的多样性不因大肠埃希菌o157:h7感染而降低

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中国微生态学杂志 2015年第1期27卷 19-23,27页

作者：孙长奇李世国刘宗正田骁王先坤金建玲山东师范大学生命科学学院山东济南250014 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室山东济南250100

目的探讨大肠埃希菌o157∶h7感染对小鼠肠道菌群的影响。方法采用大肠埃希菌o157∶h7菌悬液,灌胃制备感染小鼠。随后测定小鼠的生长情况和死亡率;收集肠道菌群,DGGE检测小鼠个体间肠道菌群的变化,高通量测序检测组间感染小鼠肠道菌群的... 详细信息

目的探讨大肠埃希菌o157∶h7感染对小鼠肠道菌群的影响。方法采用大肠埃希菌o157∶h7菌悬液,灌胃制备感染小鼠。随后测定小鼠的生长情况和死亡率;收集肠道菌群,DGGE检测小鼠个体间肠道菌群的变化,高通量测序检测组间感染小鼠肠道菌群的变化。结果大肠埃希菌o157∶h7感染小鼠与正常对照组小鼠相比,小鼠体重、死亡率差异无统计学意义。DGGE结果显示,在不同小鼠个体之间,它们的肠道细菌的种类和数量存在明显差异。高通量测序结果显示,大肠埃希菌o157∶h7感染小鼠肠道菌群的多样性高于对照组,但优势菌的丰度有显著变化。结论大肠埃希菌o157∶h7感染,尽管极大改变了小鼠肠道优势菌群的比例,但没有降低其多样性。另外,小鼠个体间肠道菌群多样性的差异在微生态研究中不容忽视。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 肠道菌群小鼠高通量测序 DGGE

基于噬菌体特异性的新型荧光酶联方法检测食品中大肠埃希菌o157∶h7

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中国食品卫生杂志 2012年第3期24卷 222-225页

作者：吕敬章刘慧玲黄李华赵芳马淑棉洪小柳深圳出入境检验检疫局广东深圳518045

目的对一种基于噬菌体特异性的检测食品中大肠埃希菌o157∶h7的新型荧光酶联方法(VIDASECPT)进行了评价。方法利用VIDASECPT、VIDASECo、BAXo157三种快速方法检测不同浓度大肠埃希菌o157∶h7标准菌株的生理盐水悬浮液,并对VIDAS... 详细信息

目的对一种基于噬菌体特异性的检测食品中大肠埃希菌o157∶h7的新型荧光酶联方法(VIDASECPT)进行了评价。方法利用VIDASECPT、VIDASECo、BAXo157三种快速方法检测不同浓度大肠埃希菌o157∶h7标准菌株的生理盐水悬浮液,并对VIDASECPT和常规培养法检测食品中大肠埃希菌o157∶h7进行了比对。结果 VIDASECPT检测大肠埃希菌o157∶h7的检出限为104 CFU/ml,并且不受大肠埃希菌背景菌的干扰,其他两种快速方法的检出限均为105 CFU/ml,其中VIDASECo易受到背景菌的干扰;检测不同食品基质中大肠埃希菌o157∶h7,当大肠埃希菌o157∶h7的浓度为104 CFU/ml时,VIDASECPT与常规培养法无统计学差异。结论 VIDASECPT方法检测大肠埃希菌o157∶h7具有快速、灵敏、抗干扰性强的特点。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 VIDASECPT VIDASECo BAXo157

大肠埃希菌o157:h7家蝇实验带菌消长的研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2010年第5期21卷 457-459页

作者：丁华孙建荣邱丽华倪晓平杭州市疾病预防控制中心城乡社区公共卫生管理办公室浙江杭州310021

目的采用大肠埃希菌o157∶h7-EDL933株,实验感染家蝇,观察家蝇体内外感染和带菌消长情况。方法点滴法体外定量染菌,剂量为1μ(l菌悬液浓度为8.0×105～1.9×107cfu/ml),并采用昆虫单虫单管方法饲养观察。结果家蝇经体外染菌,获得体内外... 详细信息

目的采用大肠埃希菌o157∶h7-EDL933株,实验感染家蝇,观察家蝇体内外感染和带菌消长情况。方法点滴法体外定量染菌,剂量为1μ(l菌悬液浓度为8.0×105～1.9×107cfu/ml),并采用昆虫单虫单管方法饲养观察。结果家蝇经体外染菌,获得体内外带菌,体外带菌时间中位数为(96.0±15.3)h(95%CI:66.0～126.0h);体内中位数为(144.0±17.3)h(95%CI:110.2～177.8h);家蝇体内外带菌消长差异无统计学意义(χ2=0.74,P=0.388),家蝇最长带菌时间至少216h(9d)。结论研究结果提示,家蝇不仅是o157∶h7疾病传播的媒介,更重要的可能是人类感染潜在的贮存宿主。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 家蝇实验感染

我国大肠埃希菌o157∶h7分离株大质粒po157变异性研究

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疾病监测 2013年第3期28卷 184-188页

作者：徐雪芳伍建宏刘学通熊衍文徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的分析我国分离的大肠埃希菌o157∶h7菌株中大质粒po157的变异情况。方法采用限制性内切酶酶切法分析质粒酶切图谱,而后采用嵌套引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,并用Southern blot进行验证,最后测序。结果... 详细信息

目的分析我国分离的大肠埃希菌o157∶h7菌株中大质粒po157的变异情况。方法采用限制性内切酶酶切法分析质粒酶切图谱,而后采用嵌套引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,并用Southern blot进行验证,最后测序。结果根据酶切图谱将60株大肠埃希菌o157∶h7分为A～E 5个群,而进一步研究表明造成A群与C群hindⅢ酶切图谱的不同是由C群中的一个小质粒造成的。PCR结果显示A群与C群中的引物对5和25,B群中的引物对25得到的PCR条带与po157出发菌株不同,其他均相同。测序结果显示造成引物对25在A～C群中与致病性大质粒po157不同的原因是IS1310序列的插入。结论我国大肠埃希菌o157∶h7分离株致病性大质粒po157相对保守,部分菌株中存在插入序列如IS1310,这也是造成我国大肠埃希菌o157∶h7 po157质粒变异的主要原因。

关键词：大肠埃希菌o157∶h7 po157 IS1310