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大波斯菊苷对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及分子机制研究

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大波斯菊苷对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及分子机制研究

作者：刘苗苗合肥工业大学

学位级别：硕士

宫颈癌是是全球妇女中致死率前四的癌症,而其目前的治疗方法存在着复发率高、副作用大等风险。流行病学研究证明黄酮类化合物对多种类型的癌症（尤其是女性）具有抑制作用。大波斯菊苷作为一种黄酮类化合物,已被报道具有抗癌活性。目前... 详细信息

宫颈癌是是全球妇女中致死率前四的癌症,而其目前的治疗方法存在着复发率高、副作用大等风险。流行病学研究证明黄酮类化合物对多种类型的癌症（尤其是女性）具有抑制作用。大波斯菊苷作为一种黄酮类化合物,已被报道具有抗癌活性。目前,由于天然活性物质具有低毒、安全等特性而被越来越多的科学家们作为膳食补充剂、药物辅助治疗剂进行研究。本论文通过转录组学和体外细胞实验研究了大波斯菊苷对宫颈癌Hela细胞的抑制机理,主要研究内容及结果如下:（1）大波斯菊苷对宫颈癌Hela细胞m RNA整体水平的影响。MTT实验表明大波斯菊苷可以抑制Hela细胞增殖且半抑制浓度为47.26μM。用40μM的大波斯菊苷处理Hela细胞,利用转录组高通量测序技术从m RNA整体水平上分析其差异表达基因。药物处理后,Hela细胞内有7359个基因表达量发生了变化,其中2873个基因表达量上升,4486个基因表达量下降,且差异基因主要富集在内质网蛋白质加工信号通路、细胞周期通路和自噬-动物通路,利用定量PCR进行了部分显著差异基因验证,结果与表达谱一致。（2）大波斯菊苷诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及分子机制。通过流式细胞术检测确定大波斯菊苷可以剂量依赖性的促进Hela细胞凋亡并阻滞细胞周期在G0/G1期、降低线粒体的膜电位;通过q PCR和WB技术发现大波斯菊苷可通过调节CDK2/6、Cyclin A/D/E和p16（INK4A）等周期相关基因和蛋白、死亡受体途径和线粒体途径相关基因和蛋白如Fas L、Fas、TNF-R1、Bak、Bax、Bcl-2、Bad、Bcl-xl、细胞色素c和caspase3/8/9来促进细胞凋亡。另外,PTEN/PI3K/AKT信号通路也参与大波斯菊苷诱导的Hela细胞凋亡。（3）大波斯菊苷促进宫颈癌Hela细胞的自噬、迁移的影响及分子机制。大波斯菊苷可以增强LC3B自噬荧光,结合q PCR和WB实验研究自噬相关基因和蛋白:LC3B、添加自噬抑制剂3-MA表明自噬与ROS、凋亡存在一定的关系;大波斯菊苷通过调节内质网通路相关基因和蛋白ATF6、chop影响Hela细胞的自噬;迁移相关基因和蛋白MMP2/9趋势和细胞划痕愈合实验、迁移实验的结果一致,证明大波斯菊苷可以抑制宫颈癌Hela细胞的迁移和侵袭。

关键词：大波斯菊苷宫颈癌转录组凋亡自噬

白背叶中大波斯菊苷的提取分离与薄层色谱鉴别

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国际中医中药杂志 2020年第11期42卷 1114-1118页

作者：谢巍杨妮蒋受军广西壮族自治区柳州市妇幼保健院药学部广西壮族自治区广西科技大学附属妇产医院、儿童医院柳州545001 广西壮族自治区食品药品监督管理局不良反应中心南宁530029

目的建立白背叶中1个黄酮成分的提取分离方法及其薄层色谱鉴别方法。方法用95%乙醇回流提取白背叶,旋蒸回收乙醇,用硅胶拌匀,以石油醚洗脱、乙酸乙酯回流提取,回收浓缩乙酸乙酯部位。取乙酸乙酯部位,上聚酰胺柱,用水和甲醇梯度洗脱,收集... 详细信息

目的建立白背叶中1个黄酮成分的提取分离方法及其薄层色谱鉴别方法。方法用95%乙醇回流提取白背叶,旋蒸回收乙醇,用硅胶拌匀,以石油醚洗脱、乙酸乙酯回流提取,回收浓缩乙酸乙酯部位。取乙酸乙酯部位,上聚酰胺柱,用水和甲醇梯度洗脱,收集60%乙醇馏分,进一步分离纯化;以大波斯菊苷为对照品,白背叶为对照药材,硅胶G板为吸附剂,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶3∶0.3)为展开剂,进行薄层色谱鉴别。结果从白背叶中分离得到大波斯菊苷,建立了白背叶薄层鉴别方法,斑点清晰,分离效果好。结论该方法可准确、快速对白背叶进行鉴别,可更好地控制白背叶药材质量。

关键词：白背叶大波斯菊苷提取法色谱法薄层

不同季节的葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定

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天津中医药 2010年第1期27卷 74-76页

作者：陈再兴陈佳琪朱旭王琳时牛孟繁浩中国医科大学药学院沈阳110001

[目的]同时测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量。[方法]采用高效液相色谱法(HPLC)测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量,色谱柱kromasilC18,以甲醇-0.2%磷酸溶液(45:55)为流动相,流速为1.0mL/m... 详细信息

[目的]同时测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量。[方法]采用高效液相色谱法(HPLC)测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量,色谱柱kromasilC18,以甲醇-0.2%磷酸溶液(45:55)为流动相,流速为1.0mL/min,柱温35℃,检测波长为350nm。[结果]木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷在0.072～0.36μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系(r=0.9999),精密度相对平均标准差(RSD)=2.06%,平均加样回收率为99.3%,RSD为2.8%;大波斯菊苷在0.05～0.40μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系(r=0.9997),精密度RSD=1.73%,平均加样回收率为100.2%,RSD%为2.7%。葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量在7、8月份含量最高,大波斯菊苷在6月份含量最高。[结论]该方法简单、灵敏、稳定、可靠,可用于葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定。葎草适宜的采收季节应在6～8月份。

关键词：葎草木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷大波斯菊苷含量测定季节

葎草不同部位中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定

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中国药事 2011年第6期25卷 547-549页

作者：陈再兴孟舒朱旭王琳孟繁浩中国医科大学药学院沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院

目的测定葎草的根、茎、叶、叶柄不同部位所含的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量。方法采用HPLC法测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量,色谱柱为DikmaDiamonsil C18柱,以甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55... 详细信息

目的测定葎草的根、茎、叶、叶柄不同部位所含的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量。方法采用HPLC法测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量,色谱柱为DikmaDiamonsil C18柱,以甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55）为流动相,流速为***-1,柱温为35℃,检测波长为350nm。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷在0.05~0.40μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系（r=0.9999）;大波斯菊苷在0.072~0.36μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系（r=0.9997）。根与叶中主要含有木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷,且叶中的含量最高。茎与叶柄中含有较多的其他成分。结论该方法可用于葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定。葎草的叶与其他部位应分别药用。

关键词：葎草木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷大波斯菊苷含量测定不同部位

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HPLC法测定白背叶中大波斯菊苷含量

亚太传统医药 2015年第13期11卷 16-18页

作者：谢巍蒋受军广西中医药大学广西南宁530001 广西玉林食品药品检验所广西玉林537000

目的：建立高效液相色谱法测定白背叶药材中大波斯菊苷含量的方法。方法：采用Gemini—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），以甲醇-0．1％磷酸水溶液（40：60）为流动相，柱温：25℃，流速：1．0mL·min，检测波长：336nm。结果：大波... 详细信息

目的：建立高效液相色谱法测定白背叶药材中大波斯菊苷含量的方法。方法：采用Gemini—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），以甲醇-0．1％磷酸水溶液（40：60）为流动相，柱温：25℃，流速：1．0mL·min，检测波长：336nm。结果：大波斯菊苷达到基线分离，在0．04486～0．8972／zg范围内线性关系良好（r=0．9993），大波斯菊苷平均加样回收率（n=6）为97．67％（RSD=1．94%）。结论：所建立的含量测定方法操作简单、快速、重复性好，可用于白背叶药材的质量控制。

关键词：白背叶大波斯菊苷 HPLC 含量测定

大波斯菊苷通过诱导乳腺癌细胞自噬抑制乳腺癌的发展

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 750-750页

作者：汪丹潘燕北京大学基础医学院药理学系北京100191

目的乳腺癌是威胁全球女性健康排名第一的恶性肿瘤,全球每年新增约226万患者。尽管随着诊断和治疗手段的发展,乳腺癌患者的生存期得到了显著延长,但是仍有每年超过50万的乳腺癌患者死亡。因此,有效遏制乳腺癌以及探索针对乳腺癌的治疗... 详细信息

目的乳腺癌是威胁全球女性健康排名第一的恶性肿瘤,全球每年新增约226万患者。尽管随着诊断和治疗手段的发展,乳腺癌患者的生存期得到了显著延长,但是仍有每年超过50万的乳腺癌患者死亡。因此,有效遏制乳腺癌以及探索针对乳腺癌的治疗靶点成为迫切需要。大波斯菊苷(cosmosiin),又名芹菜素-7-葡萄糖苷(apigenin-7-glucoside),是芹菜素(apigenin)的糖苷衍生物,属于黄酮苷类化合物,广泛分布于洋蓟、洋甘菊和橄榄等植物中。据报导,大波斯菊苷具有抗糖尿病和治疗阿尔茨海默病的药理活性。此外,有研究发现,大波斯菊苷具有抗肿瘤的能力,但是其机制尚不明确,并且其对于乳腺癌的药理作用尚无报导。方法利用MTS法检测大波斯菊苷对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖能力的影响;利用Transwell试验检测MCF-7细胞的迁移能力变化;利用纤维粘连蛋白包被的96孔板检测细胞黏附能力;Western印迹法实验检测自噬以及代谢相关分子的蛋白表达水平的变化。结果大波斯菊苷7.5~30 mg·L^(-1)能剂量依赖地抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和黏附能力。此外,大波斯菊苷30 mg·L^(-1)处理MCF-7细胞24 h后,细胞中P62蛋白表达水平显著下调,LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白表达水平的比值显著升高,且p-AMPK的蛋白表达水平显著上调。结论大波斯菊苷可能通过激活AMPK信号通路促进乳腺癌细胞自噬,从而抑制乳腺癌的发展。

关键词：大波斯菊苷乳腺癌自噬

裸花紫珠醋酸乙酯部位化学成分及抗炎活性研究

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中草药 2023年第16期54卷 5146-5153页

作者：杨国栋刘昱甫刘永林马瑜李诒光陈杰江西中医药大学江西南昌330004 江中药业股份有限公司江西南昌330004

目的研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora叶的化学成分,并对分离的化合物进行初步的抗炎筛选。方法采用各种色谱方法(硅胶、MCI、羟丙基葡聚糖凝胶、ODS)进行分离纯化,并结合核磁、质谱数据明确其结构。通过Griess法对分离得到的化合物进... 详细信息

目的研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora叶的化学成分,并对分离的化合物进行初步的抗炎筛选。方法采用各种色谱方法(硅胶、MCI、羟丙基葡聚糖凝胶、ODS)进行分离纯化,并结合核磁、质谱数据明确其结构。通过Griess法对分离得到的化合物进行初步的抗炎活性筛选。结果从裸花紫珠叶中醋酸乙酯部位分离得到17个单体化合物,分别鉴定为(6S,7R)-3-oxo-megastigma-4,8-dien-7-O-β-D-glucoside(1)、phoebenoside A(2)、(6R,9R)-3-oxo-α-ionol-9-O-β-D-glucopyranoside(3)、blumenol C glucoside(4)、异毛蕊花糖苷(5)、myricoside(6)、肉苁蓉苷D(7)、地黄苷(8)、木通苯乙醇苷B(9)、4,4’-dimethoxy-3’-hydroxy-7,9’:7’,9-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside(10)、木犀草素-7-O-葡萄糖苷(11)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(12)、木犀草素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(13)、大波斯菊苷(14)、luteolin-7-O-β-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-Dglucopyranoside(15)、芹菜素-7-O-β-D-新橙皮苷(16)、2-O-butyl-1-O-(2′-ethylhexyl)benzene-1,8-dicarboxylate(17)。化合物7、14对NO生成抑制率达到45%以上。结论化合物1~4、9~11、17为首次从该属植物中分离获得。其中化合物7和14能显著抑制NO的产生,具有良好的体外抗炎效果。

关键词：裸花紫珠抗炎活性苯乙醇苷黄酮肉苁蓉苷D 大波斯菊苷

不同产地浮萍中5种黄酮成分量及抗氧化活性的化学模式识别研究

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中草药 2017年第5期48卷 985-990页

作者：蒋祥亮刘聪燕陈彦黄萌萌王理想李萍安徽中医药大学安徽合肥230012 江苏省中医药研究院中药组分与微生态研究中心江苏南京210028

目的测定不同产地浮萍Spirodela polyrriza中5个黄酮类成分的量,并对其抗氧化活性进行评价。方法采用HPLC法,以乙腈-0.1%甲酸为流动相测定8个产地17批浮萍药材中荭草素、牡荆素、木犀草苷、大波斯菊苷、木犀草素的量;采用DPPH清除率法... 详细信息

目的测定不同产地浮萍Spirodela polyrriza中5个黄酮类成分的量,并对其抗氧化活性进行评价。方法采用HPLC法,以乙腈-0.1%甲酸为流动相测定8个产地17批浮萍药材中荭草素、牡荆素、木犀草苷、大波斯菊苷、木犀草素的量;采用DPPH清除率法比较不同产地浮萍的抗氧化活性,并结合聚类分析和主成分分析等化学模式识别技术对浮萍质量进行评价。结果不同产地浮萍中5个黄酮类成分量存在一定差异,聚类分析和主成分分析均可将不同产地浮萍分为3类,且分类结果一致。其中陕西和山西产地的浮萍中荭草素、牡荆素、木犀草苷的量均较其他产地明显偏高;相关性分析表明,氧化清除率与黄酮类成分量呈显著正相关。结论陕西和山西产地的浮萍黄酮类成分量高,抗氧化能力较强。所建立的分析方法稳定可靠,可为浮萍药材的产地识别和质量控制提供参考。

关键词：浮萍黄酮类荭草素牡荆素木犀草苷大波斯菊苷木犀草素聚类分析主成分分析抗氧化活性

一测多评结合化学计量学及加权逼近理想解排序法对不同产地葎草药材的多指标质量控制及差异评价

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中草药 2024年第14期55卷 4907-4916页

作者：廖春玲吴燕红吴月华王志国江西管理职业学院生物医药系江西南昌330200 江西省医药技师学院江西省医药学校生物医药系江西南昌330200 江西省药品检验检测研究院江西南昌330029 江西中医药大学药学院江西南昌330004

目的建立一测多评(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)结合化学计量学及加权逼近理想解排序(technique for order preference by similarity to ideal solution,TOPSIS)在不同产地葎草Humulus scandens药材多指标定量检测及质量差异评价中的应用方法。方法对7省18个批次葎草样品进行回流提取,以木犀草苷、白桦脂酸为内参物,采用QAMS同时测定提取物中10种有效成分(芦丁、牡荆素、木犀草苷、大波斯菊苷、木犀草素、芹菜素、齐墩果酸、白桦脂酸、β-谷甾醇和豆甾醇),并与外标法进行比较;按《中国药典》2020年版四部方法检测浸出物、总灰分和酸不溶性灰分。采用化学识别模式和加权TOPSIS法对QAMS法计算数据和浸出物、总灰分、酸不溶性灰分检测数据进行分析,建立葎草质量差异评价模型。结果建立了多成分QAMS定量方法,方法学验证结果良好,以木犀草苷、白桦脂酸为内参物时相对校正因子的均值可用于定量分析,同时耐用性良好,2种方法所得含量结果无明显差异。浸出物、总灰分和酸不溶性灰分检测结果稳定。18批样品聚为3类,相邻产地聚为一组;木犀草苷、豆甾醇、大波斯菊苷和齐墩果酸可能是影响葎草产品质量主要潜在标志物;加权TOPSIS法分析结果显示18批葎草质量评价贴近度(Jb)在0.2448~0.6884,其中S15最大(0.6884)。结论建立的QAMS、化学计量学及加权TOPSIS法可用于不同产地葎草中多指标定量检测及质量差异评价。

关键词：葎草一测多评法化学计量学加权TOPSIS法浸出物总灰分酸不溶性灰分木犀草苷豆甾醇大波斯菊苷齐墩果酸质量评价