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X-连锁严重联合免疫缺陷病的植入前遗传学诊断

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中山大学学报（医学科学版） 2017年第6期38卷 955-960页

作者：吴海涛沈晓婷叶青剑刘瑜亮钟依平曾艳红徐艳文周灿权中山大学附属第一医院生殖医学中心广东广州510080 江门市中心医院生殖中心广东江门529030 中山大学附属第三医院妇科广东广州510630

【目的】采用多重置换扩增建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断方法,应用于X-连锁严重联合免疫缺陷病(X-SCID)的植入前遗传学诊断(PGD)。【方法】选择5个位于致病基因IL-2受体γ链(IL2RG)基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-SCID... 详细信息

【目的】采用多重置换扩增建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断方法,应用于X-连锁严重联合免疫缺陷病(X-SCID)的植入前遗传学诊断(PGD)。【方法】选择5个位于致病基因IL-2受体γ链(IL2RG)基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-SCID家系进行单体型分析,采用多重置换扩增(MDA)对单细胞进行全基因组扩增,对扩增产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点进行单体型分析,结合位点Amel进行性别诊断,STR位点均采用单重荧光PCR,同时对IL2RG基因exon5进行测序分析。【结果】对家系分析中,共有3个STR位点具有多态性。对10个单淋巴细胞及10个单卵裂球进行了预实验:MDA扩增成功率为100%,对致病基因IL2RG exon5的行基因测序的检测效率为100%;对于3个有多态性的STR位点和AMEL,PCR扩增效率为96.3%(77/80),等位基因脱扣率(ADO)为11.5%(7/61)。对该家系进行了一个周期的PGD,对7个胚胎进行了诊断,其中2个为正常胚胎,移植后获得双胎妊娠,早产活产一个健康男婴及一个健康女婴。【结论】采用多重置换扩增结合致病基因特异性扩增测序检测及单体型分析在单细胞水平对X-连锁严重联合免疫缺陷病进行检测,两者相结合可避免污染、等位基因脱扣等导致的误诊,提高了PGD诊断效率。

关键词： X-连锁严重联合免疫缺陷病植入前遗传学诊断多重置换扩增短串联重复序列单体型分析

MDA-MSP技术检测粪便miR34b/c甲基化及其在结直肠癌早期诊断中的意义

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世界华人消化杂志 2013年第8期21卷 724-728页

作者：张丰云管静芝赵慧霞李秋文董伟伟段昕妤朱建华王如良郝怡鑫叶明肖文华中国人民解放军第四军医大学西京医院肿瘤科陕西省西安市710032 中国人民解放军第309医院肿瘤科北京市100091 中国人民解放军总医院第一附属医院肿瘤科北京市100048

目的:探讨粪便miR34b/c甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义.方法:从126例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便和64例正常对照者的粪便中分别提取DNA,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)技术对经过亚... 详细信息

目的:探讨粪便miR34b/c甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义.方法:从126例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便和64例正常对照者的粪便中分别提取DNA,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)技术对经过亚硫酸氢盐修饰样本进行全基因组扩增,结合甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测组织和粪便中miR34b/c基因甲基化状态.结果:结直肠癌癌组织miR34b/c基因的甲基化阳性率为95.2%(120/126),对应的癌旁正常组织为11.9%(15/126),两者比较有显著差异(P0.05).结直肠癌粪便miR34b/c甲基化阳性率为90.2%(111/123),显著高于正常对照7.8%(5/64),差异有统计学意义(P<0.01).粪便DNAmiR34b/c用于结直肠癌早期诊断的敏感性为91.2%,特异性为92.2%.结论:miR34b/c甲基化是结直肠癌的重要分子特征,检测粪便miR34b/c甲基化有望成为结直肠癌早期诊断的一个全新的肿瘤标志物.MDA结合MSP为miRNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.

关键词： miR34b c 甲基化特异性PCR 多重置换扩增粪便

REPLI-g~? Single Cell Kit应用于微量DNA扩增的效率评估

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法医学杂志 2019年第2期35卷 210-215页

作者：徐倩南沈琼张佳怡张轶伦李莉刘希玲李成涛温州医科大学基础医学院法医学系浙江温州325035 司法鉴定科学研究院上海市法医学重点实验室上海市司法鉴定专业技术服务平台上海200063 上海交通大学医学院附属第九人民医院超声诊断科上海201999 内蒙古医科大学法医学教研室内蒙古呼和浩特010030 内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014060

目的评估REPLI-g~?Single Cell Kit应用于检材DNA扩增的效率,探讨该试剂盒在法医学微量DNA扩增方面的应用价值。方法选取3种微量DNA提取试剂盒,对来自10名无关个体的外周血进行DNA提取,并对所提DNA的产量和纯度进行比较。根据比较结果选... 详细信息

目的评估REPLI-g~?Single Cell Kit应用于检材DNA扩增的效率,探讨该试剂盒在法医学微量DNA扩增方面的应用价值。方法选取3种微量DNA提取试剂盒,对来自10名无关个体的外周血进行DNA提取,并对所提DNA的产量和纯度进行比较。根据比较结果选取1例DNA样本进行浓缩稀释作为全基因组扩增起始样本,使用REPLI-g~?Single Cell Kit对起始样本进行全基因组扩增,计算扩增产量及扩增倍数,并进行琼脂糖凝胶电泳检测片段分布情况。使用Goldeneye~? DNA身份鉴定系统20A对起始样本和经全基因组扩增所得DNA进行STR分型。结果经比较后选取由QIAsymphony~? DNA Investigator~? Kit所提取的1例DNA进行浓缩稀释作为全基因组扩增起始样本。经REPLI-g~?Single Cell Kit对一系列起始样本全基因组扩增后,发现扩增产量均值最低可达到8.77×10~3ng,相应的扩增倍数均值为1.40×10~6,DNA片段大且集中。全基因组扩增样本随着起始样本量的减少,STR分型成功率降低,但当起始样本量低于0.5ng时,全基因组扩增后样本的STR分型成功率高于相同起始量未经全基因组扩增样本的STR分型成功率。结论应用REPLI-g~?Single Cell Kit可有效提高模板DNA总量,特别对于微量DNA,可在一定程度上提高STR分型成功率。

关键词：法医遗传学短串联重复全基因组扩增多重置换扩增微量检材

单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因突变的实验研究

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中华医学遗传学杂志 2007年第1期24卷 67-71页

作者：金卫王利民郑菊芬李铮黄翼然上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科 200127

目的建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因（VHL）突变的实验方法。方法单个淋巴细胞基于多重置换扩增（multiple displacement amplification，MDA）的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR，结合各荧光的终点变... 详细信息

目的建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因（VHL）突变的实验方法。方法单个淋巴细胞基于多重置换扩增（multiple displacement amplification，MDA）的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR，结合各荧光的终点变化判断对应的等位基因存在与否。结果 MDA后单细胞扩增效率为90．91％，污染率为0；通过测序，患者VHL等位基因的脱扣率为26．67％，诊断正确率为73．33％；通过结合相应荧光的终点变化判断患者VHL基因的等位基因的脱扣率为16．67％，正确率为83．33％。结论单细胞MDA后常规PCR后测序及实时荧光定量PCR能够特异、准确地检测单个淋巴细胞的VHL基因型，两者的联合应用有助于提高检测的准确性。

关键词： von Hippel-Lindau病单细胞实时定量聚合酶链反应多重置换扩增植入前遗传学诊断

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胚胎植入前遗传学诊断技术的挑战

中国实用妇科与产科杂志 2010年第10期26卷 768-772页

作者：徐艳文中山大学附属第一医院生殖医学中心广东广州510080

如何安全有效地获得胚胎的遗传物质,如何克服极低样本量对诊断的的准确性和有效性的影响,以及如何开发适用范围更广的诊断方法是植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagno-sis,PGD)技术层面面临的主要挑战。多个随机对照前瞻性... 详细信息

如何安全有效地获得胚胎的遗传物质,如何克服极低样本量对诊断的的准确性和有效性的影响,以及如何开发适用范围更广的诊断方法是植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagno-sis,PGD)技术层面面临的主要挑战。多个随机对照前瞻性研究证实非整倍体筛查显著降低了高龄妇女的临床妊娠率和活产率,其原因可能是由于卵裂期胚胎的染色体不稳定性影响结果的准确性。通过极体活检进行非整倍体筛查的临床应用价值尚须进一步研究。

关键词：植入前遗传学诊断胚胎活检聚合酶链式反应荧光原位杂交多重置换扩增

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混合斑中精子细胞分离及其DNA制备方法

法医学杂志 2007年第4期23卷 286-289页

作者：李鑫胡兰冯雪飞刘晓中国人民公安大学公安部物证鉴定中心北京100038 北京市公安局刑侦总队北京100085 上海艾本德生物技术国际贸易有限公司上海200122

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩... 详细信息

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩增,省去了对起始模板的纯化过程,DNA扩增倍数达30000倍以上,片段长度大多在15 kb以上,其STRs复合扩增分型结果有可参照性。结论显微操作法可以有效捕获精子细胞,排除干扰,多重置换扩增可以提供足够量的产物用于法医DNA分析,该方法具有可行性。

关键词：法医物证学显微操作法混合斑精子细胞多重置换扩增全基因组扩增短串联重复序列

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Phi29DNA聚合酶最新应用研究进展

药物生物技术 2016年第2期23卷 150-154页

作者：练杜娟仇建萍张平静朱远源李谦中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 百奥迈科生物技术有限公司江苏南通226010

phi29 DNA聚合酶来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29,具有连续合成和链置换性质,且具有高保真性。它是DNA扩增包括滚环扩增和多重置换扩增的理想工具。文章从phi29 DNA聚合酶的来源和结构与功能、近期对于phi29 DNA聚合酶的应用研究入手,综... 详细信息

phi29 DNA聚合酶来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29,具有连续合成和链置换性质,且具有高保真性。它是DNA扩增包括滚环扩增和多重置换扩增的理想工具。文章从phi29 DNA聚合酶的来源和结构与功能、近期对于phi29 DNA聚合酶的应用研究入手,综述了phi29 DNA聚合酶的结构与功能的关系及其用于核酸测序,病毒检测,miRNA检测方面的应用前景。

关键词： phi29 DNA聚合酶滚环扩增多重置换扩增测序病毒检测 miRNA检测

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全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测

法医学杂志 2006年第1期22卷 43-44,47页

作者：周怀谷张晨上海市刑事科学技术研究所上海200083

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pg... 详细信息

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pgDNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型。结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率。

关键词：多重置换扩增全基因组扩增低拷贝数

短串联重复序列在染色体罗氏易位植入前遗传学诊断的应用

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实用妇产科杂志 2016年第11期32卷 830-833页

作者：沈晓婷吴海涛徐艳文钟依平曾艳红王静丁晨晖周灿权中山大学附属第一医院广东省生殖医学重点实验室广东广州510080 中山大学附属第三医院广东广州510080

目的：采用多重置换扩增（MDA）结合短串联重复序列（STR）建立一种基于PCR技术诊断染色体罗氏易位的植入前遗传学诊断（PGD）方法。方法：选择位于易位染色体上的STR位点，对家系采用荧光PCR进行分析，选择有多态性的位点，再采用MDA... 详细信息

目的：采用多重置换扩增（MDA）结合短串联重复序列（STR）建立一种基于PCR技术诊断染色体罗氏易位的植入前遗传学诊断（PGD）方法。方法：选择位于易位染色体上的STR位点，对家系采用荧光PCR进行分析，选择有多态性的位点，再采用MDA对单细胞进行全基因组扩增，根据家系分析的结果，对具有多态性的STR位点进行分析诊断。结果：对3个家系进行了4个取卵周期（3个PGD周期），每个家系分别采用7～15个具有多态性的STR位点进行分析，共对24个胚胎进行诊断。PGD的诊断效率为95．8％（23／24），平衡胚胎占52．2％（12／23），异常胚胎占47．8％（11／23），共移植了6个胚胎，获得2例临床妊娠，临床妊娠率为66．7％（2／3），出生了2个健康婴儿，染色体核型均正常。结论：采用依赖于STR的PCR分析法可以用于染色体罗氏易位的PGD。

关键词：植入前遗传学诊断多重置换扩增短串联重复序列染色体罗氏易位