检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=多能性因子/标志"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

猪胚胎干细胞不同状态表达差异比较及microRNA对诱导多能干细胞建系作用

猪胚胎干细胞不同状态表达差异比较及microRNA对诱导多能干细胞建...

引用

作者：陈俏羽南京医科大学

学位级别：硕士

胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)以及诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)是细胞治疗、药物筛选、胚胎发育机制研究和构建体外疾病模型的重要工具。目前关于干细胞的研究主要集中在小鼠这一动物模型上。由于... 详细信息

胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)以及诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)是细胞治疗、药物筛选、胚胎发育机制研究和构建体外疾病模型的重要工具。目前关于干细胞的研究主要集中在小鼠这一动物模型上。由于小鼠寿命短且其与人类生理功能及结构差异较大,使得小鼠在临床上的应用有限。与小鼠相比,猪是很好的人类疾病模型,特别是在异种移植医学、免疫及代谢疾病研究等相关方面。至今符合小鼠ESCs特点的猪ESCs系尚未成功建立,并且没有统一的猪特异性多能性分子标志用于鉴定不同状态的猪多能性干细胞。本研究将猪类na?ve状态的胚胎干细胞转化为primed状态,通过比较两者之间多能性分子标志的差异,初步确定了用于鉴定na?ve猪胚胎干细胞的特异性多能性分子标志;对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪囊胚内细胞团及猪胎儿成纤维细胞三者之间进行micro RNA(mi RNA)表达谱的分析比较,构建特定mi RNA表达载体,研究其对猪i PSCs建系的影响。以上的研究使我们进一步了解猪多能性相关分子标记,并为mi RNA对猪i PSCs的影响提供了新的见解。目的获得能鉴别猪ESCs的多能性状态的分子标志;研究特定mi RNA对猪i PSCs细胞系建立的影响。方法1.将本实验室在LIF/3i(MEF)条件下建立的猪类na?ve ESCs(以下简称n ESCs)正常传代后,使用LIF/3i培养液培养两天后,更换为FGF/Activin(STO)条件继续培养2-3天;采用机械切割法,对形态扁平、呈片状的猪primed ESCs(reversed primed ESCs,rp ESCs)进行传代;将rp ESCs重新在LIF/3i(MEF)条件下培养,观察是否能重新获得类na?ve的状态;对第5代rp ESCs进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色,传代至第10代时对rp ESCs进行核型鉴定;通过RT-PCR检测不同状态的猪ESCs表达FGF/Activin及LIF/STAT3信号通路相关基因的情况;类胚体形成实验、三胚层相关基因表达检测及免疫荧光染色鉴定rp ESCs的体外分化潜能;荧光实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测细胞谱系及多能性相关因子在转化过程中的表达改变;利用Western blot及免疫荧光染色进一步检测n ESCs和rp ESCs中OCT4,LIN-28,CDX2,SOX17,c-MYC,NANOG,KLF4,Nr0B1,TBX3在蛋白质水平上的表达情况。2.对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM)及猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblast,PEF)三者之间进行mi RNA表达谱的分析比较,筛选出在猪内细胞团细胞中高表达的mi RNA-205。通过PCR扩增mi RNA-205前体序列,并将其克隆于基础表达载体p CAGDNA3-h Fat1,构建过表达载体p CAG-mi R205。用脂质体将该载体转染到经基因修饰的猪胎儿成纤维细胞中(含有鼠源干细胞多能性转录因子Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc)。经干细胞培养液诱导培养建立猪i PSCs,利用实时QPCR检测转染前后细胞内的mi RNA-205的表达情况,比较分析mi RNA-205对猪诱导性多能干细胞的建系效率的影响。结果***可在FGF/Activin(STO)条件下转化为rp ESCs。当rp ESCs重新在LIF/3i(MEF)条件下培养时,可重新获得类na?ve的状态的细胞,我们将其称为转化得到的na?ve ESCs(reversed na?ve ESCs,rn ESCs);rp ESCs的核型正常(38XX),AP染色呈阳性,表明rp ESCs具有自我更新能力;类胚体分化实验显示rp ESCs表达三胚层相关基因,具有体外分化能力;RT-PCR分析信号通路,结果显示primed胚胎干细胞依赖于FGF/Activin信号通路,虽然rp ESCs表达LIF/STAT3信号通路的相关因子,但Western-blot检测STAT3磷酸化结果显示,第6代的rp ESCs几乎不表达磷酸化的SATA3,说明rp ESCs不再依赖于LIF/STAT3信号通路;而n ESCs则明显依赖于LIF/STAT3信号通路。QPCR检测两种状态细胞之间多能性因子的表达差异表明,CDX2,SOX17,EOMES,FGF5,FOXA,PITX2在n ESCs中很少表达甚至不表达,而primed细胞中这些基因呈较高表达水平;LIN28,O

关键词：猪胚胎干细胞多能性因子/标志 microRNA-205 诱导多能干细胞

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：