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中国卫生检验杂志 2019年第7期29卷 810-812页

作者：俞忠娜张勤维严春红刘敏杰宁波大学附属鄞州医院妇产科浙江宁波315040

目的探讨多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(c)-binding protein 2, PCBP2]在卵巢癌组织中的表达情况,以及PCBP2对卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测80例卵巢癌组织中PCBP2蛋白的表达情况。通过RNA干扰技术沉默PCBP2基因... 详细信息

目的探讨多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(c)-binding protein 2, PCBP2]在卵巢癌组织中的表达情况,以及PCBP2对卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测80例卵巢癌组织中PCBP2蛋白的表达情况。通过RNA干扰技术沉默PCBP2基因的表达,采用MTT法检测卵巢癌SKOV3细胞株的增殖能力。结果卵巢癌组织中PCBP2的阳性表达显著高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P2表达后,卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力显著下降,差异有统计学意义(P2在卵巢癌组织中高表达,PCBP2对卵巢癌细胞的增殖具有促进作用。

关键词：多聚胞嘧啶结合蛋白2 卵巢癌增殖

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小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P蛋白表达(P2蛋白(P结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P多(P2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

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PCBP2促进口蹄疫病毒增殖的机制研究

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畜牧兽医学报 2018年第7期49卷 1451-1459页

作者：何艳春杨文萍付绍祖郑海学杨孝朴甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原微生物学口蹄疫流行病学国家重点实验室兰州730046

多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)是一个能特异性结合RNA和DNA Poly(C)片段的蛋白,具有维持mRNA稳定和调节翻译的功能;同时,PCBP2能负调控VISA介导的信号转导通路,抑制Ⅰ型干扰素(IFNs)的产生。前期研究表明,PCBP2能调节口蹄疫病毒(foot-and-... 详细信息

多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)是一个能特异性结合RNA和DNA Poly(C)片段的蛋白,具有维持mRNA稳定和调节翻译的功能;同时,PCBP2能负调控VISA介导的信号转导通路,抑制Ⅰ型干扰素(IFNs)的产生。前期研究表明,PCBP2能调节口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的增殖,但具体机制不清楚。作者对此进行了研究,发现:1)免疫共沉淀和GST pull-down试验证实,PCBP2能与FMDV结构蛋白VP0、VP2、2B、2C和3D相互作用;2)进一步用双荧光素酶报告系统试验证明,PCBP2负调控VISA介导的信号通路,并且2C、3D、VP0和2B促进PCBP2的负调控作用;3)通过Western blot试验表明,FMDV VP0蛋白能促进PCBP2对VISA的特异性降解。总之,PCBP2与FMDV VP0相互作用,促进PCBP2降解天然免疫接头蛋白VISA,抑制IFN-β的产生,从而有利于FMDV在细胞中的繁殖和生长。

关键词：口蹄疫病毒天然免疫多聚胞嘧啶结合蛋白2 VISA VP0

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PCBP2与ISG15相互作用及其影响猪瘟病毒复制的初步探索

PCBP2与ISG15相互作用及其影响猪瘟病毒复制的初步探索

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作者：李玉霄广西大学

学位级别：硕士

猪瘟(Classic Swine Fever,CSF)又称猪霍乱(Hog Cholra,HC)是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起猪和野猪最重要的传染病之一,在我国被列为一类传染病,并且列为国家强制免疫计划。CSFV是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员之一,是一种有囊膜的单股正链RNA病毒。CSFV感染PK-15细胞后激活多个信号传导通路,并诱导相关细胞因子转录表达,但是CSFV感染使IFN-α/β的表达却受到抑制。CSFV感染PK-15细胞后,抑制了IFN-α/β及其下游蛋白的表达,但可上调ISG15的表达,这说明ISG15的表达可能受其他信号通路的刺激及调控。但是关于ISG15如何发挥抗CSFV感染仍不明确。前期对类泛素蛋白ISG15抗CSFV机理的初步探究中,通过免疫共沉淀技术及质谱,得到了100多种与ISG15有潜在相互作用的蛋白。经过软件分析筛选,本研究中选择了多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)作为研究对象。本实验室前期研究表明,CSFV的gRNA通过量依赖的方式激活RIG-1、MAVS、IRF1和ISG15的表达。有文献报道PCBP2蛋白可以通过结合泛素,进而降解MAVS。而ISG15作为一种类泛素蛋白,本实验旨在探索PCBP2蛋白是否是通过类似的功能与ISG15相结合,从而起到抗病毒的作用。本实验成功构建了ISG15和PCBP2真核表达载体,并成功地检测到其真核细胞中表达情况。将两种真核表达的蛋白ISG15和PCBP2进行免疫共沉(CO-IP)和免疫印迹(Immuno-blot),证明ISG15和PCBP2在体内的相互作用。本实验构建了ISG15和PCBP2原核表达载体,成功诱导表达出可溶性的融合蛋白ISG15-GST和PCBP2-GST。将两种原核表达的融合蛋白ISG15-GST和PCBP2-GST进行GST-Pulldown,证明了ISG15和PCBP2的体外互作。同时用荧光共定位验证了ISG15与PCBP2的互作。本实验总体上通过CO-IP、GST-Pulldown和荧光共定位技术三种方法证明ISG15和PCBP2的互作。PCBP2蛋白对猪瘟病毒复制影响的探索中,发现在没有病毒刺激时PCBP2的变化和ISG15有一定的正相关。在PK-15细胞干扰PCBP2后感染猪瘟病毒,和对照组相比,CSFV复制增强。有研究证明PCBP2可调控一些病毒RNA的复制。PCBP2可能是通过与ISG15互作,靶向结合到CSFV基因组RNA上,当PCBP2基因被干扰后,ISG15的转录水平并未受到影响但是却要通过其他的途径来发挥其抗病毒作用。综上所述,本研究证明了ISG15和PCBP2存在直接的相互作用,同时发现PCBP2对CSFV的复制呈负相关,这些数据对进一步研究猪瘟病毒的致病机理和固有免疫机制具有重要的实践意义。

关键词：猪瘟病毒多聚胞嘧啶结合蛋白2 干扰素刺激基因15 免疫共沉淀 GST-Pulldown 蛋白互作

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PCBP2促进口蹄疫病毒复制的机制研究

PCBP2促进口蹄疫病毒复制的机制研究

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作者：何艳春甘肃农业大学

学位级别：硕士

多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)是一种特异性结合RNA和DNA Poly(C)片段的蛋白,具有维持mRNA稳定和调节翻译的功能;同时,PCBP2通过E3泛素连接酶AIP4泛素化降解VISA,负调控VISA介导的信号转导通路,抑制IFNs的产生。有研究表明,PCBP2能促进口... 详细信息

多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)是一种特异性结合RNA和DNA Poly(C)片段的蛋白,具有维持mRNA稳定和调节翻译的功能;同时,PCBP2通过E3泛素连接酶AIP4泛素化降解VISA,负调控VISA介导的信号转导通路,抑制IFNs的产生。有研究表明,PCBP2能促进口蹄疫病毒(FMDV)的复制,但是具体机制尚不清楚,因此探明其机制将对口蹄疫的防控提供重要的科学依据。1.用带有Flag标签的FMDV蛋白VP2、2B、3A、L、VP0、2C、3C、3D质粒分别与HA-PCBP2质粒共转染HEK293T细胞,通过免疫共沉淀和GST pull-down检测能与PCBP2发生互作的FMDV蛋白。结果显示,FMDV结构蛋白VP0、VP2、2B、2C和3D可与PCBP2相互作用。2.用Myc-PCBP2质粒、IFN-β-Luc/ISRE-Luc报告质粒、和PRL-TK内参质粒共同转染HEK293T细胞,双荧光素酶报告系统检测。结果表明,PCBP2抑制SeV诱导的细胞信号通路,并对VISA介导的细胞信号通路有负调控作用,且呈剂量依赖性。用FMDV蛋白L、VP2、2C、3D、VP0、2B质粒分别与Myc-PCBP2、IFN-β-Luc报告质粒、PRL-TK内参质粒及HA-VISA质粒共同转染HEK293T细胞,双荧光素酶报告系统检测。结果显示,FMDV蛋白2C、3D、VP0和2B能够进一步增强PCBP2对VISA介导的信号通路的负调控作用。3.用FMDV蛋白2C、3D、VP0和2B质粒分别与PCBP2质粒共转染细胞,Western blot检测。结果表明,FMDV蛋白VP0和PCBP2共转染能促进VISA的降解。进一步试验证实:PCBP2通过蛋白酶体途径降解VISA,FMDV蛋白VP0通过凋亡途径降解VISA,FMDV蛋白VP0和PCBP2通过凋亡途径共同降解VISA;且FMDV蛋白VP0能促PCBP2-VISA复合物的形成,但对PCBP2-AIP4复合物没有影响。用FMDV感染野生型MEF细胞和VISA敲除的MEF细胞,实时荧光定量PCR检测FMDV的mRNA水平。结果显示,VISA敲除的细胞中FMDV的mRNA水平明显增高。本研究首次证实,PCBP2与FMDV蛋白VP0的相互作用,促进PCBP2特异性降解接头蛋白VISA,抑制IFN-β的产生,使FMDV逃避天然免疫而在细胞内复制。

关键词：口蹄疫病毒天然免疫多聚胞嘧啶结合蛋白2 VISA FMDV蛋白VP0

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