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多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸诱导下人外周血树突细胞的体外培养和快速成熟

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医学研究生学报 2007年第4期20卷 353-356,I0003页

作者：李丽刘宝瑞钱晓萍俞立霞南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心江苏南京210008

目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)... 详细信息

目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),随后分四组继续培养:第一组在24 h加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I∶C)],继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h Poly(I∶C)组;第二组在24 h加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h TNF-α组;第三组在36 h加入Poly(I∶C),继续培养36 h,在72 h时收获DC细胞,即72 h Poly(I∶C)组;第四组在36 h加入TNF-α,继续培养36 h,于72 h收集DC细胞,即72 hTNF-α组。同时设立对照组,仅加GM-CSF和IL-4。结果:经流式细胞仪检测72 h Poly(I∶C)组获得的成熟DC细胞的百分比含量最高;混合淋巴细胞培养(MLC)表明72 h Poly(I∶C)组获得的DC细胞具有较强的刺激淋巴细胞增殖的能力。结论:Poly(I∶C)诱导下人外周血DC的体外培养与成熟的方法是具有快速、稳定、经济、简便的特点,为DC的深入研究和临床应用奠定了基础。

关键词：树突细胞多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸快速成熟

黑素瘤患者树突状细胞体外快速培养成熟和临床应用研究

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临床皮肤科杂志 2007年第7期36卷 413-416页

作者：李丽刘宝瑞钱晓萍南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心江苏南京210008

目的:建立从黑素瘤患者外周血体外快速稳定地诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法:用密度梯度离心法分离患者外周血中分离出的单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单个核细胞后加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)-4,随后... 详细信息

目的:建立从黑素瘤患者外周血体外快速稳定地诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法:用密度梯度离心法分离患者外周血中分离出的单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单个核细胞后加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)-4,随后分4组:第1和第2组分别在24h时加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I:C)]、肿瘤坏死因子(TNF)-α,继续培养24h,在48h时收集DC;第3和第4组分别在36h时加入Poly(I:C)、TNF-α,继续培养36h,在72h时收获DC。显微镜下观察DC形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果:经GM-CSF、IL-4、Poly(I:C)诱导培养72h获得大量成熟DC,形态学观察可见典型特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测表明,第3组DC高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明,第3组获得的DC具有较强的刺激同种淋巴细胞增殖能力。获取的成熟DC注射于患者浅表淋巴结后未出现明显不良反应。结论:Poly(I:C)体外诱导人外周血单个核细胞来源DC成熟的方法具有快速、稳定、经济、安全的特点,培养后DC回输患者体内未出现明显不良反应。

关键词：树突状细胞多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸黑素瘤

恶性浆膜腔积液来源的树突状细胞体外诱导培养

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江苏医药 2013年第24期39卷 2968-2970页

作者：李丽钱晓萍刘宝瑞南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心江苏省210008

目的探讨从恶性浆膜腔积液中体外诱导培养出成熟树突状细胞(DCs)的方法。方法采用密度梯度离心法分离恶性浆膜腔积液来源的单核细胞,待细胞贴壁后加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)100ng/ml和IL-4 100U/ml,分为多聚次黄嘌呤胞嘧... 详细信息

目的探讨从恶性浆膜腔积液中体外诱导培养出成熟树突状细胞(DCs)的方法。方法采用密度梯度离心法分离恶性浆膜腔积液来源的单核细胞,待细胞贴壁后加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)100ng/ml和IL-4 100U/ml,分为多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(PolyI:C)25μg/ml组(A组)和TNF-α20ng/ml组(B组)。显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测DCs表型,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T细胞的增殖活性。结果 A、B两组均获得成熟DCs,高表达CD83、CD80、CD86和CD40,且DCs均能明显刺激T细胞增殖。结论恶性浆膜腔积液来源的单核细胞经细胞因子序贯、联合诱导能够产生成熟DCs。

关键词：树突状细胞恶性浆膜腔积液多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸

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鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞

江苏医药 2008年第1期34卷 53-55,I0005页

作者：李丽刘宝瑞钱晓萍南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心 210008

目的探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上... 详细信息

目的探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(PolyI∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入PolyI∶C和CIA23187。第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力。结论PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC。

关键词：树突状细胞多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸钙离子载体A23187