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永生化神经前体细胞治疗大鼠局灶性脑缺血的实验研究

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中华医学杂志 2008年第13期88卷 867-870页

作者：钱巍姚文龙祝畅柳璐桂伶俐刘志恒张传汉华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室武汉 430030 深圳市第二人民医院麻醉科

目的探讨永生化神经前体细胞（INPC）移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响及移植细胞在模型大鼠脑内的存活以及分化情况。方法雄性sD大鼠24只，均采用线栓法建立大脑中动脉缺血（MCAO）模型，随机分为2组（每组12只）：脑缺血对照组、... 详细信息

目的探讨永生化神经前体细胞（INPC）移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响及移植细胞在模型大鼠脑内的存活以及分化情况。方法雄性sD大鼠24只，均采用线栓法建立大脑中动脉缺血（MCAO）模型，随机分为2组（每组12只）：脑缺血对照组、INPC移植组。缺血后3d通过立体定位注射方法分别将等体积的磷酸盐缓冲液、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记的INPC悬液注射到2组大鼠纹状体缺血半暗带区。缺血再灌注后对大鼠进行神经损害严重程度评分（NSS）。细胞移植后1和4周分别随机处死2组大鼠各6只，取脑组织制作冰冻切片，通过免疫荧光双标技术检测BrdU、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）双阳性细胞和BrdU、神经元特异性烯醇化酶（NSE）双阳性细胞，观察INPC在移植区域的存活及分化情况。结果脑缺血对照组与INPC移植组比较，细胞移植前后各时点的NSS评分差异均无统计学意义（均P〉0．05）。INPC移植组细胞移植后1及4周，均可在移植针道附近及缺血灶周围检测到聚集较明显的BrdU免疫荧光染色阳性的植入细胞，并观察到BrdU染色阳性细胞扩散至全脑，免疫荧光双标技术检测见部分细胞为BrdU、GFAP双阳性的星形胶质细胞或BrdU、NSE双阳性神经元。结论INPC可在局灶性脑缺血大鼠脑内存活并分化为神经元和星形胶质细胞。

关键词：抗原多瘤病毒转化干细胞脑缺血移植大鼠

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肾移植术后多瘤病毒相关肾病的临床病理特点

中华肾脏病杂志 2011年第12期27卷 884-889页

作者：杨诗聪黄刚刘泳冬陈文芳中山大学附属第一医院病理科广州510080 中山大学附属第一医院器官移植科广州510080

目的探讨肾移植术后多瘤病毒感染相关。肾病的病理诊断要点及临床病理特点。方法回顾性分析我院2008至2011年问确诊的13例多瘤病毒相关肾病，其中3例进行了重复肾活检，对患者的临床特点和病理组织学改变进行回顾性分析，并结合多瘤病... 详细信息

目的探讨肾移植术后多瘤病毒感染相关。肾病的病理诊断要点及临床病理特点。方法回顾性分析我院2008至2011年问确诊的13例多瘤病毒相关肾病，其中3例进行了重复肾活检，对患者的临床特点和病理组织学改变进行回顾性分析，并结合多瘤病毒抗原SV40．T免疫组化结果，分析移植后多瘤病毒感染的临床病理特点。结果多瘤病毒肾病多发生在移植后12-18个月，临床均表现为血肌酐升高。病理组织学改变依病程早晚可有3种形式：早期病变仅局限在集合管，间质炎性细胞浸润轻微，可不出现病毒包涵体，仅出现细胞核增大，细胞排列不整齐；中期表现为显著的小管间质炎，受累小管可扩散至肾小管各段甚至壁层上皮细胞，出现上皮细胞脱落、基底膜裸露，并出现典型的核内包涵体及多种细胞核的改变；晚期患者呈显著慢性肾小管间质病变，出现弥漫性小管萎缩和间质大片纤维化。此期虽典型的病毒包涵体少见，但免疫组化仍显示明显的SV40-T阳性。13例患者经免疫抑制剂减量或调整治疗后，2例患者进入肾衰竭，4例患者肌酐持续升高，7例患者血肌酐保持稳定。结论多瘤病毒肾病的病理组织学改变轻重不一，病毒感染后肾小管上皮细胞的形态学改变多样，早期患者免疫抑制剂减量治疗有较好疗效，晚期预后差。对移植后血肌酐升高的患者应及早行肾活检穿刺检查，并常规行多瘤病毒免疫组化染色以防漏诊。

关键词：肾移植多瘤病毒感染活组织检查抗原多瘤病毒转化

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SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达

肿瘤 1999年第5期19卷 272-274页

作者：甄海宁章翔步星耀张志文黄文晋张萍梁景文王西玲中国人民解放军第四军医大学西京医院神经外科西安710032 河南省人民医院神经外科中国人民解放军第四军医大学神经科学研究所西安710032

目的　检测ＳＶ４０早期区域基因编码产物大Ｔ抗原（Ｔａｇ）在人脑肿瘤中的表达，探讨ＳＶ４０与人脑肿瘤发生的病因学关系。方法　采用免疫共沉淀、银染色及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测６５例人脑肿瘤组织、８例正常人... 详细信息

目的　检测ＳＶ４０早期区域基因编码产物大Ｔ抗原（Ｔａｇ）在人脑肿瘤中的表达，探讨ＳＶ４０与人脑肿瘤发生的病因学关系。方法　采用免疫共沉淀、银染色及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测６５例人脑肿瘤组织、８例正常人脑组织及２株人脑胶质瘤细胞系中Ｔａｇ的表达。结果　Ｔａｇ在８例室管膜瘤、２例脉络丛乳头状瘤及２株人脑胶质瘤细胞系中全部表达；垂体腺瘤Ｔａｇ阳性率为９０％（９／１０），星形胶质细胞瘤７３％（１１／１５），脑膜瘤７０％（７／１０），多形性胶质母细胞瘤５０％（４／８），髓母细胞瘤３３％（２／６）；５例少枝胶质细胞瘤、１例松果体瘤及８例正常人脑组织无Ｔａｇ表达。结论　ＳＶ４０感染与人脑肿瘤的发生有一定关系。

关键词： SV40病毒抗原多瘤病毒转化脑肿瘤

四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定

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中华麻醉学杂志 2006年第3期26卷 265-268页

作者：田学愎田玉科徐颖高峰杨辉安珂华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉教研室武汉430030 中山大学附属第一医院麻醉科

目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应... 详细信息

目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。

关键词：四环素基因表达调控抗原多瘤病毒转化星形细胞

可诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株的构建

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第四军医大学学报 2006年第5期27卷 400-403页

作者：徐颖田玉科田学愎梅伟安珂杨辉华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室湖北武汉430030

目的:构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株(IAST).方法:应用分子克隆技术构建含人前脑啡肽原基因(hPPE)的逆转录病毒四环素反应质粒(pRe-vTRE/hPPE);以脂质体转染法将重组质粒pRevTRE/hPPE和调节质粒pRevTet-On分别转染... 详细信息

目的:构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株(IAST).方法:应用分子克隆技术构建含人前脑啡肽原基因(hPPE)的逆转录病毒四环素反应质粒(pRe-vTRE/hPPE);以脂质体转染法将重组质粒pRevTRE/hPPE和调节质粒pRevTet-On分别转染入包装细胞PT67,分别收集病毒上清;将含有RevTet-On病毒上清感染IAST,挑选单克隆并瞬时转染报告质粒pRevTRE-Luc,通过检测萤光素酶活性,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低IAST/Tet-On细胞株;再将RevTRE/hPPE病毒上清感染IAST/Tet-On细胞株,得到稳定表达脑啡肽的IAST/Tet-On/hPPE细胞株,通过RT-PCR、免疫细胞化学及间接免疫荧光染色检测该细胞株中强力霉素定量调控脑啡肽的表达.结果:重组逆转录病毒载体pRe-vTRE/hPPE构建成功;经挑选得到了高表达、低背景IAST/Tet-On细胞株,其诱导倍数为20.6;在IAST/Tet-On/hPPE细胞株中,hPPE基因表达受强力霉素调控,呈剂量依赖关系.结论:成功构建了受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的永生化IAST,为可调控基因治疗慢性疼痛的研究奠定了基础.

关键词：人前脑啡肽基因表达调控多瘤病毒转化星形胶质细胞