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中国农业科学 2016年第20期49卷 3918-3926页

作者：沈林林邹文超高芳銮詹家绥福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产上危害较为严重的病毒,也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一。论文旨在开发一套简便、准确、快速的PVY分子鉴定技术,并采用该技术及时查明福建省部分产区PVY病害的发生、分布及... 详细信息

【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产上危害较为严重的病毒,也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一。论文旨在开发一套简便、准确、快速的PVY分子鉴定技术,并采用该技术及时查明福建省部分产区PVY病害的发生、分布及PVY株系组成。【方法】采用ELISA方法对采自福建省长乐市、福清市马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行检测,并根据文献报道的PVY P1、VPg和CP基因保守区设计3对简并引物,对ELISA检测后的阳性样品进行基因扩增、克隆,并将获得的序列进行核苷酸序列一致性、重组位点、基因型分布和系统发育分析。【结果】ELISA检测结果表明,17份样品中有13个样品与PVY抗体呈阳性反应,其他呈阴性反应。13个阳性样品均能成功扩增出3个与P1、VPg和CP基因预期大小一致的特异片段。BLAST比对分析显示P1、VPg和CP基因与文献报道的已知PVY分离物的核苷酸序列一致性分别为72%—99%、85%—99%和88%—99%。P1、VPg和CP 3个基因联合序列分析显示,FQ01分离物与PVY株系的核苷酸序列一致性最高,FQ08分离物与PVYE株系的核苷酸序列一致性最高,CL01、CL02、CL05和CL13 4个分离物与PVY株系SYR-I型的核苷酸序列一致性最高,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12 7个分离物与PVY株系SYR-II型的核苷酸序列一致性最高。重组分析显示,除CP基因外,长乐市和福清市两个产区的PVY分离物的P1和VPg基因中均检测到显著的重组信号。基因型统计分析结果显示,长乐产区的P1基因为N型(60%)和N×O重组型(40%),VPg基因均为N×O重组型,而CP基因均为O型,而福清产区的P1基因为N型(25%)和N×O重组型(75%),VPg基因为N×O重组型(87.5%)和O型(12.5%),而CP基因除了一个分离物为N型外,其他均为O型。系统发育分析显示分离物FQ01与PVYN-Wi株系聚为一簇,FQ08与PVYE株系聚为一簇,CL01、CL02、CL05和CL13与PVY株系SYR-I型聚为一簇,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12与PVY株系SYR-II型聚为一簇,表明在系统发育关系上,分离物FQ01与PVYN-Wi株系最近,FQ08与PVYE株系最近,CL01、CL02、CL05和CL13与PVY株系SYR-I型最近,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12与PVY株系SYR-II型最近。【结论】PVY在福建省长乐市、福清市马铃薯种植区普遍存在,重组株系已成为田间的主流株系,且PVY已成为优势重组株系。

关键词：马铃薯Y病毒 ELISA 多基因联合序列系统发育重组株系

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吉林省公主岭与敦化大豆根腐病镰孢菌的系统鉴定

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大豆科学 2020年第3期39卷 442-450页

作者：桑永生刘月袁翠平邱红梅刘晓冬王跃强李玉秋董英山吉林农业大学农学院吉林长春130118 吉林省农业科学院吉林长春130033

为明确吉林省公主岭和敦化的大豆根腐病镰孢菌种类,分离93份根腐病标样的病原真菌,利用ITS、TEF1-α、RPB2基因序列比对和多基因位点系统发育分析,结合形态学鉴定方法,鉴定出104株镰孢菌,共分4种,腐皮镰孢菌占64.42%,尖镰孢菌占33.65%,... 详细信息

为明确吉林省公主岭和敦化的大豆根腐病镰孢菌种类,分离93份根腐病标样的病原真菌,利用ITS、TEF1-α、RPB2基因序列比对和多基因位点系统发育分析,结合形态学鉴定方法,鉴定出104株镰孢菌,共分4种,腐皮镰孢菌占64.42%,尖镰孢菌占33.65%,轮枝镰孢菌占0.96%,层出镰孢菌占0.96%。在公主岭罹病植株上分离鉴定出57株镰孢菌,腐皮镰孢菌占91.23%,尖镰孢菌占5.27%,轮枝镰孢菌占1.75%,层出镰孢菌占1.75%;在敦化罹病植株上分离鉴定出47株镰孢菌,腐皮镰孢菌占31.91%,尖镰孢菌占68.09%。结果表明:公主岭优势病原菌为腐皮镰孢菌,而敦化优势病原菌为尖镰孢菌。致病性试验结果表明,仅有3株腐皮镰孢菌对合丰55无致病性,其余101株镰孢菌对合丰55均有不同程度的致病性。

关键词：大豆根腐病镰孢菌多基因联合序列系统发育树

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吉林省公主岭与敦化地区大豆根腐镰孢菌的系统鉴定

吉林省公主岭与敦化地区大豆根腐镰孢菌的系统鉴定

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作者：桑永生吉林农业大学

学位级别：硕士

大豆根腐病是世界大豆生产中危害严重的土传性真菌病害,极大程度地导致大豆的产量和品质下降。镰孢属,是造成大豆根腐病的重要致病菌之一,但在世界各地造成大豆根腐镰孢菌种类不尽相同。为明确吉林省敦化和公主岭大豆根腐镰孢菌种类,本... 详细信息

大豆根腐病是世界大豆生产中危害严重的土传性真菌病害,极大程度地导致大豆的产量和品质下降。镰孢属,是造成大豆根腐病的重要致病菌之一,但在世界各地造成大豆根腐镰孢菌种类不尽相同。为明确吉林省敦化和公主岭大豆根腐镰孢菌种类,本研究对发病植株进行病原真菌的分离与鉴定,以期为吉林省的大豆根腐病的防治提供科学依据。从吉林省敦化和公主岭大豆试验田采集了93份具有典型大豆根腐病植株进行病原真菌的分离纯化,并利用ITS、TEF1-α、RPB2这3个保守基因进行核酸序列一致性分析,并结合形态学观察去鉴定疑似镰孢菌分离物的种属地位。基于ITS、TEF1-α、RPB2这3个保守基因对镰孢菌分离物进行单基因系统发育分析和多基因联合系统发育分析进一步明确镰孢菌分离物之间的亲缘关系,并利用离体叶片接种法和下胚轴直接接种法去评价镰孢菌分离物的致病性。其研究结果如下:1.本研究通过对吉林省敦化和公主岭地区的发病植株进行病原真菌的分离,得到了122株真菌,并鉴定出4种镰孢菌共104株,其中腐皮镰孢菌(***)占64.42%,尖镰孢菌(***)占33.65%,轮枝镰孢菌(***)占0.96%,层出镰孢菌(***)占0.96%。在公主岭地区的发病植株分离鉴定出4种镰孢菌共57株,其中腐皮镰孢菌(***)占91.23%,尖镰孢菌(***)占5.27%,轮枝镰孢菌(***)占1.75%,层出镰孢菌(***)占1.75%。在敦化地区的发病植株分离鉴定出2种镰孢菌共47株,其中腐皮镰孢菌(*** ani)占31.91%,尖孢镰刀菌(***)占68.09%。吉林省这2个地区大豆根腐病镰孢菌优势病原菌不尽相同,在公主岭地区以腐皮镰孢菌(***)为主,而敦化地区主要以尖镰孢菌(***)为主。2.系统发育分析结果表明,只通过单个基因进行核酸序列分析或单基因系统发育分析均难以使镰孢菌属的分类鉴定结果极其精确,但是通过ITS、TEF-1α、RPB2这3个基因联合系统发育分析可以使镰孢菌属的分类鉴定结果更加快速、准确。3.镰孢菌分离物的致病性分析结果表明,在公主岭地区的57株镰孢菌分离物中以尖镰孢菌(***)的致病性较强,轮枝镰孢菌(***)和层出镰孢菌(***)的致病性次之,腐皮镰孢菌(***)的致病性较弱;在敦化地区的47株镰孢菌分离物中以尖镰孢菌(***)的致病性较强,腐皮镰孢菌(***)的致病性较弱。

关键词：大豆根腐病镰孢菌多基因联合序列系统发育树

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