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中国组织工程研究与临床康复 2010年第14期14卷 2601-2606页

作者：杨浩吴迪李世和朱晓松昆明医学院第一附属医院骨科云南省昆明市650032

背景:脂肪基质干细胞在人体皮下脂肪中储备充足,体外能快速增殖,具有多向分化潜能,是目前组织工程种子细胞的研究热点。目的:体外分离培养家兔脂肪血管基质部分细胞,并验证其具有多分化潜能。方法:体外分离家兔脂肪血管基质部分细胞,在... 详细信息

背景:脂肪基质干细胞在人体皮下脂肪中储备充足,体外能快速增殖,具有多向分化潜能,是目前组织工程种子细胞的研究热点。目的:体外分离培养家兔脂肪血管基质部分细胞,并验证其具有多分化潜能。方法:体外分离家兔脂肪血管基质部分细胞,在标准条件下培养,流式细胞仪检测第3代血管基质部分细胞表面标记物CD44,CD29,CD45,取第3代血管基质部分细胞进行成脂、成骨、成软骨诱导,油红O染色鉴定成脂诱导,碱性磷酸酶染色、茜素红染色、Vonkossa染色鉴定成骨诱导,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Ⅱ型胶原mRNART-PCR检测鉴定成软骨诱导。结果与结论:原代血管基质部分细胞为短梭形和多角形,第3代血管基质部分细胞为长梭形,流式细胞仪检测提示CD44+,CD29+,CD45-,成脂诱导组,染色油红O阳性,成骨诱导组,碱性磷酸酶染色、Vonkossa染色、茜素红染色阳性,成软骨诱导组,诱导14dⅡ型胶原免疫组织化学染色阿利新蓝染色阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA显示产物条带较未诱导前信号明显增强。提示体外分离培养的家兔血管基质部分细胞具有干细胞表型,具有向成骨、软骨、脂肪细胞分化的能力,初步鉴定为脂肪基质干细胞。

关键词：脂肪基质干细胞体外分离培养表面标记物多向分化诱导家兔

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新生大鼠心脏telocytes的形态特性及其多向分化潜能

新生大鼠心脏telocytes的形态特性及其多向分化潜能

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作者：甘黎新乡医学院

学位级别：硕士

背景Telocytes(TCs)是一种新型的间质细胞,存在于人和啮齿类动物的多个器官。目前关于TCs的研究大多局限于形态学和成脂、成骨研究较多,但是否具备神经细胞分化潜能和心起搏细胞的特性却知之甚少。我们旨在研究TCs是否具有多向分化的潜... 详细信息

背景Telocytes(TCs)是一种新型的间质细胞,存在于人和啮齿类动物的多个器官。目前关于TCs的研究大多局限于形态学和成脂、成骨研究较多,但是否具备神经细胞分化潜能和心起搏细胞的特性却知之甚少。我们旨在研究TCs是否具有多向分化的潜能,及其类似神经细胞的形态和其功能之间的联系。这对进一步研究TCs的特性及其生物功能具有重要的意义。目的研究新生大鼠心TCs的形态学特征,验证其是否具有神经细胞、神经胶质细胞的特性并探讨其是否具多向分化潜能,为开发利用TCs进一步提供细胞学证据。方法1采用酶消化法分离、培养新生大鼠原代心脏TCs细胞,并通过差速贴壁法对其进行纯化。在倒置显微镜以及活细胞工作站下观测细胞的生长状态,记录培养过程中TCs的形态变化。2通过HE染色、免疫组织化学技术、免疫荧光染色技术,观察TCs vimintin和CD34的表达,对体外培养的TCs进行鉴定。3在扫描电镜下观察体外培养的TCs的形态,在透射电镜下观察新生大鼠心脏组织TCs的形态及其与周围邻近细胞的关系。4利用成骨诱导液、成脂诱导液和5a Za分别对心脏TCs进行成骨、成脂和成心肌诱导。并用茜素红染色、油红O染色、以及免疫荧光技术对诱导后的心脏TCs进行鉴定。5利用成神经诱导液对心脏TCs进行成神经诱导,免疫荧光技术检测未诱导和诱导后的TCs对神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表达。6免疫荧光技术检测TCs对心脏起搏细胞特异性标记蛋白HCN4的表达。结果1新生大鼠心脏TCs状态好、纯度高。2免疫组织化学检测显示TCs细胞质内阳性表达vimentin,且vimentin&CD34共表达。3扫描电镜显示TCs由胞体和突起组成。胞体呈椭圆,较小。突起1-5个不等。突起长短不一,突起上有间断性膨大,呈念珠状。根据伸出的突起数量不同,细胞体呈现为梭形、纺锤形和星形等。4透射电镜下显示新生大鼠的心肌组织中存在较多的TCs。TCs的胞体直径约为9-15μm。细胞核,呈椭圆形,胞核/胞质的比例相对较大。胞质内细胞器丰富,存在微管、中间丝、微丝、细肌丝等细胞骨架结构。细胞膜上有小凹。自胞体伸出数个粗细不等的突起,可长达1000μm。在突起的膨大处内含线粒体、内质网等细胞器。TCs与心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、周细胞等均用紧密的接触。5 TCs成骨诱导21天后茜素红染色阳性,成脂诱导第14天细胞油红O染色阳性,成心肌诱导4周后CTn T免疫荧光染色阳性。6原代培养的TCs免疫荧光检测NSE、GFAP、OX42、CNpase表达阴性,成神经诱导液诱导7天后的TCs不表达GFAP。7 HCN4表达阴性。结论大鼠心TCs具有成骨、成脂、成心肌的潜能。但未发现具有向神经细胞分化的潜能。也不具备心起搏细胞的特性。

关键词： Telocytes 神经细胞起搏细胞原代培养多向分化诱导

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