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脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究

中国老年学杂志 2007年第5期27卷 423-426页

作者：王文加焦平许天敏范伟全张诺王丁丁徐煌包晓群颜炜群吉林大学再生医学研究所吉林长春130021 吉林大学第二医院妇产科

目的建立人脂肪来源的基质细胞（ADSCs）的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果... 详细信息

目的建立人脂肪来源的基质细胞（ADSCs）的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×10^7-4×10^7个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。

关键词：脂肪来源基质细胞多分化潜能脂肪细胞神经元样细胞

人牙龈成纤维细胞的多分化潜能及骨形成蛋白-2和地塞米松影响其成骨能力的研究

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人牙龈成纤维细胞的多分化潜能及骨形成蛋白-2和地塞米松影响其成...

作者：陶玉飞天津医科大学

学位级别：硕士

目的:研究人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,h GFs)是否具有成骨、成软骨和成脂的多向分化潜能,同时检测骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养的h GFs的细胞增殖活性以及成骨诱导分化的影响。方法:选择就诊于天津医科大学口腔颌面外科的志愿者(18-25岁),经志愿者知情同意后,拔除阻生齿(无龋病、无牙周病),收集术中分离的新鲜健康牙龈组织。采用组织块法提取h GFs,取第3代细胞用于实验。实验分为两部分。第一部分,培养至第3代的人牙龈成纤维细胞,进行多分化包括成骨、成软骨和成脂肪诱导分化研究,分别以DMEM(低糖)与3%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)进行培养作为对照组,分别进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红染色、阿利新蓝染色和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化情况。成骨诱导培养基成分包括DMEM培养基(低糖)、3%FBS、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠、5 mg/L抗坏血酸、2×10-3mol/L L-谷氨酰胺以及10-7mol/L DEX;成软骨诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、50 mg/L抗坏血酸、6.25mg/L胰岛素及10μg/L转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1);成脂诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、10-6mol/L DEX、10-5mol/L胰岛素、0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌(3-Isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)及2×10-4mol/L吲哚美辛。第二部分,分5组培养:A组为DMEM培养组,仅使用DMEM培养基(低糖)与3%FBS进行培养;B组为基础骨诱导培养组;C组为基础骨诱导+10-7mol/L DEX培养组;D组为基础骨诱导+50μg/L BMP-2培养组;E组为基础骨诱导培养基+10-7mol/L DEX+50μg/L BMP-2培养组。MTT法检测细胞增殖活性,ALP染色、茜素红染色、逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞成骨分化情况。结果:(1)培养至7d的ALP染色结果显示成骨诱导组可见大量细胞内染色的蓝紫色沉淀,对照组无沉淀产生;培养至28d,可见成骨诱导组细胞周围有大量红染的钙结节沉积,对照组无红染的钙结节。培养至14d,成软骨诱导组阿利新蓝染色见细胞染色的蓝色沉淀,成脂诱导组细胞内可见油红O染色呈红色的脂肪滴,对照组的h GFs阿利新蓝和油红O染色均成阴性。(2)MTT结果显示:h GFs在所有培养条件下均能够稳定生长,各组细胞在相同时间的增殖活性无明显差异(P>0.05)。(3)培养至7d的细胞,碱性磷酸酶染色结果显示:A组无明显蓝紫色沉淀,B组和D组可见少量细胞染色的蓝紫色沉淀,C组和E组可见大量蓝紫色沉淀,E组染色较C组稍深。(4)培养至28d的细胞,茜素红染色结果显示:A组无钙结节形成,其它组均有大量钙结节形成,E组的钙结节量最多,其次为C组,再次是D组、B组。(5)RT-PCR结果显示:同一时间,E组的ALP、胶原蛋白I(collagen 1,Col1)、runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)表达量均为最高(P分化的多向分化潜能。(2)BMP-2和DEX对h GFs的细胞增殖无明显影响。(3)单独及联合应用DEX、BMP-2能够促进h GFs的碱性磷酸酶活性和钙结节的形成,两者联合的作用更强,提示两者联合能更有效地促进h GFs成骨分化。

关键词：人牙龈成纤维细胞多分化潜能骨形态发生蛋白-2 地塞米松成骨分化

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干细胞移植在肝癌治疗中的禁忌与应用

中华肝脏病杂志 2020年第6期28卷 479-480页

作者：胡宴瑜张培霖海军军医大学第三附属医院国家肝癌科学中心上海201805

肝癌是中国病死率第二高的癌症,其隐匿性强,至今缺乏有效治疗手段。近年来广泛开展的干细胞项目,尤其是间充质干细胞(MSCs)移植,虽已被应用于多种疾病的治疗,然而恶性肿瘤是这一移植疗法的禁区已是业内共识。这与干细胞自身的两大特点"... 详细信息

肝癌是中国病死率第二高的癌症,其隐匿性强,至今缺乏有效治疗手段。近年来广泛开展的干细胞项目,尤其是间充质干细胞(MSCs)移植,虽已被应用于多种疾病的治疗,然而恶性肿瘤是这一移植疗法的禁区已是业内共识。这与干细胞自身的两大特点"自我更新"和"多分化潜能"密切相关。下面就干细胞特别是MSCs成为肿瘤治疗禁忌的原因,以及潜在的应用方式做一概述,以期为这一疗法的进一步研究提供一些参考。

关键词：肝细胞癌干细胞移植治疗自我更新多分化潜能

人胎盘来源间充质干细胞和大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特征比较

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 467-471,F0002页

作者：费倩怡刘春丽朱振威刘志辉刘书会王占义金巨楼王敬龙吉林大学口腔医院口腔颌面外科吉林长春130021 吉林大学口腔医院口腔修复科吉林长春130021 吉林省长春市口腔医院颌面外科吉林长春130011 吉林大学口腔医学院

目的:从人足月的胎盘羊膜中和Wistar大鼠股骨及胫骨骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs),研究人胎盘来源MSCs(HPMSCs)和大鼠骨髓来源MSCs(BMSCs)的分离培养方法和生物学特征、表面标志及其多分化潜能。方法:将人足月胎盘组织通过胶原酶... 详细信息

目的:从人足月的胎盘羊膜中和Wistar大鼠股骨及胫骨骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs),研究人胎盘来源MSCs(HPMSCs)和大鼠骨髓来源MSCs(BMSCs)的分离培养方法和生物学特征、表面标志及其多分化潜能。方法:将人足月胎盘组织通过胶原酶Ⅱ消化培养获取HPMSCs,采用全骨髓贴壁法从4周龄Wistar大鼠双侧股骨及胫骨中分离、纯化大鼠BMSCs,运用活细胞计数法检测其增殖能力,采用流式细胞术检测2种细胞表面标志物的表达阳性率;用地塞米松、维生素C和β磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,用茜素红染色鉴定;用胰岛素、地塞米松、IBMX和吲哚美辛诱导其向脂肪细胞分化,以油红O染色鉴定。结果:HPMSCs为梭形贴壁细胞,增殖能力较强,CD44和CD34表达阳性率分别为94.45%和1.67%;BMSCs为圆形、梭形和多角形,增殖能力强,CD44和CD34表达阳性率分别为93.11%和2.68%。2种细胞经过成脂诱导液和成骨诱导液诱导后,茜素红和油红O染色结果均为阳性,表明2种细胞均可向脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:HPMSCs与大鼠BMSCs的生物学特征相似,同样具有多分化潜能,HPMSCs具有更强的增殖能力。

关键词：人胎盘来源间充质干细胞骨髓间充质干细胞表面标志多分化潜能

人类牙髓干细胞体外诱导多向分化潜能研究进展

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国际老年医学杂志 2019年第6期40卷 365-371页

作者：孟文霞 Tham Seng Kong 杨永鹏左夏林张进芳丁宇王媛媛董萍丁克祥南方医科大学广州510515 马来西亚阿尔卑斯医学中心马来西亚吉隆坡58200 大连市比华利医疗美容医院大连116000 塔斯马尼亚大学孟席斯医学研究所澳大利亚霍巴特7000

人体牙髓干细胞主要包括成人恒牙牙髓干细胞(hDPSCs)和儿童乳牙牙髓干细胞,它们均是源自人体牙髓组织的一类归属间充质干细胞特性的、具有高度增殖能力与多向分化潜能的成体干细胞.因其来源丰富、获取方便,作为未来组织工程领域的候选... 详细信息

人体牙髓干细胞主要包括成人恒牙牙髓干细胞(hDPSCs)和儿童乳牙牙髓干细胞,它们均是源自人体牙髓组织的一类归属间充质干细胞特性的、具有高度增殖能力与多向分化潜能的成体干细胞.因其来源丰富、获取方便,作为未来组织工程领域的候选种子细胞备受重视和关注.继研究发现牙髓干细胞有形成牙本质样结构的特性后,越来越多的体内外实验证实,在体外特定诱导培养条件下牙髓干细胞还可向骨、软骨、脂肪、神经、血管、肌肉、黏膜上皮等方向分化,且具备其相应的组织生物学特征,并已逐渐被证实牙髓干细胞在抗衰老医学、组织工程及再生医学领域有着广阔应用前景.本文将围绕近年来学者对人体牙髓干细胞的多向分化潜能及其研究机制、应用进展进行综述.

关键词：人类牙髓干细胞间充质干细胞体外诱导多分化潜能

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鸭脂肪间充质干细胞分离培养与生物学特性

生物技术通报 2016年第8期32卷 122-128页

作者：刘雪婷元虹懿张明海关伟军东北林业大学哈尔滨150040 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

建立禽类脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外培养体系,探索其生物学特性和多分化潜能。通过酶消化法分离18日龄鸭胚ADSCs,绘制生长曲线,通过RT-PCR、免疫荧光和流式细胞术阳性率检测对ADSCs进行鉴定,诱导AD... 详细信息

建立禽类脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外培养体系,探索其生物学特性和多分化潜能。通过酶消化法分离18日龄鸭胚ADSCs,绘制生长曲线,通过RT-PCR、免疫荧光和流式细胞术阳性率检测对ADSCs进行鉴定,诱导ADSCs向成骨细胞和脂肪细胞分化。结果表明,鸭胚胎ADSCs体外增殖能力良好;阳性表达CD29,CD44,CD105,表达率分别为95.39%、94.53%和98.19%;经体外诱导后可分化为成骨细胞和脂肪细胞。研究认为在适宜的培养条件下,体外培养的ADSCs能够稳定增殖并具有多分化潜能,可作为组织工程的种子细胞进行保存。

关键词：脂肪间充质干细胞分离培养体外诱导分化多分化潜能生物学特性

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小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展

动物学杂志 2006年第1期41卷 128-133页

作者：余树民徐小明华进联窦忠英西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心

目前,对小鼠胚胎干细胞的研究较为深入,并已成为研究细胞分化及信号转导、新基因发现及功能鉴定、器官发生、人类疾病和药物开发等的有效手段。胚胎干细胞建系是一项基础性工作。虽然技术日趋成熟,有些品系小鼠的胚胎干细胞建系已是常... 详细信息

目前,对小鼠胚胎干细胞的研究较为深入,并已成为研究细胞分化及信号转导、新基因发现及功能鉴定、器官发生、人类疾病和药物开发等的有效手段。胚胎干细胞建系是一项基础性工作。虽然技术日趋成熟,有些品系小鼠的胚胎干细胞建系已是常规技术,但不同品系小鼠胚胎干细胞的建系效率仍有很大差异,建系途径和方法各有特点,一个品系胚胎干细胞的建系方法不一定都适用于其他品系。本文从小鼠胚胎干细胞建系的途径、分离操作技术、培养体系等方面进行综述,并就与之相关的有些问题提出思考和对策。

关键词：小鼠胚胎干细胞系胚胎干细胞内细胞团多分化潜能

人脂肪源性干细胞成骨诱导过程中Ⅰ型胶原的表达

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吉林大学学报（医学版） 2010年第2期36卷 327-330,I0004,I0005,F0003页

作者：王敏孙新华申玉芹王景云冯志远吉林大学口腔医院修复科吉林长春130021 吉林大学口腔医院正畸科吉林长春130021 吉林大学口腔医院牙周病科吉林长春130021

目的:研究人脂肪源性干细胞(hADSCs)成骨诱导后其合成和分泌Ⅰ型胶原能力的变化,探讨hADSCs作为组织工程骨的种子细胞的效能。方法:从人脂肪抽吸物中分离基质细胞,体外培养、扩增及鉴定。采用成脂诱导剂诱导hADSCs向脂肪细胞分化,采用油... 详细信息

目的:研究人脂肪源性干细胞(hADSCs)成骨诱导后其合成和分泌Ⅰ型胶原能力的变化,探讨hADSCs作为组织工程骨的种子细胞的效能。方法:从人脂肪抽吸物中分离基质细胞,体外培养、扩增及鉴定。采用成脂诱导剂诱导hADSCs向脂肪细胞分化,采用油红O染色鉴定。采用成骨诱导剂诱导hADSCs向成骨细胞分化,将成骨诱导组分为0、7、14、21和28d组,分别于0、7、14、21及28d行茜素红染色检测矿化结节、VanGieson胶原纤维特殊染色染胶原纤维、Ⅰ型胶原细胞免疫荧光染色检测细胞Ⅰ型胶原的表达。用FVViewer1.7软件对Ⅰ型胶原表达的强度进行定量检测。结果:hADSCs成脂诱导14d后油红O染色阳性;hADSCs成骨诱导21d茜素红染色阳性;成骨诱导21dVanGieson胶原纤维特殊染色阳性;hADSCs成骨诱导后Ⅰ型胶原染色21d所有的细胞均阳性表达,28d呈强阳性表达。统计结果显示:Ⅰ型胶原的表达从7d开始,到28d逐渐升高,7、14、21和28d组与0d组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:hADSCs成骨诱导后全部细胞呈现成骨表型,成骨能力强,可以作为骨种子细胞应用于临床骨再生治疗。

关键词：脂肪源性干细胞成骨诱导多分化潜能 Ⅰ型胶原

人脂肪干细胞体外培养及细胞载体复合物诱导培养

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中国老年学杂志 2014年第18期34卷 5187-5190页

作者：杨震李波周焯家简月奎赵伟峰田晓滨贵州省人民医院骨科贵州贵阳550002

目的探讨人脂肪干细胞体外培养方法以及对细胞载体复合物诱导成软骨分化的潜能。方法从人脂肪组织分离人脂肪间充质干细胞(hADSCs),噻唑盐(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞术hADSCs细胞表面分子标志,hADSCs成脂、成骨和成软骨的诱导及... 详细信息

目的探讨人脂肪干细胞体外培养方法以及对细胞载体复合物诱导成软骨分化的潜能。方法从人脂肪组织分离人脂肪间充质干细胞(hADSCs),噻唑盐(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞术hADSCs细胞表面分子标志,hADSCs成脂、成骨和成软骨的诱导及鉴定检测。hADSCs与不同浓度胶原纤维蛋白溶液混合制成细胞载体复合物凝胶,14 d后进行细胞鉴定。结果体外分离、培养出高活性hADSCs,增值曲线呈S形。细胞CD29、CD90、CD105呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达。hADSCs成脂诱导后细胞呈类圆形,在细胞浆内有透亮的脂滴出现,油红O染色脂滴呈鲜红色。成骨诱导后细胞呈为不规则形,免疫荧光检测细胞表达骨唾液酸蛋白、骨桥蛋白、骨连接蛋白。hADSCs成软骨诱导后细胞形态变为铺路石样,甲苯胺蓝染色细胞基质呈蓝色,免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白染色呈阳性。阿利新蓝染色细胞载体复合物成蓝色,免疫组化检测Ⅱ型胶原蛋白结果显示,混合胶原蛋白组较单一胶原蛋白组更强阳性表达。结论本研究成功分离培养出高度同源性hADSCs,具有多分化潜能。复合胶原纤维蛋白载体诱导hADSCs成软骨细胞分化,可能作为修复关节软骨缺损的理想载体支架材料。

关键词：人脂肪间充质干细胞细胞培养多分化潜能胶原纤维蛋白细胞载体