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B群脑膜炎球菌外膜囊泡疫苗研究进展

中华预防医学杂志 2022年第9期56卷 1333-1340页

作者：岳萌萌徐娟徐丽邵祝军中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 南京医科大学公共卫生学院南京211166

B群脑膜炎球菌疫苗的研发包括外膜囊泡(OMV)疫苗和重组蛋白疫苗两条技术路线, 本文拟就B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发、生产和应用进展进行综述, 以期为我国B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发提供参考。

关键词：脑膜炎球菌疫苗 B群外膜囊泡

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外膜囊泡医学应用研究进展

免疫学杂志 2021年第2期37卷 179-184页

作者：李笋戚远通苟强张卫军左钱飞邹全明解放军第九六八医院卫勤处锦州121000 陆军军医大学药学与检验医学系药剂学教研室重庆400038 陆军军医大学微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

外膜囊泡(OMV)是细菌自然生长的产物,呈球形双层膜纳米结构,其表面包含众多PAMPs,与免疫应答相关。OMV具有免疫原性和固有佐剂活性,因此可作为疫苗或单独的疫苗佐剂使用。OMV的中空结构可以作为药物储存载体,同时利用其外部结构实现药... 详细信息

外膜囊泡(OMV)是细菌自然生长的产物,呈球形双层膜纳米结构,其表面包含众多PAMPs,与免疫应答相关。OMV具有免疫原性和固有佐剂活性,因此可作为疫苗或单独的疫苗佐剂使用。OMV的中空结构可以作为药物储存载体,同时利用其外部结构实现药物的靶向作用。OMV在医学领域研究甚广,但要充分发挥其功能须清楚了解其研究进展和作用机制。本文通过对OMV在医学方面的应用进行简要综述,以便研究者快速获得此领域进展信息。

关键词：外膜囊泡疫苗佐剂载体肿瘤应用

外膜囊泡转移blaNDM-1介导CR-hvKP的形成

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外膜囊泡转移blaNDM-1介导CR-hvKP的形成

作者：唐滨中南大学

学位级别：硕士

目的世界各地都有关于高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)和碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)传播的报道,给抗感染治疗和公共健康构成严重威胁。外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是毒力和抗性基因水平转移的载体。然而,目前尚未有研究表明肺炎克雷伯菌OMVs转移碳青霉烯耐药基因至hvKP。本研究想要探究美罗培南对CRKP-OMVs的形态和成分的影响以及CRKP产生的OMVs介导耐药基因转移的能力。方法(1)CRKP在有或无亚抑菌浓度美罗培南抗生素的LB肉汤中培养,使用超速离心法分离CRKP产生的OMVs,透射电子显微镜和动态光散射分析OMVs的形态和粒径,BCA蛋白定量法对OMVs产量进行定量,Nanodrop测定OMVs内的DNA浓度,SDS-PAGE分析OMVs的蛋白组分。(2)通过PCR检测OMVs内存在的耐药基因;将OMVs与受体菌经典肺炎克雷伯菌(classical Klebsiella pneumoniae,cKP)ATCC10031、产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)-cKP ATCC 700603以及hvKP NTUH-K2044孵育进行水平基因转移实验,对获得的转化子通过PCR、REP-PCR和抗菌药物敏感性试验确认耐药基因的转移,对NTUH-K2044转化体通过生物膜形成实验、血清抗性实验、大蜡螟幼虫感染模型进行毒力的评估,并且连续传代5次通过拉丝实验和PCR检测用以确定高黏液表型和耐药基因是否稳定存在;通过蛋白质免疫印迹和酶活性测定实验检测OMVs内NDM-1金属酶的存在和活性。结果(1)分离了CRKP在有或无8μg/m L美罗培南LB培养基中产生的外膜囊泡OMVs-_(MEM(+))和OMVs-_(MEM(-))。囊泡均为大小不等的球形纳米结构,美罗培南压力下产生的OMVs-_(MEM(+))平均粒径161.77 nm大于在无美罗培南压力下产生的OMVs-_(MEM(-))平均粒径147.30 nm。OMVs-_(MEM(+))的蛋白质含量、DNA含量均高于OMVs-_(MEM(-)),美罗培南压力下CRKP产生的OMVs有独特的蛋白条带。(2)NDM-1阳性CRKP分泌的OMVs内含有包括bla在内的多个耐药基因,并且能介导bla转移至cKP和hvKP,提高了转化菌的β-内酰胺类抗生素的MIC;获得了bla基因的NTUH-K2044转化体的毒力水平没有降低,且在传代五次后bla仍稳定存在并保持高黏液表型;NDM-1阳性CRKP分泌的OMVs携带NDM-1金属酶且具有美罗培南水解活性。结论(1)在美罗培南压力下产生的OMVs的产量更高、粒径更大、DNA含量更多。(2)NDM-1阳性CRKP产生的OMVs含有bla并能将其转移至cKP和hvKP,形成CRKP和CR-hvKP。获得了bla基因所形成的CR-hvKP的毒力水平没有降低,且在传代五次后bla仍稳定存在并保持高黏液表型。(3)NDM-1阳性CRKP产生的OMVs中包含有NDM-1金属酶,携带NDM-1金属酶的OMVs能够水解美罗培南介导细菌的耐药。图14幅,表4个,参考文献58篇

关键词：外膜囊泡碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌水平基因转移金属β-内酰胺酶碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌

牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡携带脂多糖激活Toll样受体2促进破骨细胞分化的研究

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中华口腔医学杂志 2024年第3期59卷 237-246页

作者：邹捷康曹宇蒙田义李璇吴瑞鑫田蓓敏孙海花陈发明贺小涛第四军医大学口腔医院牙周病科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032 西北大学生命科学学院西安710069 第四军医大学口腔医院急诊与综合临床科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032

目的探索牙龈卟啉单胞菌(Pg)来源的外膜囊泡(OMV)对巨噬细胞破骨分化的影响及其作用机制。方法使用透射电镜和纳米颗粒追踪分析仪对Pg OMV进行鉴定和表征;使用1、3和10 mg/L的Pg OMV处理破骨前体细胞,分别为1、3和10 mg/L OMV处理组,磷... 详细信息

目的探索牙龈卟啉单胞菌(Pg)来源的外膜囊泡(OMV)对巨噬细胞破骨分化的影响及其作用机制。方法使用透射电镜和纳米颗粒追踪分析仪对Pg OMV进行鉴定和表征;使用1、3和10 mg/L的Pg OMV处理破骨前体细胞,分别为1、3和10 mg/L OMV处理组,磷酸盐缓冲液处理破骨前体细胞为对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、F-肌动蛋白(F-actin)染色和实时荧光定量PCR技术检测破骨细胞形成和破骨相关基因FBJ骨肉瘤癌基因(Fos)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;利用多黏菌素B(PMB)封闭脂多糖(LPS)后的Pg OMV处理破骨前体细胞(PMB-OMV处理组),OMV单独处理为对照,通过TRAP和F-actin染色观察破骨细胞及肌动蛋白环的形成情况;使用蛋白质印迹法检测Pg OMV对破骨前体细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达水平的影响;利用10、50、100和200μmol/L TLR2抑制剂C29预处理破骨前体细胞后,使用Pg OMV处理破骨前体细胞,分别为OMV+10μmol/L、OMV+50μmol/L、OMV+100μmol/L和OMV+200μmol/L C29处理组,未使用C29预处理的OMV处理组为对照,通过TRAP和F-actin染色观察破骨细胞和肌动蛋白环形成情况;使用OMV和PMB孵育的OMV处理破骨前体细胞,分别为OMV处理组和PMB-OMV处理组,通过蛋白质印迹法检测破骨前体细胞TLR2蛋白表达水平。结果Pg OMV的平均粒径为179.2 nm,具有典型的囊泡结构;3和10 mg/L OMV处理组中可见大量肌动蛋白环形成,TRAP阳性破骨细胞面积占比[分别为(22.6±2.1)%、(32.0±2.3)%]均显著高于对照组[(4.9±0.5)%](P<0.001),3和10 mg/L OMV处理组Fos mRNA表达量(1.491±0.114、1.726±0.254)均显著高于对照组(1.000±0.029)(P=0.013,P=0.001),10 mg/L OMV处理组MMP9 mRNA表达量(2.232±0.097)显著高于对照组(1.007±0.148)(P<0.001);PMB-OMV处理组中肌动蛋白环形成少于OMV处理组,PMB-OMV处理组TRAP阳性破骨细胞面积占比[(14.8±3.8)%]显著低于OMV处理组[(31.5±6.7)%](P=0.004);OMV处理组TLR2表达水平(1.359±0.134)显著高于对照组(1.000±0.000)(t=4.62,P=0.044);50、100和200μmol/L C29预处理破骨前体细胞后,TRAP阳性破骨细胞面积占比[分别为(24.1±1.7)%、(18.5±2.1)%、(9.1±1.3)%]均显著小于对照组[(29.4±1.7)%](P=0.026,P<0.001,P<0.001);PMB处理后,PMB-OMV处理组TLR2蛋白表达水平(0.780±0.046)显著低于OMV处理组(1.000±0.000)(t=8.32,P=0.001)。结论Pg OMV可通过携带LPS显著促进破骨细胞分化,破骨前体细胞表面的TLR2在Pg OMV介导的破骨细胞分化中发挥重要作用。

关键词：牙周炎紫单胞菌,龈外膜囊泡破骨细胞 Toll样受体2

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肺炎克雷伯菌外膜囊泡研究进展

微生物学通报 2024年

作者：吴小碟沈秀芬马润王卓王玉明胡莹昆明医科大学第二附属医院检验科

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae， KP)是临床上常见的条件致病菌，其发病机制涉及复杂的病原体-宿主相互作用网络。尽管我们对这种细菌的分子和细胞机制有了深入的了解，但关于肺炎克雷伯菌外膜囊泡(outer membrane vesicles， OM... 详细信息

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae， KP)是临床上常见的条件致病菌，其发病机制涉及复杂的病原体-宿主相互作用网络。尽管我们对这种细菌的分子和细胞机制有了深入的了解，但关于肺炎克雷伯菌外膜囊泡(outer membrane vesicles， OMVs)及其在细菌发病机制中的作用仍未得到充分的阐明。我们总结了目前有关肺炎克雷伯菌外膜囊泡组成成分的知识，并探讨它们在肺炎克雷伯菌存活和致病等方面的研究进展。重点阐述了其生物学功能。

关键词：肺炎克雷伯菌外膜囊泡生物学功能疫苗

基于明尼苏达沙门氏菌Re595脂多糖低毒改造的外膜囊泡佐剂活性研究

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微生物学报 2024年

作者：张嘉雯尹文竹王海燕张金秋邓碧华卢宇周明旭马芳兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地国家兽用生物制品工程技术研究中心

【目的】外膜囊泡(outer membrane vesicles， OMVs)是由革兰氏阴性菌和某些革兰氏阳性菌生成和分泌的球形双层膜结构，含有丰富的细菌表面抗原，因此在疫苗相关领域具有重要的研究价值。脂多糖(lipopolysaccharide， LPS)作为OMVs的主... 详细信息

【目的】外膜囊泡(outer membrane vesicles， OMVs)是由革兰氏阴性菌和某些革兰氏阳性菌生成和分泌的球形双层膜结构，含有丰富的细菌表面抗原，因此在疫苗相关领域具有重要的研究价值。脂多糖(lipopolysaccharide， LPS)作为OMVs的主要结构，在诱导免疫活性的同时，也成为影响OMVs安全性的主要因素。因此，通过基因工程改造细菌LPS以生产安全高效的OMVs，是促进其生产应用的有效途径之一。【方法】以O抗原和大部分核心抗原缺失的明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota) Re595为研究对象，通过缺失酰基链编码基因msbB和导入弗朗西斯菌磷酸酶基因lpxE，减少类脂A上的酰基链和磷酸基团，从而获得低毒LPS；提取亲本株与改造株LPS与OMVs，比较其刺激免疫细胞的炎性反应，以OMVs作为免疫增强剂制备口蹄疫灭活疫苗，评价免疫活性。【结果】Re595经LPS低毒改造成功降低该菌OMVs的内毒素活性和炎性反应，进一步评价亲本株Re595与低毒改造株的OMVs免疫活性发现，LPS低毒改造虽降低了OMVs的炎性反应但其免疫增强活性显著提高。【结论】本研究说明LPS低毒改造后可降低细菌OMVs毒性，并提高其免疫增强活性，该结果将为OMVs作为免疫佐剂的应用提供理论依据。

关键词：外膜囊泡免疫佐剂脂多糖内毒素活性基因编辑

牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡与阿尔茨海默病的相关性研究进展

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微生物学通报 2023年第8期50卷 3647-3658页

作者：刘忠斌龙伟黄嘉玲徐依萍葛颂遵义医科大学附属口腔医院贵州遵义563000

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)是牙周炎的主要致病菌,在其生长过程中可产生大量毒力因子。P.gingivalis及其毒力因子不仅可引发牙周组织的破坏,还可扩散至全身并影响包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)在内的多种... 详细信息

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)是牙周炎的主要致病菌,在其生长过程中可产生大量毒力因子。P.gingivalis及其毒力因子不仅可引发牙周组织的破坏,还可扩散至全身并影响包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)在内的多种系统疾病的发生、发展。P.gingivalis外膜囊泡包含亲本细菌的大量毒力因子且体积小,更易扩散至远处组织和器官。近期研究发现,P.gingivalis外膜囊泡可能在诱发神经炎症和促进AD的发生、发展中起重要作用,但具体机制尚不清楚。本文就P.gingivalis外膜囊泡的发生与调控、所含主要毒力因子及其与AD的关系进行综述,以阐明牙周炎与AD相关的生物学机制。

关键词：牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡阿尔茨海默病相关性

荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性分析与免疫效果评价

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2168-2175页

作者：高洁李晓成穆杨张慧魏荣李劼西北农林科技大学动物医学院预防兽医系杨凌712100 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 金宇保灵生物药品有限公司呼和浩特010111

旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope... 详细信息

旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察OMVs的形态及大小,采用SDS-PAGE、LC-MS/MS分析OMVs主要蛋白,以蛋白定量试剂测定其蛋白浓度以及鲎试剂法测定其内毒素含量,然后以新西兰白兔为动物模型,开展免疫保护效果评价。结果显示,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs呈完整规则的球形结构,平均粒径108.3 nm,其中的蛋白质主要集中在33、40、53 ku处,内毒素含量为3.31×10^(6) EU·mL^(-1),用制备的OMVs以50μg·只^(-1)免疫新西兰白兔2次后,免疫兔血清抗体效价可达1∶405 600,外周血淋巴细胞IFN-γ和IL-4转录水平明显升高,对荚膜B型多杀性巴氏杆菌攻击的保护效率为75%。综上表明,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的外膜囊泡具有良好的免疫保护效果,有作为候选疫苗的潜质,本研究为外膜囊泡疫苗的研究奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性疫苗

荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性分析与免疫效果评价

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畜牧兽医学报 2024年

作者：高洁李晓成穆杨张慧魏荣李劼金宇保灵生物药品有限公司中国动物卫生与流行病学中心西北农林科技大学动物医学院

旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles， OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs，通过电镜观察OMVs的形态及大小，采用SDS-PAGE、质谱... 详细信息

旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles， OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs，通过电镜观察OMVs的形态及大小，采用SDS-PAGE、质谱分析OMVs主要蛋白，以蛋白定量试剂测定其蛋白浓度以及鲎剂试验测定其内毒素含量，然后以新西兰白兔为动物模型，开展免疫保护效果评价。结果显示，荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs呈完整规则的球形结构，平均粒径108.3 nm，其中的蛋白质主要集中在33、40、53 ku处，内毒素含量为3.31×106EU·mL－1，用制备的OMVs以每只50 μg免疫新西兰兔2次后，免疫兔血清抗体效价可达1:405 600，外周血淋巴细胞IFN-γ和IL-4转录水平明显升高，对荚膜B型多杀性巴氏杆菌攻击的保护效率为75%。综上表明，荚膜B型多杀性巴氏杆菌的外膜囊泡具有良好的免疫保护效果，具有作为候选疫苗的潜质，本研研究为外膜囊泡疫苗的研究奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性疫苗