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牛血清中牛腺病毒3型EvaGreen qPCR检测方法的建立

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微生物学免疫学进展 2022年第4期50卷 15-20页

作者：贺倩鱼轲郭敏李永佳司璐刘军李佳林魏至栋兰州生物制品研究所有限责任公司疫苗一室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的建立EvaGreen qPCR检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus 3,BAV3)的方法,用于牛血清等牛源材料的检测。方法依据GenBank公布的BAV3标准毒株WBR-1全基因序列,基于E2B区域高度保守序列设计引物,提取并制备DNA标准品,建立EvaGreen qPCR检... 详细信息

目的建立EvaGreen qPCR检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus 3,BAV3)的方法,用于牛血清等牛源材料的检测。方法依据GenBank公布的BAV3标准毒株WBR-1全基因序列,基于E2B区域高度保守序列设计引物,提取并制备DNA标准品,建立EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,并对该方法的特异性、灵敏度及精密度进行验证。最后利用该方法检测牛血清中的BAV3,并与细胞培养法及荧光抗体检测对比,以验证该方法的适用性。结果建立的EvaGreen qPCR检测BAV3的方法标准曲线R^(2)>0.99,扩增效率处于90%~110%,可检测范围为0.2×10^(0)~0.2×10copies/μL。实验内Ct值的CV病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、副流感病毒3型(parainfluenza virus 3,PI3)、呼肠孤病毒(reovirus,REO)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、狂犬病毒(rabies virus,RV)、羊轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus,LLR)基因组均无交叉反应,特异性良好。采用EvaGreen qPCR对198份新生牛血清进行BAV3检测,阳性检出率为10.1%,检出率高于细胞培养法及荧光抗体检测。结论成功建立了EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,该方法快速、灵敏、特异、易于标准化,可用于牛血清中BAV3的检测。

关键词：外源病毒牛腺病毒3型实时定量PCR EvaGreen

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牛腺病毒3型免疫荧光检测方法的建立

国际生物制品学杂志 2022年第5期45卷 261-265页

作者：贺倩刘艳郭敏张平司璐李佳林魏至栋鱼轲兰州生物制品研究所有限责任公司疫苗一室兰州730046

目的建立免疫荧光检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus type3,BAV-3)的方法,用于生物制品用牛源材料的检测。方法分别以牛鼻甲骨细胞、传代牛肾细胞、原代牛肾细胞培养BAV-3,筛选最适宜的敏感细胞培养BAV-3,纯化获得抗原后免疫BALB/c小... 详细信息

目的建立免疫荧光检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus type3,BAV-3)的方法,用于生物制品用牛源材料的检测。方法分别以牛鼻甲骨细胞、传代牛肾细胞、原代牛肾细胞培养BAV-3,筛选最适宜的敏感细胞培养BAV-3,纯化获得抗原后免疫BALB/c小鼠。采用杂交瘤抗体技术制备抗BAV-3单克隆抗体(单抗),亲和层析法纯化后用异硫氰酸荧光素标记。用制备的单抗建立直接免疫荧光法检测BAV-3,并对方法的特异性、灵敏度及中间精密度进行验证。结果用抗BAV-3单抗检测牛腹泻病毒、副流感病毒3型、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、羊轮状病毒,均无交叉反应。采用该方法检测牛鼻甲骨细胞培养的BAV-3,3次传代可检出的最低病毒含量和标准差分别为0.10和0.05 CCID_(50)。结论建立的免疫荧光检测BAV-3方法具有良好的特异性和较高的灵敏度、中间精密度,可用于BAV-3的常规检测。

关键词：外源病毒牛腺病毒3型抗体,单克隆免疫荧光试验

2014年《中国兽药杂志》第48卷总目次(卷终)

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中国兽药杂志 2014年第12期 66-69页

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行业动态

猪业科学 2016年第2期33卷 16-20页

2016年起新疆要建病死畜禽无害化处理场1月28日报道,日前新疆维吾尔自治区人民政府办公厅下发了《关于建立病死畜禽无害化处理机制的实施意见》。根据该意见,"十三五"期间,全区每个地（州、市）建设1;个病死畜禽无害化处理场。2016年开... 详细信息

2016年起新疆要建病死畜禽无害化处理场1月28日报道,日前新疆维吾尔自治区人民政府办公厅下发了《关于建立病死畜禽无害化处理机制的实施意见》。根据该意见,"十三五"期间,全区每个地（州、市）建设1;个病死畜禽无害化处理场。2016年开始,在昌吉州、克拉玛依市、巴州、阿勒泰地区、喀什地区、阿克苏地区各建设1个处理场。2016年底前,全区

关键词：兽药残留猪圆环病毒疫苗育肥猪莱芜黑猪无害化处理场兽药注册办法病死畜禽猪场生猪屠宰猪轮状病毒外源病毒猪传染性胃肠炎猪流行性腹泻活疫苗牧业科技行业动态

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禽流感H_9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

中国兽药杂志 2006年第8期40卷 1-4页

作者：姜北宇赵继勋张国中景小冬黄凤军章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089 中国农业大学实验动物研究所北京100094

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中... 详细信息

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。

关键词： H9亚型禽流感病毒纯化外源病毒

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疫病预防

畜牧兽医科技信息 2002年第5期 37-39页

硫代硫酸钠系无色无臭结晶,可溶于等量水中,熔点+50℃(约48℃)。它是用亚硫酸钠溶液与硫,通过加热的方法而制得。硫代硫酸钠约含16％的钠和23％的硫。在药理上,它具有解毒(用于汞、铅、砷、碘和溴中毒)、消炎和脱过敏作用。在饲养上,它... 详细信息

硫代硫酸钠系无色无臭结晶,可溶于等量水中,熔点+50℃(约48℃)。它是用亚硫酸钠溶液与硫,通过加热的方法而制得。硫代硫酸钠约含16％的钠和23％的硫。在药理上,它具有解毒(用于汞、铅、砷、碘和溴中毒)、消炎和脱过敏作用。在饲养上,它可以用为平衡日粮的钠和硫;

关键词：犬瘟热弱毒疫苗日龄 SPF 疫病预防免疫效果硫代硫酸钠大苏打硫代硫酸盐传染性法氏囊病仔猪犬瘟热病毒外源病毒血清样品抗体价鼻腔免疫弱毒苗

赵鹏:禽白血病等垂直传播性病毒危害巨大,可从传播途径布局防控

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北方牧业 2019年第14期 17-18页

就动物传染病防控而言,依旧离不开切断传播途径、控制、淘汰传染源及保护易感群体这三要素,掌握基本疾病传播途径并全面切断对于实施动物疫病净化十分重要。只有充分了解相关疾病的各种传播途径并通过相关措施加以切断才能在实施净化过... 详细信息

就动物传染病防控而言,依旧离不开切断传播途径、控制、淘汰传染源及保护易感群体这三要素,掌握基本疾病传播途径并全面切断对于实施动物疫病净化十分重要。只有充分了解相关疾病的各种传播途径并通过相关措施加以切断才能在实施净化过程最大程度地将带毒动物淘汰或避免漏检动物的扩大传播。

关键词：禽白血病垂直传播生物安全体系传播性传播途径外源病毒网状内皮增生疫病净化重组禽痘病毒病毒分离鸡精液病毒危害

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鸡包涵体肝炎病毒CELOV株的鉴定研究

中国兽药杂志 2009年第1期43卷 6-9页

作者：智海东杨志解生亮王云峰朱庆虎王牟平刘霓红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨150001

采用鸡胚有限稀释法将鸡包涵体肝炎病毒(CELOV)纯化。将纯化的CELOV在SPF鸡胚上连续传10代,对各代次的毒种均进行毒价测定,并选择不同代次进行外源病毒、抗原性等方面的系统鉴定。结果表明,不同代次的病毒毒价稳定,病毒纯净、特异,无外... 详细信息

采用鸡胚有限稀释法将鸡包涵体肝炎病毒(CELOV)纯化。将纯化的CELOV在SPF鸡胚上连续传10代,对各代次的毒种均进行毒价测定,并选择不同代次进行外源病毒、抗原性等方面的系统鉴定。结果表明,不同代次的病毒毒价稳定,病毒纯净、特异,无外源病毒感染。采用不同代次病毒鸡胚尿囊液制备3批琼脂扩散试验抗原敏感、特异,用原倍、2倍稀释的抗原可以与32倍稀释的阳性血清反应,出现清晰的沉淀线。抗原不与其它病原体的阳性血清反应。用CELOV制备的琼扩抗原可用于鸡包涵体肝炎病毒感染的血清学检测。

关键词：鸡包涵体肝炎病毒外源病毒抗原性特异性鉴定

疫苗原辅料中猪圆环病毒1型、2型和猪细小病毒PCR检测方法的建立及验证

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微生物学免疫学进展 2022年第5期50卷 11-15页

作者：施金荣程小玲申瑷琳张雪婷程尧何婧雯段凯武汉生物制品研究所有限责任公司质量控制室湖北武汉430207 国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207

目的建立疫苗原辅料中猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)、2型(porcine circovirus type 2,PCV2)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法并进行验证。方法根据NCBI公布的PCV1、PCV2和PPV基因序列设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立起检测疫苗原辅料中PCV1、PCV2和PPV的PCR检测方法,并对方法的重复性、中间精密度、专属性、耐用性和检测限进行了验证。结果PCR反应的退火温度为55℃,特异性引物浓度为10μmol/L。该方法重复性、中间精密度、专属性和耐用性均良好,对PCV1、PCV2、PPV的最低检测限分别为1 pg/μL、100 fg/μL和10 fg/μL。结论PCR检测方法可以有效检测出疫苗原辅料中外源病毒污染情况,能为生产合格的疫苗提供质量保证。

关键词：疫苗原辅料猪圆环病毒1型猪圆环病毒2型细小病毒聚合酶链式反应外源病毒方法验证质量保证