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用共聚焦显微镜观察ACh及ATP对豚鼠耳蜗外毛细胞Ca^（2＋）的调控

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生理学报 1995年第2期47卷 105-110页

作者：郗昕姜泗长解放军总医院耳鼻咽喉科研究所

用激光扫描共聚焦显微镜研究了一般公认的耳蜗传出神经递质乙酰胆碱（ＡＣｈ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣｓ）胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的作用，ＯＨＣｓ用Ｃａ２＋敏感荧光染料Ｆｌｕｏ－３着色... 详细信息

用激光扫描共聚焦显微镜研究了一般公认的耳蜗传出神经递质乙酰胆碱（ＡＣｈ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣｓ）胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的作用，ＯＨＣｓ用Ｃａ２＋敏感荧光染料Ｆｌｕｏ－３着色，胞内Ｃａ２＋的分布以细胞底部稍强。ＡＣｈ在ＯＨＣ底部引起［Ｃａ２＋］ｉ的缓慢上升并维持在一个较高水平。ＡＴＰ在整个ＯＨＣ引起一个急剧的［Ｃａ２＋］ｉ升高，升高的幅度在ＯＨＣ顶部最大。随着ＡＴＰ的持续作用，［Ｃａ２＋］ｉ缓慢下降，呈耗竭趋势，但此时用ＡＣｈ刺激仍能引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高，这提示ＡＣｈ引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高有胞外Ｃａ２＋流入的成分，ＡＴＰ引起的［Ｃａ２＋］ｉ；升高可能主要为胞内Ｃａ２＋库的释放，但也不排除通过ＡＴＰ门控的阳离子通道的直接进入。

关键词：钙外毛细胞乙酰胆碱腺苷三磷酸耳蜗豚鼠

过氧化氢对老年豚鼠耳蜗外毛细胞大电导钙激活钾通道电流的影响

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生理学报 2014年第3期66卷 302-306页

作者：赖丹黄非泸州医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科泸州646000 宜宾市第一人民医院耳鼻咽喉科宜宾644000

本文旨在研究氧自由基(oxygen free radical)供体——过氧化氢(H2O2)对老年豚鼠耳蜗外毛细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,BKCa channels)电流的影响,探讨氧自由基对老年豚鼠耳蜗外毛细胞BKCa通道电流的作用机制。采用急性酶分离方法分离耳蜗外毛细胞,用全细胞膜片钳记录通道电流,鉴别并分析通道特性,观察不同浓度H2O2对BKCa通道电流的影响。结果显示,在膜片钳全细胞模式下,可记录到一串幅值较大、快速激活、几乎不失活的电流,激活电压大于-40^-30 mV,电流随膜电位的增加而增强,电流幅值不断增大,并表现出外向整流的特性,无"rundown"现象;IbTX(100 nmol/L)可完全阻断通道活动,证实该电流为BKCa通道电流。BKCa通道电流表现出明显的H2O2浓度依赖性激活,电流幅值和峰值电流密度随H2O2浓度(1、2、4μmol/L)增加而增大。以上结果提示,外毛细胞可能存在能够调节胞内钙平衡的氧自由基/BKCa途径。

关键词：过氧化氢大电导钙激活钾通道外毛细胞膜片钳

耳蜗外毛细胞的几种分离方法的比较及形态学观察

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中国应用生理学杂志 2008年第3期24卷 373-376页

作者：田原于利辽宁医学院基础学院生理教研室辽宁锦州121001

目的:比较几种耳蜗外毛细胞的分离方法及其形态学观察。方法:分别采用三种方法分离耳蜗外毛细胞,并进行了光镜下及耳蜗铺片硝酸银染色下的形态学观察。结果:三种分离方法均可分离出活性良好的耳蜗外毛细胞(OHC);耳蜗铺片硝酸银染色观察... 详细信息

目的:比较几种耳蜗外毛细胞的分离方法及其形态学观察。方法:分别采用三种方法分离耳蜗外毛细胞,并进行了光镜下及耳蜗铺片硝酸银染色下的形态学观察。结果:三种分离方法均可分离出活性良好的耳蜗外毛细胞(OHC);耳蜗铺片硝酸银染色观察到耳蜗外毛细胞的形态和分布状况。结论:成功地分离出单离的活性良好的耳蜗外毛细胞,这对于深入研究它们的正常生理功能及某些病理状态下的功能及形态变化意义重大。

关键词：耳蜗外毛细胞分离形态学

ATP和乙酰胆碱诱发豚鼠耳蜗外毛细胞内CICR的激光共聚焦研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第7期23卷 316-321页

作者：黄莉杨军上海交通大学医学院附属新华医院耳鼻咽喉-头颈外科上海200092 山西省肿瘤医院乳腺放疗科太原030013

目的:运用激光共聚焦研究ATP和乙酰胆碱(ACh)对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响以及诱发Ca2+介导的Ca2+释放(CICR)的可能机制。方法:用酶孵育机械分离法,分离豚鼠耳蜗外毛细胞(OHC),钙敏荧光探针Fluo-3染色后,用激光... 详细信息

目的:运用激光共聚焦研究ATP和乙酰胆碱(ACh)对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响以及诱发Ca2+介导的Ca2+释放(CICR)的可能机制。方法:用酶孵育机械分离法,分离豚鼠耳蜗外毛细胞(OHC),钙敏荧光探针Fluo-3染色后,用激光扫描共聚焦显微镜分别记录在细胞外液有钙或无钙条件下,加入ATP、ACh、斯里兰卡肉桂碱(Ryanodine)+ATP(或ACh)和毒胡萝卜素(Thapsigargin)+ATP(或ACh)后的OHC的[Ca2+]i的变化。结果:在含钙的细胞外液中,ATP、Ryanodine+ATP、Thapsigargin+ATP、ACh、Ryanodine+ACh和Thapsigargin+ACh均可引起[Ca2+]i升高,引起明显的波峰,荧光强度相对峰值分别为1.60±0.01(ATP)、1.644±0.005(Ryanodine+ATP)、1.491±0.005(Thapsigargin+ATP)、1.43±0.01(ACh)、1.58±0.02(Ryanodine+ACh)、1.398±0.003(Thapsigargin+ACh);而在不含钙的细胞外液中,ATP和Ryanodine+ATP仍可引起[Ca2+]i出现幅度较小的波峰,分别为1.341±0.006和1.386±0.008,而ACh、Ryan-odine+ACh、Thapsigargin+ACh和Thapsigargin+ATP未引起明显[Ca2+]i波峰出现,其中ACh不能引起[Ca2+]i的升高,Ryanodine+ACh、Thapsigargin+ACh和Thapsigargin+ATP分别引起[Ca2+]i缓慢升高。结论:在细胞外液有Ca2+的条件下,ATP和ACh引起OHC的[Ca2+]i升高,除了通过离子通道引起胞外Ca2+内流,还有IP3敏感钙库的释放和诱发CICR。在无Ca2+的条件下,ATP仍能诱发CICR,其机制可能是ATP促进IP3敏感钙库释放Ca2+,Ca2+又诱发了CICR,而ACh的反应是Ca2+依赖性的,在细胞外液无Ca2+的条件下,ACh不能引起IP3敏感钙库的释放和诱发CICR。

关键词：三磷酸腺苷乙酰胆碱 Ca^2+ 介导的Ca^2+释放外毛细胞钙耳蜗

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豚鼠耳蜗单离外毛细胞的外向整流钾电流

临床耳鼻咽喉科杂志 2002年第1期16卷 27-30页

作者：杨军汪吉宝上海第二医科大学附属仁济医院耳鼻咽喉头颈外科上海200001 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科

目的 :观察豚鼠耳蜗单离外毛细胞 (OHC)的电生理特性 ,记录不同长度OHC的外向整流钾电流 ,分析区分外向整流钾电流所包含的通道电流成分 ,研究外向整流钾电流的动力学特征。方法 :采用酶消化法及机械分离OHC。运用全细胞膜片钳技术 ,在... 详细信息

目的 :观察豚鼠耳蜗单离外毛细胞 (OHC)的电生理特性 ,记录不同长度OHC的外向整流钾电流 ,分析区分外向整流钾电流所包含的通道电流成分 ,研究外向整流钾电流的动力学特征。方法 :采用酶消化法及机械分离OHC。运用全细胞膜片钳技术 ,在电压钳下记录K+ 通道电流。结果 :OHC的全细胞膜电容为 (30 .96±2 .79) pF(n =2 9) ,零电流电位 (30± 2 .1)mV(n =16 ) ,反转电位为 (- 5 1.6 7± 1.84 )mV(n =9)。不同长度OHC的外向整流钾电流存在系统差异 ,短OHC表现出大的钾电导 ,长OHC则相反。 10 0 μmol/L的氯化镉 (Cd Cl2 )抑制了OHC外向整流钾电流的最大电流幅度的 6 0 % ,且改变了电流的动力学特征 ,对峰电流的影响明显大于稳态电流 (P外向整流钾电流的激活符合Boltzmann方程 ,V1/ 2 =(- 11.0 7± 0 .2 6 )mV ,S =(6 .6 2± 1.74 )mV(n=13)。结论 :外向整流钾电流包含有钙离子激活的钾离子电流。

关键词：耳蜗外毛细胞外向整流钾电流钾通道豚鼠

哺乳动物耳蜗外毛细胞的马达蛋白:Prestin

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生理科学进展 2008年第1期39卷 53-56页

作者：于利汤浩中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001

近几年的研究发现,在耳蜗基底膜的外毛细胞膜上有一种新奇的蛋白质:prestin(马达蛋白),它能感受细胞膜电位的变化,进而发生构象改变,引发外毛细胞的形状和表面积的改变。Prestin作为一种独特的马达蛋白,能驱动耳蜗外毛细胞的电能动性(el... 详细信息

近几年的研究发现,在耳蜗基底膜的外毛细胞膜上有一种新奇的蛋白质:prestin(马达蛋白),它能感受细胞膜电位的变化,进而发生构象改变,引发外毛细胞的形状和表面积的改变。Prestin作为一种独特的马达蛋白,能驱动耳蜗外毛细胞的电能动性(electrom otility),产生耳蜗的放大器作用,因而使哺乳动物的听觉具有高度的敏感性,广阔的听觉域,敏锐的频率选择性。这种蛋白质的缺失或基因的突变会导致听觉功能严重受损,对于prestin的深入细致的研究,也许可以使人们进一步认识和理解哺乳动物的听觉调谐机制,通过对这种蛋白质基因的表达的调控,是否能够防治一些与之相关的疾病?这或许将是今后听觉研究领域的一个重要课题。

关键词：外毛细胞电能动性马达蛋白 Prestin

豚鼠耳蜗外毛细胞和Deiters细胞的同时分离法

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临床耳鼻咽喉科杂志 2003年第1期17卷 44-46页

作者：常青龚树生唐明 Hescheler J 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022 华中科技大学同济医学院生理教研室德国科隆大学神经生理学研究所

目的 :探讨豚鼠耳蜗外毛细胞 (OHC)和Deiters细胞 (DC)同时分离的方法。方法 :选健康杂色豚鼠 ,解剖出耳蜗基底膜 ,采用酶消化后机械分离。结果 :可以同时获得一定数量、活性良好、长短不一的OHC和DC。结论 :熟悉耳蜗的解剖特性。

关键词：耳蜗外毛细胞 Deiters细胞细胞分离

川芎嗪抗链霉素耳毒性作用及其对豚鼠耳蜗外毛细胞钾通道的影响(英文)

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生理学报 2007年第4期59卷 534-538页

作者：汤浩崔桂英石丽娟高青华曹宇中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001

本文旨在研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)拮抗链霉素耳毒性作用及其对豚鼠耳蜗外毛细胞K^+通道的影响,探讨TMP拮抗链霉素耳毒性的离子通道机制。60只豚鼠随机分为6组,应用听觉脑干反应(auditory brainstem response,ABR)技术检测豚... 详细信息

本文旨在研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)拮抗链霉素耳毒性作用及其对豚鼠耳蜗外毛细胞K^+通道的影响,探讨TMP拮抗链霉素耳毒性的离子通道机制。60只豚鼠随机分为6组,应用听觉脑干反应(auditory brainstem response,ABR)技术检测豚鼠ABR听阈,观测TMP的抗链霉素耳毒作用;并采用全细胞膜片钳技术观察TMP对耳蜗外毛细胞Ca^(2+)敏感K^+电流的影响。结果显示,TMP明显降低链霉素导致的豚鼠ABR听阈升高,提示TMP具有抗链霉素耳毒性作用;TMP能明显增大豚鼠耳蜗外毛细胞Ca^(2+)敏感K^+电流,并呈浓度依赖关系。结果提示,TMP通过增大K^+通道电导而拈抗链霉素耳毒性作用。

关键词：川芎嗪外毛细胞链霉素 K^+通道

卡那霉素对乙酰胆碱引起外毛细胞内钙离子浓度变化的影响

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中国药理学通报 2009年第6期25卷 748-750页

作者：高青华杨宇刘水策汤浩中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院辽宁沈阳110004

目的观察卡那霉素对乙酰胆碱升高外毛细胞内Ca2+浓度的影响,探讨卡那霉素耳毒性与耳蜗传出神经系统的关系。方法健康豚鼠15只断头处死,人工外淋巴液中分离活性良好的单离外毛细胞(OHC),分为空白对照组、乙酰胆碱(ACh)组和卡那霉素+ACh组... 详细信息

目的观察卡那霉素对乙酰胆碱升高外毛细胞内Ca2+浓度的影响,探讨卡那霉素耳毒性与耳蜗传出神经系统的关系。方法健康豚鼠15只断头处死,人工外淋巴液中分离活性良好的单离外毛细胞(OHC),分为空白对照组、乙酰胆碱(ACh)组和卡那霉素+ACh组。Fluo-3/AM负载30min,观察OHC内Ca2+荧光强度变化,即Ca2+浓度的变化。结果空白对照组OHC内Ca2+荧光强度基本不变。ACh组OHC内Ca2+荧光强度峰值平均升幅底部为3.06倍,顶部为1.61倍(n=6)。卡那霉素+ACh组OHC内Ca2+荧光强度峰值平均升幅底部为1.75倍,顶部为1.29倍(n=6)。结论卡那霉素能够明显抑制ACh引起的外毛细胞内Ca2+浓度升高的幅度。

关键词：外毛细胞钙离子卡那霉素乙酰胆碱