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免疫毒性评价中不同淋巴细胞激活剂致大鼠外周全血产生细胞因子作用的评价

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生态毒理学报 2014年第2期9卷 239-244页

作者：艾文超李海山刘伟宋乃宁程艳崔媛李蕾谢文平陈会明中国检验检疫科学研究院化学品安全研究所北京100123

淋巴细胞激活剂可有效活化免疫细胞,进而促进细胞因子的产生和分泌,但不同激活剂及激活方式的选择直接影响细胞因子产生的种类和水平。为评价不同激活剂促细胞因子产生的作用,筛选一种快速有效的激活方法用于细胞因子检测,本研究采用不... 详细信息

淋巴细胞激活剂可有效活化免疫细胞,进而促进细胞因子的产生和分泌,但不同激活剂及激活方式的选择直接影响细胞因子产生的种类和水平。为评价不同激活剂促细胞因子产生的作用,筛选一种快速有效的激活方法用于细胞因子检测,本研究采用不同浓度佛波酯(PMA)/钙离子载体、植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con A)、脂多糖(LPS)和美洲商陆素(PWM)体外激活大鼠外周全血0、2、4、6、8、10 h,对各样本中10种细胞因子(白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素13(IL-13)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)和转化生长因子β(TGF-β))含量进行检测,并评价了环孢素A和硫唑嘌呤2种免疫抑制剂对激活剂诱导产生细胞因子的抑制作用。结果表明25 ng·mL-1PMA和1μg·mL-1钙离子载体体外诱导6 h可以显著升高大鼠外周全血IL-2、IFN-γ、TNF-α、RANTES和TGF-β含量,是一种作用广泛的激活方法。其诱导产生细胞因子作用的变化可反映机体免疫系统和功能的损伤,可有效用于外源化学物免疫毒性评价。

关键词：淋巴细胞激活剂细胞因子外周全血悬浮芯片系统免疫毒性评价

应用PCR-EIA检测外周全血和血清样本诊断急性人类布鲁氏菌病

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中华医学信息导报 2004年第8期19卷 6-6页

作者：安静

希腊Ioannina大学微生物系的Dr Vrioni等收集了243例急性布鲁氏菌病患者的全血和血清，这些患者经血培养、血清学检测及患者临床特征确诊，其中通过血培养鉴定布鲁氏菌种类诊断的病人为179例；通过临床体征和血清学检测诊断的病例为64... 详细信息

希腊Ioannina大学微生物系的Dr Vrioni等收集了243例急性布鲁氏菌病患者的全血和血清，这些患者经血培养、血清学检测及患者临床特征确诊，其中通过血培养鉴定布鲁氏菌种类诊断的病人为179例；通过临床体征和血清学检测诊断的病例为64例；同时选取50名健康个体做对照组。研究者选取对布鲁氏菌类起特异性免疫反应的细胞膜蛋白的编码基因中一段长223bp保守序列进行扩增，

关键词： PCR-EIA 外周全血血清样本急性人类布鲁氏菌病血清学检测

外周血Tg mRNA检测用于甲状腺癌诊断及随访的价值

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外周血Tg mRNA检测用于甲状腺癌诊断及随访的价值

作者：穆龙龙北京协和医学院

学位级别：硕士

甲状腺癌是近年来发病率增长最快的恶性肿瘤之一,其中约98%为分化型甲状腺癌（Differentiated Thyroid Cancer,DTC）。虽然DTC的死亡率较低,但复发率高达20%-40%,因此针对甲状腺癌的早期诊断以及术后患者的随访十分重要。血清甲状腺球... 详细信息

甲状腺癌是近年来发病率增长最快的恶性肿瘤之一,其中约98%为分化型甲状腺癌（Differentiated Thyroid Cancer,DTC）。虽然DTC的死亡率较低,但复发率高达20%-40%,因此针对甲状腺癌的早期诊断以及术后患者的随访十分重要。血清甲状腺球蛋白（Tg）测定是公认的监测DTC复发的敏感方法,10-25%的DTC病人由于有Tg自身抗体（Tg Ab）的存在,干扰了Tg的免疫学检测,影响了对DTC患者复发的正确判断。测定外周血中Tg mRNA的表达,可消除Tg Ab的不利影响,获得准确的信息,但学术界对其在临床上的应用,仍存在争议。本研究的第一部分,探讨了从少量全血标本中标准化获取高质量总RNA的方法,研究了标本保存条件对总RNA提取效率的影响。对179例保存在不同温度和时间的血标本以及20例冻融次数不同的血标本进行了总RNA的提取、定量和定性分析,证实新鲜血的总RNA浓度最高,超低温保存全血更为适宜,冻融次数的增加会导致RNA完整性下降。本研究所确立的总RNA提取条件稳定、可靠、实用。本研究的第二部分利用实时定量Real-Time PCR技术对308例全血标本和23例甲状腺病变组织中的Tg mRNA进行了相对定量分析,结合血清Tg、Tg Ab结果,深入探讨了Tg mRNA在不同甲状腺疾病中的表达差异。结果显示,甲状腺病变组织和病变旁组织Tg mRNA的表达无显著差异,p=0.540。甲状腺癌患者血液中的Tg mRNA表达量最高,与对照组、结节性甲状腺肿组和甲状腺功能亢进组间差异显著,p值分别为：0.0005、0.0002、0.0027。回归分析发现血清Tg和Tg Ab与血液中Tg mRNA的表达水平呈正相关。而DTC分期情况与血液Tg mRNA表达水平关系不大。本研究证明：Tg mRNA的检测,在DTC的临床诊断中帮助不大,而在其术后的随访中非常有意义,尤其是针对Tg Ab阳性的患者,Tg mRNA的检出率和表达量能够提示并弥补免疫学检测Tg的不足,通过对外周血Tg mRNA的定量检测,结合血清Tg, TgAb结果以及其它用于DTC患者随访的检测手段,对于判断DTC患者术后是否复发,提高患者的生存率和生活质量有积极意义。

关键词：外周全血 RNA提取 RNA浓度 RNA完整性分化型甲状腺癌实时定量Real-Time PCR 甲状腺球蛋白甲状腺球蛋白抗体甲状腺球蛋白mRNA

不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响

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中国微生态学杂志 2015年第2期27卷 224-226页

作者：何松哲何慧陈懿陈羽余道军浙江中医药大学附属杭州第一医院浙江杭州310006 杭州市第一人民医院浙江杭州310006 温州医科大学浙江温州325035

目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用U... 详细信息

目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。

关键词：外周全血 RNA提取 RNA浓度 RNA纯度

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

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北京医学 2010年第10期32卷 837-840页

作者：穆龙龙赵志英朱立中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院核医学科 100730

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃... 详细信息

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃下保存1周前、后分别测定浓度和纯度,观察两者差异。结果新鲜血来源的总RNA浓度最高,平均306.51ng/μl;冻融2次全血仍可获得足量的RNA,浓度181.98ng/μl,RNA完整性有所下降;-80℃保存1周的RNA,浓度和纯度都略有下降。结论利用Trizol法可从小体积全血标本中获取足量有效的总RNA;不同保存条件全血中所获取的总RNA浓度存在差异;总RNA-80℃短期保存也会略有降解。

关键词：外周全血 RNA提取 RNA浓度 RNA完整性