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复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

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中国临床康复 2004年第24期8卷 5060-5062,F007页

作者：郭顺根张玮戴敏谢艳爽牛建昭赵丽云赵福建白锦雯北京中医药大学细胞与生化实验室北京市100029

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并... 详细信息

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48,72h后,免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达,并经图像分析系统作定量分析。结果培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78.93±18.56,396.29±78.56;58.95±5.21,138.92±20.21;63.83±12.97,190.87±52.97;75.46±26.72,284.54±66.72)与模型组(119.69±23.84,528.79±26.84)比较,差异有显著性意义(P复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。

关键词：复方鳖甲软肝方肝星形细胞结蛋白突触素肝纤维化

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

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中国临床康复 2004年第21期8卷 4274-4276,i002页

作者：郭顺根张玮戴敏谢艳爽牛建昭赵丽云赵福建白锦雯北京中医药大学细胞与生化实验室北京市100029

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组... 详细信息

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48h后,免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达,经图像分析系统定量分析。结果:培养24,48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h:高、中、低剂量分别为110.95±45.21,243.82±62.97,417.46±126.72;48h分别为:333.71±57.90,345.08±51.85,675.35±202.20)与模型组(24h:778.93±190.26;48h:1032.69±106.64)比较,差异有显著性意义(P复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-SMA表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。

关键词：复方鳖甲软肝方肝星形细胞肌成纤维细胞肝纤维化治疗

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复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

中国临床康复 2004年第30期8卷 6690-6691页

作者：张玮郭顺根戴敏牛建昭赵丽云赵福建白锦雯北京中医药大学细胞与生化实验室北京市100029

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采... 详细信息

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。

关键词：增殖复方鳖甲软肝方肝星形细胞药物血清 HSC 离体中剂量培养显著性结论

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化细胞凋亡的实验研究

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时珍国医国药 2008年第5期19卷 1054-1055页

作者：段斐耿德海许文杰唐志远史建红河北大学医学部河北保定071000 河北省保定市第四医院 071051

目的通过观察细胞凋亡,探讨复方鳖甲软肝方防治肺纤维化的机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只,随机分为假手术组,模型组,阳性药物对照组,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。博莱霉素常规造模的同时给药,假手术组和模型组... 详细信息

目的通过观察细胞凋亡,探讨复方鳖甲软肝方防治肺纤维化的机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只,随机分为假手术组,模型组,阳性药物对照组,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。博莱霉素常规造模的同时给药,假手术组和模型组每天灌胃生理盐水,其余4组灌药进行防治。各组分别于7,14,28 d随机抽取10只大鼠,8只制成光镜标本,2只麻醉后快速开胸取肺组织,进行电镜标本的制作。免疫组化载玻片用DEPC处理后备用。结果Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞以及成纤维细胞均有凋亡。bax在肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞,肺泡巨嗜细胞胞质和胞膜均表达。假手术组和高、中剂量组呈弱阳性表达,模型组强阳性表达。Bc l-2在核膜和线粒体表达,模型组强阳性表达,药物组弱表达。结论复方鳖甲软肝方通过调节细胞凋亡,上调Bax活性,抑制Bc l-2的活性,抑制Ⅱ型上皮细胞凋亡,减少纤维积聚和纤维化形成,对肺纤维化起到防治作用。

关键词：复方鳖甲软肝方凋亡超微结构

复方鳖甲软肝方对MMPs表达在特发性肺纤维化的调控

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军医进修学院学报 2008年第3期29卷 213-213,235页

作者：段斐许文杰张梅戎瑞雪王蓓唐志远河北大学医学部保定071000

1材料和方法1.1药物复方鳖甲软肝方干粉,每瓶600g(批号20020501)。[第一段]

关键词：复方鳖甲软肝方肺纤维化基质金属蛋白酶类

复方鳖甲软肝方防治特发性肺间质纤维化的MMPs表达

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时珍国医国药 2008年第7期19卷 1637-1639页

作者：段斐耿德海张梅戎瑞雪王蓓唐志远河北大学河北保定071000 河北省保定市第四医院 071051

目的研究复方鳖甲软肝方对特发性肺间质纤维化防治的MMPs表达,探讨其机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只。随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。各组分别于7,14,28d随机抽取10... 详细信息

目的研究复方鳖甲软肝方对特发性肺间质纤维化防治的MMPs表达,探讨其机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只。随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。各组分别于7,14,28d随机抽取10只大鼠,麻醉后取肺组织,MMP-2采用原位杂交及RT-PCR的方法测定。MMP-1和MMP-9采用免疫组化的方法。结果复方鳖甲软肝方组在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,说明两者均有抑制纤维合成的作用。MMP-2的原位杂交和RT-PCR结果一致,在模型组过度表达,在药物组表达被抑制,表明药物对IPF的形成有抑制作用,以中、小剂量组为好。结论复方鳖甲软肝方在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,达到抗纤维化作用;复方鳖甲软肝方通过抑制MMP-2表达发挥抗纤维化的作用。

关键词：复方鳖甲软肝方肺间质纤维化基质金属蛋白酶家族

复方鳖甲软肝方防治肾间质纤维化作用机理的实验研究

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复方鳖甲软肝方防治肾间质纤维化作用机理的实验研究

作者：谷海瑛北京中医药大学

学位级别：硕士

肾间质纤维化(Renal interstitinal fibrosis,RIF)是多种肾脏疾病进展的共同结局。随着研究发现在慢性肾脏疾病中肾小球滤过率减少与肾间质纤维化密切相关,人们确信在慢性肾脏疾病的进展过程中肾间质纤维化扮演着极为重要的角色。肾小... 详细信息

肾间质纤维化(Renal interstitinal fibrosis,RIF)是多种肾脏疾病进展的共同结局。随着研究发现在慢性肾脏疾病中肾小球滤过率减少与肾间质纤维化密切相关,人们确信在慢性肾脏疾病的进展过程中肾间质纤维化扮演着极为重要的角色。肾小管间质损害的特征是炎细胞浸润,而促进炎细胞的浸润的细胞因子并未完全明了。大量研究证实在肾损害进程中前纤维化因子如细胞因子、粘附分子、生长因子及激活蛋白发挥着重要作用。在损伤因素作用下,基因转录增加是细胞因子产生过量的关键,其中核转录因子(nuclear factor-kappaB,NF-κB)扮演着重要的角色。在静息状态下,NF-κB与抑制蛋白家族(inhibitory Kb,IκB)紧密结合以无活性状态存在于细胞浆中,在多种因素诱导下,IκB将发生磷酸化并迅速降解,NF-κB被释放、激活并进入细胞核,结合于特异性DNA位点,从而启动一系列基因的转录,发挥其重要的生物学作用。肾小管间质损害与肾功能的丧失和进展到终末期肾衰竭密切相关。许多肾脏疾病中的肾脏固有细胞,如成纤维细胞、肾小管上皮细胞(Renal tubular epithelial cell,TEC),在肾小管间质炎症进程中起着重要作用。其中肾小管上皮细胞被激活后可产生大量的细胞因子、炎症介质及其它致纤维化因子。离体人的肾小管上皮细胞可产生细胞因子如白介素-6(interleukin-6,IL-6) 、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α),趋化因子如白介素-8(interleukin-8,IL-8) 及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1) ,粘附分子如细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1) 和血管间粘附分子(vascular cell adhesionmolecule-1,VCAM-1) 。各种肾小球肾炎和小管间质性肾炎中残余的肾脏固有细胞和浸润的炎细胞有高水平的炎症因子及趋化蛋白表达,而且这些因子已被证实是导致慢性肾衰竭加重因素。目前,肾间质纤维化的防治正日益受到重视。如粘附分子等防治RIF还处于实验阶段,尚未应用于临床。临床治疗RIF的措施主要是控制加剧肾功能恶化的危险因素,如高血压、高血脂、高血糖、高蛋白摄入及代谢性酸中毒等。相对于西药缺乏特异性防治RIF治疗,而中医药防治肾纤维化临床效果较好、毒副作用较低,前景广阔。复方鳖甲软肝方由鳖甲、赤芍、冬虫夏草、三七、紫河车、连翘、当归、莪术、党参、黄芪、板蓝根等11味中药组成,具有活血化瘀、软坚散结、益气养阴、清热解毒之功效。该方是治疗肝纤维化的国家三类中药新药,根据“异病同治”理论,为了探讨该方对肾纤维化的治疗作用,我们以单侧输尿管结扎诱导的肾间质纤维化复方鳌甲软肝方防治肾间质纤维化作用机理的实验研究大鼠模型,从整体动物水平研究该方的作用机理;从离体培养细胞水平阐明该方的分子机理,以期为临床防治肾纤维化提供科学的实验依据。主要研究内容概括如下:1复方鳌甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化药效学实验研究 105只wistar大鼠,雄性,体重200土209,适应性喂养一周后,行左侧单侧输尿管结扎术,分为正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组15只。造模后,复方鳌甲软肝方高、中、低剂量组、苯那普利组分别灌服复方鳖甲软肝方混悬液及苯那普利溶液,正常组、假手术组、模型组分别灌服等体积的生理盐水。第27天时,将大鼠置于代谢笼收集尿液,测定尿NAG酶和pZ微球蛋白,第28天时,取颈总动脉血,分离血清,测定其中BUN及Cer的含量,并摘取左肾观察病理形态学变化。结果应用复方鳌甲软

关键词：单侧输尿管结扎复方鳖甲软肝方核因子кB(NF-кB) 核因子кB抑制剂(IкB) 肾间质纤维化肾小管上皮细胞

复方鳖甲软肝方防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭实验研究

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复方鳖甲软肝方防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭实验研究

作者：魏晨北京中医药大学

学位级别：硕士

本研究采用单侧肾切除后服用腺嘌呤导致的慢性肾衰竭大鼠模型,通过观察复方鳖甲软肝方对于肾衰竭大鼠的症状、体重、肾重与体重之比、尿量、尿Ca和尿P,血Scr、BUN、血Ca+)和血P以及病理组织学检查,研究该方对慢性肾衰竭的防治作用。 ... 详细信息

本研究采用单侧肾切除后服用腺嘌呤导致的慢性肾衰竭大鼠模型,通过观察复方鳖甲软肝方对于肾衰竭大鼠的症状、体重、肾重与体重之比、尿量、尿Ca和尿P,血Scr、BUN、血Ca+)和血P以及病理组织学检查,研究该方对慢性肾衰竭的防治作用。 1.目的观察复方鳖甲软肝方对单侧肾切除后腺嘌呤性慢性肾衰竭大鼠的防治作用。 2.方法 Wister雄性大白鼠,体重200±20g,健康,Wister雄性大鼠,100只,先随机分为、三组,正常组10只、假手术组15只、手术组共75只。适应性喂养1周后,手术组大鼠再随机分为5组:模型组,尿毒清组,复方鳖甲软肝方小、中、大剂量组。模型组、治疗组每天上午250mg/Kg体重腺嘌呤水溶液灌胃,下午用相应组别及浓度的药物灌胃,正常组、假手术组和模型组每天用等体积的饮用水灌胃,药物治疗的时间为4周。动物灌胃前、灌胃第二周后、第四周后分别称量动物的体重,灌胃第二周时、第四周时分别留取每组10只大鼠的24小时尿量,灌胃第四周后留取动物的血样离心后测定Scr、BUN、Ca和P、留取肾组织。测定灌胃第二周时、第四周时分别留取每组动物10只大鼠的24小时尿量,测定尿中的Ca和P。 4.结果从治疗组对大白鼠体重、24小时尿量、尿Ca和P、肾重与体重比值、血Scr、BUN、血Ca和P的影响以及病理结果看,复方鳖甲软肝方改善了慢肾衰大鼠的症状。 5.结论复方鳖甲软肝方对单侧肾切除后腺嘌呤性慢性衰竭的具有一定的防治作用。

关键词：大鼠复方鳖甲软肝方慢性肾衰竭腺嘌呤

复方鳖甲软肝方调节细胞外基质降解平衡防治肾间质纤维化的实验研究

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复方鳖甲软肝方调节细胞外基质降解平衡防治肾间质纤维化的实验研...

作者：李相辉北京中医药大学

学位级别：硕士

肾小管间质纤维化几乎是所有肾脏疾病进展到终末期慢性肾衰竭(end-stage renal disease，ESRD)的共同途径，因此，肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)的程度预示着肾功能受损的程度，决定慢性肾脏病患者的预后，从而对其... 详细信息

肾小管间质纤维化几乎是所有肾脏疾病进展到终末期慢性肾衰竭(end-stage renal disease，ESRD)的共同途径，因此，肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)的程度预示着肾功能受损的程度，决定慢性肾脏病患者的预后，从而对其发生、发展的机制及其防治越来越受到国内外学者的关注。肾小管间质纤维化的特点为细胞外基质(extracellular matrix，ECM)过度积聚和间质细胞的增殖，进而导致肾小管和小管周围毛细血管的萎缩、消失及功能性进行性降低，肾小球滤过率的持续性下降，最终导致肾衰竭。肾间质纤维化的形成是一个缓慢的动态过程，涉及细胞、细胞因子、细胞外基质等因素之间复杂的相互作用，最后以大量细胞外基质在肾间质内沉积为结局。过去对肾纤维化发病过程中细胞外基质合成增加研究较多，但尚不能阐明细胞外基质积聚的全部病理过程和纤维化的发生机制，近年来又把研究转向细胞外基质的降解方面。细胞外基质主要由蛋白降解酶降解，其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)为最重要的一种。 MMPs是一组结构及功能同源的Zn依赖型肽链内切酶的总称，其功能主要是对基质金属蛋白酶的降解作用，基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors to metalloproteinases，TIMPs)是其内源性的一组特异性抑制因子。其中MMP-9/TIMP-1是肾间质纤维化发病中较为重要的一对。MMP-9为一种明胶酶，主要降解变性胶原、基膜的主要成分Ⅳ型胶原和Ⅴ型胶原。MMP-9活性在基因转录水平受许多因子的调节，如白细胞介素1(interleukinl，ILl)-α、β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、一氧化氮(nitrogen monoxidum，NO)等可上调其表达，转化生长因子-β(transforming growth factor，TGF-β)、γ-干扰素(interferon-γ，γ-IFN)、视黄酸(retinoic acid，RA)、糖皮质激素(glucocorticoid，GC)则使其表达下调。在MMP基因启动子上存在转录因子结合位点，这些因子与特异性结合位点结合后诱导或下调MMPs的表达。许多调节MMPs基因表达的生长因子和细胞因子同样调节TIMPs的表达。MMPs均以酶原的形式分泌，在纤溶酶系统等激活后发挥生物效能，激活主要通过

关键词：肾间质纤维化复方鳖甲软肝方基质金属蛋白酶-9 单侧输尿管结扎基质金属蛋白酶抑制因子-1 肾小管上皮细胞上皮间质转化