检索结果-南通市图书馆

青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白表达及纯化条件的优化

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中国生物制品学杂志 2024年第6期37卷 751-755,762页

作者：王雪薇陈开廷马静刘岳青高金亮王翠峰内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014040 内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院检验科内蒙古包头014040 鄂尔多斯市中心医院分子医学实验室内蒙古鄂尔多斯017000

目的对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化。方法将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[E.coil BL21(DE3)、E.coil Rosetta(DE3)、E.coil ArcticExpress(DE3)... 详细信息

目的对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化。方法将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[E.coil BL21(DE3)、E.coil Rosetta(DE3)、E.coil ArcticExpress(DE3)pRARE2],确定最适表达菌株后,对IPTG终浓度(0、0.5、1.0 mmol/L)、诱导温度(20、25℃)及诱导时间(0、2、4、6、8 h)进行优化。最佳诱导条件表达的菌体经高压均质破碎后,采用非变性(变性-复性-过柱)及变性(变性-过柱-复性)两种方式进行Ni-NTA亲和层析纯化。表达及纯化产物均经12%SDS-PAGE分析。结果重组Hq001蛋白最适表达菌株为感受态E.coil BL21(DE3);最适诱导条件为:IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间4 h。非变性纯化方式可获得相对分子质量约为18800的目的蛋白,大小与预期相符。结论采用优化的表达条件及纯化方式可获得青海血蜱唾液腺重组rHq001蛋白。

关键词：青海血蜱包涵体变性复性纯化 Ni-NTA亲和层析

赖氨酰内切酶在大肠杆菌中的重组表达、复性及纯化

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华东理工大学学报（自然科学版） 2023年第5期49卷 702-711页

作者：朱奕徐名强任燕娜蔡孟浩华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

首先在产酶溶杆菌来源的赖氨酰内切酶(Lys-C)成熟肽序列的N端和C端分别融合人工前肽(MGSK)和6×His标签,将密码子优化后的序列插入表达载体pET-28a;其次以IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导型启动子PT7控制Lys-C的高效表达,并针对重组菌株JM... 详细信息

首先在产酶溶杆菌来源的赖氨酰内切酶(Lys-C)成熟肽序列的N端和C端分别融合人工前肽(MGSK)和6×His标签,将密码子优化后的序列插入表达载体pET-28a;其次以IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导型启动子PT7控制Lys-C的高效表达,并针对重组菌株JM109DE3_PT7-LysC开展生物反应器高密度发酵生产Lys-C;再次收集和溶解包涵体得到Lys-C变性液,通过Sephadex G25层析脱除DTT(二硫苏糖醇),并在Lys-C复性液中添加前导肽(pre-N-pro)辅助成熟肽蛋白折叠;进一步通过切向流过滤、Ni NTA-Sepharose亲和层析和Sephacryl S-100层析等一系列纯化步骤,获得高纯度的重组Lys-C;最后进行酶切三肽底物和门冬胰岛素前体检测,分析重组Lys-C的活性水平。结果表明:重组Lys-C的发酵产量为2.4 g/L,经复性和纯化后的终产量可达48 mg/L;添加80 mg/L pre-N-pro促进了重组Lys-C的复性,复性后酶活相比于未添加pre-N-pro时提升了4.8倍,最高可达到13.8 U/L;经过多步纯化后,重组Lys-C的比酶活为10.2 U/mg,且对于门冬胰岛素前体的酶切转化率可达93.5%。

关键词：赖氨酰内切酶重组表达复性纯化活性

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复性思想与高攀龙的文学创作观

西北师大学报（社会科学版） 2023年第1期60卷 86-92页

作者：渠嵩烽上海大学文学院上海200444

高攀龙的性理学说和文学思想有着精微繁复的联动关系。复性是高氏的学术追求,也是其文学创作观念展开的内在理路。高攀龙认同作诗是排遣不平之情的主要方式,但他同时认为诗歌的遣情功能十分有限,且使作品有为情识所累的危险,“摄情归性... 详细信息

高攀龙的性理学说和文学思想有着精微繁复的联动关系。复性是高氏的学术追求,也是其文学创作观念展开的内在理路。高攀龙认同作诗是排遣不平之情的主要方式,但他同时认为诗歌的遣情功能十分有限,且使作品有为情识所累的危险,“摄情归性”是诗歌摆脱上述困境的必然途径和学理依据;无意而工指“自然不待用力而能”,它既是文学发生的原理,又是文学创作的方法,这源于性的“天然本色”和体认工夫;穷而后工指“善承困而善言文”,“患难透性”诠释了这一文学观念的丰富内涵。高氏文学创作观与复性思想在理论形式上高度融洽,但他的文学实践却与之既有统一又有背离之处。

关键词：高攀龙理学复性文学创作观

scFv-DEC205-Trap重组包涵体靶向抗原复性及过程的优化

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中国免疫学杂志 2022年第15期38卷 1866-1871页

作者：佟春玉张喆林王森郑小会韩玉芳崔玉东宋博翠黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院大庆163000

目的:疫苗防治将成为金黄色葡萄球菌防控的主要方式,如何解决靶向亚单位疫苗生产中包涵体靶向抗原的复性问题,将是蛋白亚单位疫苗生产的核心问题。方法:构建靶向树突状细胞DEC205受体的金黄色葡萄球菌重组scFv-DEC205-Trap质粒进行PCR... 详细信息

目的:疫苗防治将成为金黄色葡萄球菌防控的主要方式,如何解决靶向亚单位疫苗生产中包涵体靶向抗原的复性问题,将是蛋白亚单位疫苗生产的核心问题。方法:构建靶向树突状细胞DEC205受体的金黄色葡萄球菌重组scFv-DEC205-Trap质粒进行PCR、测序鉴定,IPTG诱导表达。对表达后形成的包涵体各项溶解条件:溶液、溶解温度、溶解时间以及是否振荡进行单因素优化;对复性缓冲液的不同添加剂和稀释浓度进行条件优化,最大限度提高包涵体蛋白复性率,Western blot检测复性蛋白抗原性。结果:离心力大于400 g,离心3 min以上,96%的包涵体蛋白沉降;含8 mol/L的尿素溶液在4~40℃溶解0.5 h以上可使包涵体蛋白充分溶解;3 mol/L精氨酸的100 mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释5倍复性率最高,抗原性好。结论:实验证明通过适宜的溶解条件和复性条件可以从表达包涵体中获得良好抗原性的重组靶向抗原。

关键词：金黄色葡萄球菌TRAP scFv-DEC205-Trap重组抗原变性复性

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蛋白质复性技术研究进展

药物生物技术 2022年第2期29卷 201-208页

作者：邹一飞高向东林福玉刘金毅中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 北京三元基因工程有限公司北京102600

在实验室和工业领域中,快速而廉价地制备目的蛋白的方法对于促进蛋白质科学和工程的研究至关重要。使用基于包涵体的蛋白质表达系统是一种经典的方法,在上游过程中可以获得高产量,但是在下游过程中未正确折叠的蛋白质复性过程通常会导... 详细信息

在实验室和工业领域中,快速而廉价地制备目的蛋白的方法对于促进蛋白质科学和工程的研究至关重要。使用基于包涵体的蛋白质表达系统是一种经典的方法,在上游过程中可以获得高产量,但是在下游过程中未正确折叠的蛋白质复性过程通常会导致产量显著降低。最具挑战性的是,蛋白质的复性条件因构象不同各有差异,需要个体化的针对性研究进行反复试验来提高蛋白质终产量。因此,为了将这种麻烦的折叠过程转变为常规的折叠过程,基于新技术和新材料的各种方法应运而生。文章首先简略地概述蛋白质折叠,总结包涵体变性的不同方式,重点对在复性过程中的三种思路进行了综述,并就蛋白质复性方面已报道的热点描述了方法发展背后的概念,以期提供一种通用的复性研究思路。

关键词：蛋白质折叠蛋白质聚集包涵体变性复性

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《庄子》“复性”政治哲学研究

《庄子》“复性”政治哲学研究

作者：张旭东北师范大学

学位级别：硕士

所谓政治哲学之本身皆围绕“人”所展开,其基本方式在于对“何为好的政治”之追问与反思。与儒墨法积极有为的态度不同的是,《庄子》以“任性无为”之方式表达出对于政治之特有认识与批判,其背后正蕴含着对于“应有之政”的构想与期望... 详细信息

所谓政治哲学之本身皆围绕“人”所展开,其基本方式在于对“何为好的政治”之追问与反思。与儒墨法积极有为的态度不同的是,《庄子》以“任性无为”之方式表达出对于政治之特有认识与批判,其背后正蕴含着对于“应有之政”的构想与期望。本文试从“复性”的视角来考察和阐述《庄子》政治哲学,即对“人在政治生活的归属”问题进行思考,以期对《庄子》政治哲学研究有所助益。本文主要分为五个部分:第一部分对“复性”之出处进行分析,“反其性情而复其初”为“复性”之直接思想来源,而“复性”的政治则是以“民性”为本,以“人在政治生活中的归属”为导向提出的。第二部分是对“复性”政治哲学的理论内涵进行具体阐释,即“复性”以人性之“真”为内在依据,以“复”为基本方向,以“复朴”与“反其真”为重要内容,以复归于“道”为最终归宿,构成了完整的“复性”系统。第三部分是对阻碍“复性”之因素展开追问,从情欲与巧智失性于俗,仁义与礼乐削性侵德,“正人”之政残生害性三个层面,以此证明人逐步丧失性之本真,成为君主统治下的工具与筹码。第四部分是对“复性”政治哲学的实践理路进行探寻,通过构建自然的政治秩序,施行“无为”而“有为”的政治方针,调和群己关系,实现群己之养,以期政治之发展能够以百姓意志为依归,安民之性,启民之性。第五部分是对“复性”政治哲学之理想境界进行研究,通过“复性”,方可实现逍遥与自由的个人之境,素朴与平等的社会之境,至乐与至美的天地之境,从而打通人道与天道之间的界限,实现天人互通。《庄子》“复性”政治哲学致力于为“人在政治生活的归属”找寻出路,这种归属既是政治之归属、人性之归属、又是形心之归属。以“复性”为突破口对《庄子》政治哲学进行研究,一方面可以深化对于《庄子》整体思想的理解并开启新的探索路径,另一方面更有利于道家传统政治哲学的丰富与发展。

关键词：《庄子》复性政治哲学

猪囊尾蚴CE18重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定

同方学位论文库评论

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生物工程学报 2008年第8期24卷 1490-1495页

作者：张少华贾万忠骆学农景志忠吴国华郑亚东郭爱疆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎菌体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后,利用透析与凝胶过滤层析技术... 详细信息

猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎菌体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后,利用透析与凝胶过滤层析技术相结合对rCE18进行复性和纯化。同时,采用GST-FF亲和柱层析及SDS-PAGE胶回收蛋白两种方法纯化rCE18,比较三者的纯化效果。并通过间接ELISA检测复性蛋白的生物学活性。结果表明:经透析与凝胶层析复性纯化后的rCE18蛋白的纯度可达到60%以上,活性回收率为41.3%,间接ELISA证实,复性后的rCE18蛋白能特异性识别猪囊虫阳性血清,检测敏感性高达97.2%,与全囊虫抗原检测的符合率为100%。本试验初步建立了猪囊尾蚴rCE18包涵体纯化及复性的有效方法,为猪囊尾蚴rCE18蛋白的诊断应用奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴 CE18重组蛋白复性纯化透析凝胶过滤层析

高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质

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色谱 2010年第6期28卷 535-540页

作者：贾佳王骊丽高栋耿信笃合成及天然功能性分子化学教育部重点实验室西北大学现代分离科学研究所陕西省分离科学重点实验室陕西西安710069

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体... 详细信息

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。

关键词：高效疏水相互作用色谱法复性纯化重组人Flt3配体包涵体

HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用

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生物工程学报 2010年第2期26卷 201-206页

作者：侯爵孙静徐智勇范文玲张怡轩刘勇郝彦玲沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病防治国家重点实验室北京100050

为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。

关键词： HIV-1CN54 逆转录酶P51 纯化复性抗体检测