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德国小蠊变应原Bla g 2蛋白变复性的荧光光谱研究

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光谱学与光谱分析 2006年第12期26卷 2254-2257页

作者：朱健琦刘志刚黄海珍朱永烽徐宏深圳大学生命科学学院广东深圳518060 中国科学院应用化学研究所电分析化学国家重点实验室吉林长春130022

包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2... 详细信息

包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2在不同pH下的荧光光谱分析,推断出Bla g 2蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。

关键词：德国小蠊变应原 Bla g 2 变性复性荧光光谱

利用温敏性凝胶的缓释作用促进变性溶菌酶复性

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天津大学学报 2006年第10期39卷 1193-1198页

作者：董晓燕付敏玲陆晨星张萌天津大学化工学院天津300072

为了开发温敏凝胶在蛋白质复性方面的方法,利用N-异丙基丙烯酰胺温敏凝胶具有的缓释作用,对变性蛋白质进行了复性.考察不同合成条件下凝胶的性能,结果表明,在制胶温度为22℃、凝胶单体浓度为1000/、交联度为500/制得的凝胶,具有较好的... 详细信息

为了开发温敏凝胶在蛋白质复性方面的方法,利用N-异丙基丙烯酰胺温敏凝胶具有的缓释作用,对变性蛋白质进行了复性.考察不同合成条件下凝胶的性能,结果表明,在制胶温度为22℃、凝胶单体浓度为1000/、交联度为500/制得的凝胶,具有较好的机械强度、较大的溶胀倍率、缩水倍率及良好的温敏性能.凝胶的缓释作用对变性还原溶菌酶辅助复性的影响表明,在复性酶终浓度为0.5 mg/mL时,凝胶辅助蛋白质的复性收率可达6800/,比直接稀释复性(收率为5700/)高1900/.特别是对高浓度蛋白质的复性(1.5 mg/mL),凝胶辅助复性也获得了很好的效果,复性收率高出直接稀释复性3700/,表现出温敏凝胶在实际蛋白质复性中的应用前景.

关键词： N-异丙基丙烯酰胺温敏凝胶溶菌酶复性缓释作用

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脲梯度扩张床吸附层析复性重组人γ-干扰素

浙江大学学报（工学版） 2006年第7期40卷 1257-1261页

作者：靳挺关怡新林东强姚善泾浙江大学化学工程与生物工程学系

针对固定床吸附层析技术用于蛋白质体外重折叠复性时,折叠聚集中间体易聚集造成床层堵塞等问题,将扩张床吸附层析技术应用于重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性研究,并与脲浓度线性梯度法相结合,考察了脲梯度长度和脲终浓度对重组人γ-... 详细信息

针对固定床吸附层析技术用于蛋白质体外重折叠复性时,折叠聚集中间体易聚集造成床层堵塞等问题,将扩张床吸附层析技术应用于重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性研究,并与脲浓度线性梯度法相结合,考察了脲梯度长度和脲终浓度对重组人γ-干扰素复性的影响.复性后的重组人γ-干扰素的纯度达90%;较长的脲梯度长度和合适的脲终浓度有利于蛋白质的复性;在较优的实验条件下,复性后的重组人γ-干扰素收率为53.7%,比活达9.75×106IU/mg.脲梯度扩张床吸附层析法具有处理量大的优点,能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,并能实现复性和分离包涵体蛋白质过程的集成化.

关键词：重组人γ-干扰素包涵体复性脲梯度扩张床吸附层析

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酰胺类物质辅助变性碳酸脱水酶复性及动力学

化工学报 2005年第8期56卷 1541-1546页

作者：陆晨星肖庆敏董晓燕天津大学化工学院生物化工系天津300072

研究了酰胺类物质对促进变性牛碳酸脱水酶(CAB)的复性作用,考察了在较低盐酸胍浓度下添加剂浓度对复性收率的影响,并利用三级反应动力学方程对酰胺类化合物辅助CAB复性的动力学过程进行了深入分析.结果表明,含有酰胺基团的多种添加剂均... 详细信息

研究了酰胺类物质对促进变性牛碳酸脱水酶(CAB)的复性作用,考察了在较低盐酸胍浓度下添加剂浓度对复性收率的影响,并利用三级反应动力学方程对酰胺类化合物辅助CAB复性的动力学过程进行了深入分析.结果表明,含有酰胺基团的多种添加剂均能有效促进CAB复性;酰胺化合物与盐酸胍的作用相似,即复性速率常数kN值均大于无添加剂时的自发复性,且随添加剂浓度增加而降低;但聚集体生成速率常数kA值则在最佳添加剂浓度下出现最小值,从而使kN/kA值最大,复性收率最大.

关键词：牛碳酸脱水酶复性添加剂盐酸胍

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重组人睫状神经营养因子的复性研究

生物化学与生物物理进展 1999年第5期26卷 454-457页

作者：咸海青范明吴燕邱宗荫军事医学科学院基础医学研究所北京100850

利用凝胶层析对人睫状神经营养因子原核基因工程产品进行复性研究，发现此方法的复性率高于稀释透析法．而且在复性的同时也进行了一步纯化工作．该方法简单、迅速、高效、重复性好，可用于规模生产．

关键词：重组人睫状神经营养因子复性包涵体

化学渗透法破碎基因重组***提取重组人SOD包含体和复性

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高校化学工程学报 2011年第1期25卷 96-102页

作者：刘建荣王慧赵晓瑜静天玉河北大学生物技术研究中心河北保定071002 河北省生物工程技术研究中心河北保定071002 北京师范大学生命科学学院北京100875

以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol... 详细信息

以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol·L-1 EDTA可以较好地破碎重组大肠杆菌细胞,所提取的包含体溶解液纯度与超声法相近,可达65%左右。采用透析法复性包含体,尿素终浓度0.1 mol·L-1时rhSOD包含体复性效果优于1.0 mol·L-1,比活分别为:Triton法2800 U·mg-1,EDTA法3200 U·mg-1,超声法2800 U·mg-1,复性rhSOD纯度达85%左右。本研究建立的用于破碎重组大肠杆菌释放rhSOD包含体的Triton法和EDTA法,包含体复性后比活等于或高于超声法,与机械破菌法相比,简便有效,成本低廉,无需特殊破菌设备,为放大规模破菌提取重组大肠杆菌包含体和复性奠定了实验基础。

关键词：重组人超氧化物歧化酶化学渗透细胞破碎包含体复性

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重组蛇毒纤溶酶Fibrolase的复性

过程工程学报 2007年第4期7卷 761-766页

作者：张守涛史婧郭蔼光西北农林科技大学农业分子生物学陕西省重点实验室

将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性效率,同时研究了温度、pH值、初始蛋白浓度、复性液中盐... 详细信息

将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性效率,同时研究了温度、pH值、初始蛋白浓度、复性液中盐酸胍浓度和氧化/还原环境等对复性的影响,得到了较为适宜的复性条件.结果表明,采用流加稀释复性,并在4℃,pH8.5,1.5mol/L盐酸胍,1mmo1/LGSSG,2mmo1/LGSH,初始蛋白浓度10mg/mL及稀释体积为50倍时,复性效率最高.重组Fibrolase蛋白在复性和纯化后的收率可达25%左右.

关键词： Fibrolase 大肠杆菌表达复性

流加操作与稀释添加耦合辅助高浓度变性蛋白质复性动力学

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化工学报 2004年第8期55卷 1313-1318页

作者：史广泉李琳董晓燕孙彦天津大学化工学院生物化工系天津300072

研究了流加操作与稀释添加耦合辅助高浓度变性还原溶菌酶的复性 ,建立了相关的过程动力学模型 .利用三态复性的过程模型对实验数据进行了拟合 ,获得了较好的拟合效果 .利用模型分析了复性过程的动力学特性 ,结果表明 ,两者耦合可在较低... 详细信息

研究了流加操作与稀释添加耦合辅助高浓度变性还原溶菌酶的复性 ,建立了相关的过程动力学模型 .利用三态复性的过程模型对实验数据进行了拟合 ,获得了较好的拟合效果 .利用模型分析了复性过程的动力学特性 ,结果表明 ,两者耦合可在较低的盐酸胍浓度 (1mol·L-1)存在下使较高浓度的 (5mg·ml-1)变性溶菌酶获得 80 %以上的复性收率 ;并且发现添加剂乙酰胺的辅助复性作用与盐酸胍相同 ,降低盐酸胍浓度 ,适当提高乙酰胺浓度即可使聚集体生成速率常数最小 ,酶的复性收率最大 ;但甘油与盐酸胍具有协同作用。

关键词：复性流加操作添加剂乙酰胺甘油盐酸胍溶菌酶

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蛋白质在层析过程中的失活与复性

化工学报 2004年第7期55卷 1033-1040页

作者：李明 Jan-Christer Janson 苏志国中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100080 Uppsala大学表面生物技术系

在层析分离过程中 ,层析的固相介质和溶液环境会引起蛋白质的结构变化 :天然的蛋白质可能会降低活性甚至完全失去活性 ,而结构变化了的蛋白质也可能重新折叠恢复活性 .此类现象已经引起研究者特别是生化工程学家的关注 ,层析介质的种类... 详细信息

在层析分离过程中 ,层析的固相介质和溶液环境会引起蛋白质的结构变化 :天然的蛋白质可能会降低活性甚至完全失去活性 ,而结构变化了的蛋白质也可能重新折叠恢复活性 .此类现象已经引起研究者特别是生化工程学家的关注 ,层析介质的种类和操作手段是影响此两个过程的关键因素 .利用不同的层析方法 ,对不同的蛋白质采取相应的措施有利于提高活性蛋白质的回收率 ,具有重要的理论和应用价值 .

关键词：层析蛋白质变性复性