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复合材料学报 2011年第5期28卷 20-26页

作者：王明波冯庆玲清华大学材料科学与工程系先进材料教育部重点实验室北京100084 深圳清华大学研究院深圳市生物医用材料及植入器械重点实验室深圳518057

采用两次乳化包埋技术制备了一种载蛋白的乳酸-乙醇酸共聚物/壳聚糖复式微球（Poly（lactide-co-glycolide）/chitosan微球,简称PLGA/chitosan微球）。先以复乳法（W/O/W）制备加载牛血清白蛋白（BSA）的PLGA微球,再以壳聚糖（Chitosan... 详细信息

采用两次乳化包埋技术制备了一种载蛋白的乳酸-乙醇酸共聚物/壳聚糖复式微球（Poly（lactide-co-glycolide）/chitosan微球,简称PLGA/chitosan微球）。先以复乳法（W/O/W）制备加载牛血清白蛋白（BSA）的PLGA微球,再以壳聚糖（Chitosan）为基体对PLGA微球进行包埋,用三聚磷酸钠（TPP）进行交联。制备中,改变内部PLGA基体的分子量制备了3种PLGA/chitosan微球以达到不同的释放动力学。采用扫描电镜（SEM）、激光粒度分析仪、傅里叶变换红外光谱法（FTIR）分别对PLGA/chitosan微球的形貌、平均粒径及表面物理化学特征进行了表征。进行了复式微球在体外的蛋白释放实验,同时检测了体外降解过程中环境pH值的变化。结果表明,PLGA/chitosan微球具有球中包埋球的复式结构。复式微球的载药率为6%~8%,微球平均粒径为40~60μm。该微球早期蛋白的突释较PLGA微球显著减少,释放周期大于75天。此外,PLGA/chitosan微球降解过程中,能维持孵育液的pH值在7~8之间,为人体可接受范围,是一种优异的蛋白缓释微球。

关键词：乳酸-乙醇酸共聚物壳聚糖复式微球释放曲线降解

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载盐酸万古霉素PLGA/CS复式微球的研制及体外释放研究

载盐酸万古霉素PLGA/CS复式微球的研制及体外释放研究

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作者：朱磊宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的随着社会的日益更新,高空坠落伤、交通事故、暴力导致开放性骨折的增多,手术操作的不规范导致术后感染是引起的感染性骨缺损或慢性骨髓炎的主要因素。感染性骨缺损是目前骨科临床常见的最为棘手的问题之一。主要面临两大难题:一是... 详细信息

目的随着社会的日益更新,高空坠落伤、交通事故、暴力导致开放性骨折的增多,手术操作的不规范导致术后感染是引起的感染性骨缺损或慢性骨髓炎的主要因素。感染性骨缺损是目前骨科临床常见的最为棘手的问题之一。主要面临两大难题:一是骨感染的控制;二是骨缺损的填充。骨缺损的修复主要有自体骨、异体骨人工骨均能达到有效的修复;骨感染因素是其主要难点,现在临床上主要局部注射抗生素来抗感染治疗,抗生素局部缓释治疗骨感染具有浓度高、全身毒性小等优点,被认为是治疗骨感染的有效方法。我们选用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染敏感的临床一线抗生素盐酸万古霉素作为包埋药物,使用可降解的高分子生物聚合材料聚乳酸一聚轻基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料与天然高分子材料壳聚糖(CS)为被膜,通过复乳溶剂蒸发法制备出载盐酸万古霉素PLGA/CS缓释微球。这种具有良好的生物相容性、可降解且长效释放抗生素控制并治愈的感染性材料。方法复乳溶剂蒸发法制备抗感染载盐酸万古霉素复式缓释微球,通过考察PLGA/VA/CS复式微球多种影响因素,并对其表征及理化性质进行评价,筛选出影响微球制备较大的因素,应用正交实验筛选出最佳制备工艺。并以扫描电镜、激光粒度仪、紫外分光光度仪、高效液相色谱法等检测手段对其形态粒径、载药量、包封率及恒温条件下体外释放度等指标进行测定,以纸片扩散、法直接悬液法来测定复式微球的药物活性与抑菌效果。结果通过扫描电镜、激光粒度仪、紫外分光光度仪、高效液相色谱法等检测手段对其形态粒径、载药量、包封率及恒温条件下体外释放度等指标进行测定结果,制备的复式微球球形完整,球体光滑,粒径分布符合正态分布,微球的粒径为252.3±5.3nm之间,平均载药量在(3.12±0.78)%。平均包埋率(33.57±2.17)%。在恒温37°条件下PLGA/VA/CS复式微球缓释时间高达3个月,以纸片扩散、法直接悬液法来测定复式微球的药物活性与抑菌效果,在复式微球中VA的与VA标准品活性基本一致,其有效抑菌时间高达2个月以上。结论综合考察该处方工艺制备的载药微球,通过复式微球的表征,粒径,体外释放,抑菌效果达到预期的目标:1.成功建立了紫外分光光度法测定盐酸万古霉素含量的方法。2.考察了盐酸万古霉素缓释复式微球制备中的影响因素。3.优化了盐酸万古霉素缓释复式微球的处方工艺。4.优化处方工艺制备的盐酸万古霉素缓释复式微球,具有突释小,缓释时间长,有较好的重复性及稳定性。5.考察了PLGA/VA/CS缓释复式微球制备过程中,影响药物体外释放情况的主要因素。6.考察了以优化处方工艺制备的PLGA/VA/CS缓释复式微球制备的体外释放效果及VA标准品药物活性及体外抑菌实验。

关键词：感染性骨缺损盐酸万古霉素 PLGA 壳聚糖复式微球

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自体微小颗粒骨载万古霉素复式微球复合治疗感染性骨缺损的实验研究

自体微小颗粒骨载万古霉素复式微球复合治疗感染性骨缺损的实验研...

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作者：王志斌宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的感染性骨缺损是指骨缺损的同时伴有感染而导致骨不愈合,是骨科临床工作中遇到的较为棘手的问题之一。感染性骨缺损通常由两种情况造成:一是由高能量损伤导致严重的开放性骨折、不彻底的清创、早期不恰当的内固定等因素继发骨髓炎,... 详细信息

目的感染性骨缺损是指骨缺损的同时伴有感染而导致骨不愈合,是骨科临床工作中遇到的较为棘手的问题之一。感染性骨缺损通常由两种情况造成:一是由高能量损伤导致严重的开放性骨折、不彻底的清创、早期不恰当的内固定等因素继发骨髓炎,导致肢体感染性骨缺损;二是外伤或慢性疾病导致的肢体软组织缺损感染,引起骨质破坏,骨质吸收或死骨排出形成慢性骨髓炎进而导致肢体感染性骨缺损。感染性骨缺损治疗的难点主要有:一是局部骨组织抗感染能力差、局部感染难以控制,使骨组织的修复受阻造成的;二是骨缺损处骨组织的填充修复。在临床治疗中发现引起感染性骨缺损的最常见病原体是革兰氏染色阳性的金黄色葡萄球菌,高达80%的病例中可分离到金黄色葡萄球菌。万古霉素是目前临床上治疗MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)感染疾病首选用药。临床上多采用静脉应用敏感抗生素4～6周来控制感染。由于其生物半衰期短、易耐药、需要大量反复使用,经静脉滴注造成肾毒性、耳毒性之外还有诸多的副作用,因此局部抗生素缓释系统的运用越来越受到人们的重视。本实验设计了一种新的抗菌素缓释系统(载万古霉素的PLGA/CS复式缓释微球),该复式载药微球可缓慢、持续的释放抗生素以提高病变部位的抗生素浓度达到有效控制感染的目的,并且该复式载药微球可降解、对人体无害,不影响骨细胞的活性。该复式微球前期进行的体外实验已获得较好的抗菌效果。本研究将在动物体内实验以检验载万古霉素复式微球结合自体微小颗粒骨支架的抗菌及对骨缺损的修复效果,探索一种感染性骨缺损治疗的新方法,为其临床应用提供实验依据。实验方法取48只健康新西兰大耳白兔,按沈霖造模法造成双侧桡骨中上段骨髓炎模型兔。4周后根据清创术的操作规范对骨髓炎局部进行规范彻底清创,咬除死骨并扩大咬除范围以便在桡骨中上段造成长度1.5cm的节段性骨缺损,将造模成功后的新西兰大耳白兔随机分为3组,每组16只。A组在骨缺损区植入自体微小颗粒骨进行治疗;B组在骨缺损区植入自体微小颗粒骨和万古霉素进行治疗;C组在骨缺损区植入自体微小颗粒骨和载万古霉素的PLGA/CS缓释微球微球进行治疗。分别测定术前1天、术后1天、术后3天、术后1周、术后2周、术后4周各时间点每只家兔CRP(血清C反应蛋白)和ESR(血沉),并于术后2周、术后4周、术后8周、术后12周各时间点每组随机处死4只家兔观察植骨区大体形态,影像学X线和组织学结果并进行评分。结果1.一般情况:术后各家兔分笼喂养,无一例死亡。术后1～2d所有兔精神、饮食稍差,活动少,无畏寒发热征象。手术伤口无红肿、渗液等。3d后精神好转,饮食正常,活动增加。2.大体形态观察:术后2周,A组1只家兔植骨部位出现窦道,流出脓性分泌物,A、B、C组中其余家兔骨缺损处均以肉芽组织桥接,骨折端间没有连接,大体上无明显差异,C组肉芽组织量略多;术后4周,A组骨缺损处被纤维组织覆盖,B、C组两骨折断端间为软骨痂所填充,类似软骨组织;术后8周,C组软骨痂已被明显的硬骨痂所取代,硬骨痂成红褐色,硬骨痂变致密,A、B组上述演变稍差,A组最差只有少部分软骨痂被硬骨痂取代;术后12周,各组缺损段基本愈合完毕,C组硬骨痂表面开始出现骨皮质样的光滑致密表面,剖面中心部位变疏松,有髓腔形成。3.血清C反应蛋白:术后第1周时CRP(血清C反应蛋白)检测值C组低于B组,差异有统计学意义(p0.05)。7.植骨区组织学观察及评分:Lane-Sandhu组织学评分示:术后2、4、8周C组组织学评分明显优于A、B组(P0.05)。结论1、治疗兔感染性骨缺损时与自体微小颗粒骨植入组相比,自体微小颗粒骨载万古霉素组和自体微小颗粒骨载万古霉素PLGA/CS复式微球组的抗感染能力更强。2、治疗兔感染性骨缺损时,局部应用万古霉素PLGA/CS复式微球的抗感染效果要优于应用万古霉素。3、治疗兔感染性骨缺损时,万古霉素PLGA/CS复式微球不影响成骨细胞的活性。4、自体微小颗粒骨载万古霉素PL

关键词：感染性骨缺损自体微小颗粒骨复式微球万古霉素

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自体微小颗粒骨载万古霉素复式微球治疗兔骨感染性骨缺损的实验研究

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宁夏医科大学学报 2017年第2期39卷 126-130,F0004页

作者：王志斌朱磊王明波冯庆玲杨海波胡宁敏宁夏医科大学银川750004 清华大学材料科学与工程系先进材料教育部重点实验室北京100084 宁夏医科大学总医院创伤骨科银川750004

目的检验兔自体微小颗粒骨载万古霉素PLGA/CS复式微球体内抗感染性及骨修复活性。方法按Mader J.T的骨髓炎造模方法造成双侧桡骨中上段骨髓炎模型兔48只;在植入实验前彻底清创,并造成双侧桡骨中上段1.5cm的骨缺损,将造模成功的兔随机分... 详细信息

目的检验兔自体微小颗粒骨载万古霉素PLGA/CS复式微球体内抗感染性及骨修复活性。方法按Mader J.T的骨髓炎造模方法造成双侧桡骨中上段骨髓炎模型兔48只;在植入实验前彻底清创,并造成双侧桡骨中上段1.5cm的骨缺损,将造模成功的兔随机分为3组,每组16只,A、B、C各组分别植入自体微小颗粒骨、自体微小颗粒骨与万古霉素、自体微小颗粒骨与载万古霉素复式微球后,在第2、4、8和12周四个时间点每组各取4只兔处死行延长区大体观察,X线正侧位片观察;同时在骨延长区取骨组织做组织学切片,HE染色观察新骨生成情况。结果影像学X线评分和组织学评分见,第2、4和8周时C组新骨形成均优于A、B组(P0.05),术后第12周组织学评分B、C组成骨优于A组(P0.05)。结论载万古霉素复式微球与自体微小颗粒骨混合对兔感染性骨缺损的修复具有比较显著的促进作用,可以加快骨缺损成骨过程的新骨生成。

关键词：感染性骨缺损万古霉素复式微球自体微小颗粒骨

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长效抗菌成骨双功能骨支架的制备与研究

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作者：王秦东大连医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过静电纺丝结合乳化交联法制备PLGA/CS复式微球,分别将BMP-2和Pac-525包载于复式微球中的PLGA微球和壳聚糖外壳中,并将双重载药的复式微球分散在矿化胶原/PCL支架中,对其缓释特性以及成骨和抑菌性能进行研究,为其在临床上... 详细信息

目的:本实验通过静电纺丝结合乳化交联法制备PLGA/CS复式微球,分别将BMP-2和Pac-525包载于复式微球中的PLGA微球和壳聚糖外壳中,并将双重载药的复式微球分散在矿化胶原/PCL支架中,对其缓释特性以及成骨和抑菌性能进行研究,为其在临床上骨缺损再生修复的应用提供技术支持。方法:1.载BMP-2 PLGA微球的制备将BMP-2溶液与PLGA溶液超声混匀,通过静电纺丝的方法制备载BMP-2的PLGA微球。2.双重载药PLGA/CS复式微球的制备将第一步制得的载BMP-2的PLGA微球分散在载Pac-525的壳聚糖溶液中,混合均匀,通过乳化交联法制备双重载药PLGA/CS复式微球。3.携载PLGA/CS复式微球的矿化胶原/PCL支架的制备将上一步制得的双重载药复式微球与矿化胶原/PCL混合均匀,通过冷冻干燥法制得携载复式微球的多孔支架材料。4.复式微球与支架材料的理化特性通过扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察微球和支架的形态,并测量微球的粒径分布和支架的孔径分布。通过万能力学测试机测量支架的抗压强度。通过紫外分光光度计和Elisa试剂盒对微球的药物包封率和缓释动力学进行检测。5.材料的生物相容性和成骨分化性能将BMSCs接种于支架材料表面,分别在1,3,5天使用CCK-8试剂盒检测细胞在材料表面的增殖效果。并在第三天使用扫描电子显微镜（SEM）和激光共聚焦显微镜观察细胞在支架表面的形态。将大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）接种于孔板中,成骨分化培养基与材料浸提液组成的混合液诱导分化14天,检测细胞碱性磷酸酶活性（ALP）。7.支架的抑菌性能通过观察支架10天,20天,30天的浸提液用牛津杯琼脂扩散法在金黄色葡萄球菌和大肠杆菌琼脂培养板上所形成的抑菌环的大小,来评估材料的抑菌性能。结果:1.复合支架的理化特性扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜显示,PLGA微球表面光滑,粒径分布均匀,大多集中在6-12um,包封率约为83.75±3.25%;复式微球表面成致密皱褶状,荧光染色和微球断面可见PLGA微球被包裹在壳聚糖外壳内,壳聚糖外壳包封率约为66.21±2.29%。支架成多孔结构,复式微球分散在其中,支架孔径约为97.68um,孔隙率约为72.75%,抗压强度约为0.422±0.019Mpa.2.复合支架的药物缓释动力学缓释实验显示,单纯复式微球的壳聚糖外壳在初期有一定的突释现象产生,而后释放速度趋于平缓。PLGA微球由于有壳聚糖外壳的存在,在很长一段时间以极低的速度释放,但随着壳聚糖外壳的裂解,又出现了较快速度的释放。同时,对比单纯微球组和载微球支架组的缓释动力学可知,支架的存在,在一定程度上减缓了微球释药的速率。3.复合支架的生物相容性及成骨活性扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料表面形态显示,细胞铺展良好,成梭形。CCK8结果显示细胞在支架表面增殖效果良好。成骨分化实验结果显示,载药组的碱性磷酸酶活性明显高于阴性对照组。4.复合支架的抑菌性能抑菌实验结果显示第10天的缓释液有较为明显的抑菌环产生,第20,30天的抑菌环直径虽然较第10天有所缩小,但较PBS组仍有抑菌环产生。结论:制备出的双重载药PLGA/CS/MC/PCL支架,体外实验结果初步证明其具有长效抗菌和成骨作用。

关键词： Pac-525 BMP-2 复式微球 PCL支架静电纺丝乳化交联

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载盐酸万古霉素PLGA/CS缓释微球的制备及研究

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内蒙古医学杂志 2015年第6期47卷 641-645,F0004页

作者：朱磊王志斌李飞李亮胡宁敏宁夏医科大学宁夏医科大学总医院创伤骨科宁夏银川750004

目的研制载万古霉素PLGA/CS缓释复式微球,考察微球的体外释放性能。方法应用复乳-固化挥发法制备载盐酸万古霉素PLGA/CS复式微球。利用扫描电镜(SEM)及激光粒度分析仪进行形貌观测,采用紫外分光光度法测定盐酸万古霉素含量,计算载药率... 详细信息

目的研制载万古霉素PLGA/CS缓释复式微球,考察微球的体外释放性能。方法应用复乳-固化挥发法制备载盐酸万古霉素PLGA/CS复式微球。利用扫描电镜(SEM)及激光粒度分析仪进行形貌观测,采用紫外分光光度法测定盐酸万古霉素含量,计算载药率和包埋率;评价载药微球的体外释放行为,测定药物在微球中的稳定性,通过体外药物释放实验考察复合微球化处理对盐酸万古霉素溶出度的影响,用抑菌实验检测盐酸万古霉素的抗菌能力。结果以聚乙烯醇为乳化剂制备载万古霉素PLGA/CS缓释复式微球,微球表面光滑、无孔隙,粒径在(252.3±5.3)μm,平均载药量在(3.12±0.78)%。平均包埋率(33.57±2.17)%,在盐酸万古霉素PLGA/CS缓释微球具有明显的药物释放作用,体外释放90 d的药物累计释放高达80%以上。结论载盐酸万古霉素PLGA/CS微球性质稳定,释放周期比较长,抑菌效果明显,符合理想的局部抗感染应用要求。

关键词：盐酸万古霉素 PLGA 壳聚糖复式微球体外释放

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