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海洋与湖沼 1999年第4期30卷 353-361页

作者：丁燏王雷李光友中国科学院海洋研究所青岛266071 国家海洋局第一海洋研究所青岛266003

于1996年11月-1997年5月，运用差异离心、蔗糖梯度离心、柱层析等方法从发病中国对虾分离出杆状病毒并纯化；分别用冷乙酸处理法、十二烷基硫酸钠-苯酚法提取纯化该病毒的结构蛋白与核酸、λDNA；分别用十二烷基硫酸钠煮沸法、三氯乙酸... 详细信息

于1996年11月-1997年5月，运用差异离心、蔗糖梯度离心、柱层析等方法从发病中国对虾分离出杆状病毒并纯化；分别用冷乙酸处理法、十二烷基硫酸钠-苯酚法提取纯化该病毒的结构蛋白与核酸、λDNA；分别用十二烷基硫酸钠煮沸法、三氯乙酸法纯化弧菌的肽葡聚糖和鸡卵粘蛋白；配制出小牛血清白蛋白、蜗牛凝集素两溶液。然后从超氧化物歧化酶（SOD）活力和溶菌活力两种免疫指标分析灭活病毒和以上提取、纯化的7种大分子物质对中国对虾的免疫效果，根据其结果筛选几种物质制成复合疫苗，测定复合疫苗对对虾的免疫作用。结果表明，病毒免疫后的SOD活力、溶菌活力均有提高。7种大分子物质免疫后，除小牛血清白蛋白外，其余6种物质的两种酶活性均有提高。以6种物质组成的复合疫苗免疫实验表明，两种酶活力提高明显（SOD活力最高峰达224．10units，溶菌活力最高峰为0．122units）。说明复合疫苗具有提高SOD和溶菌活力的作用，可以增强中国对虾的防御能力。

关键词：中国对虾病毒糖蛋白免疫激活剂复合疫苗

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新城疫V_4+C_(30)复合疫苗的制备和免疫研究

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 451-454页

作者：吴宝成周金法孙莉福建农林大学动物科学学院福建福州350002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

将新城疫病毒V4株与克隆_3 0株组成复合疫苗 ,两疫苗株在等浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )条件下不存在明显的相互干扰现象 ,高浓度 ( 1∶10稀释 )V4株可以抑制低浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )C30 株致死鸡胚的能力 ,免疫研究表明 ,复合疫苗兼顾了两种... 详细信息

将新城疫病毒V4株与克隆_3 0株组成复合疫苗 ,两疫苗株在等浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )条件下不存在明显的相互干扰现象 ,高浓度 ( 1∶10稀释 )V4株可以抑制低浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )C30 株致死鸡胚的能力 ,免疫研究表明 ,复合疫苗兼顾了两种疫苗株的优点。

关键词：新城疫病毒复合疫苗免疫接种

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基于PSCA的肽-DNA复合疫苗的构建及其免疫学效应的检测

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免疫学杂志 2011年第11期27卷 931-935页

作者：刘勇靳凤烁张克勤第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科重庆400042

目的设计、制备和鉴定PLL-PSCA14-22/-pcDNA3.1(+)-PSCA复合疫苗及其免疫学效应的检测。方法将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联,将上述阳离子多肽PLL-PSCA14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质... 详细信息

目的设计、制备和鉴定PLL-PSCA14-22/-pcDNA3.1(+)-PSCA复合疫苗及其免疫学效应的检测。方法将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联,将上述阳离子多肽PLL-PSCA14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA利用正负电荷相吸作用制备靶向PSCA的肽-DNA复合疫苗;通过DNA阻滞实验和DNaseⅠ保护实验鉴定制备的疫苗;将制备成功的复合疫苗体外转染Hela细胞,通过RT-PCR检测该疫苗的转染效率;并进一步通过LDH释放实验检测该疫苗对PSCA阳性的前列腺癌细胞系LNCaP的特异性杀伤效应。结果当PLL-PSCA14-22多肽与pcDNA3.1(+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时,DNA电泳条带完全消失,即重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA完全被PLL-PSCA14-22多肽所包裹,复合疫苗可有效抵抗DNaseⅠ的消化作用。RT-PCR结果表明该复合疫苗在体外可有效转染Hela细胞,且当正负电荷比为64时出现较高的转染效率,并且能够有效激发CTL应答杀伤LNCaP细胞。结论成功构建的靶向PSCA的多肽-DNA复合疫苗可有效转染真核细胞,诱导CTL应答杀伤前列腺癌细胞,该研究为进一步体内动物实验探讨该疫苗对前列腺癌的免疫治疗效应奠定了基础。

关键词： PSCA 前列腺癌复合疫苗

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基于PSCA肽-DNA复合疫苗的构建及其免疫学效应的检测

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作者：刘勇第三军医大学

学位级别：硕士

前列腺癌是严重威胁我国中老年男性健康的恶性肿瘤之一。对于激素抵抗型前列腺癌的治疗，目前尚无有效方法。利用CTL的特异性杀伤作用对前列腺癌进行免疫治疗，已显示出良好的应用前景，但现有疫苗治疗的有效率不到30％，有待进一步提... 详细信息

前列腺癌是严重威胁我国中老年男性健康的恶性肿瘤之一。对于激素抵抗型前列腺癌的治疗，目前尚无有效方法。利用CTL的特异性杀伤作用对前列腺癌进行免疫治疗，已显示出良好的应用前景，但现有疫苗治疗的有效率不到30％，有待进一步提高。本研究以探索新型高效的前列腺癌治疗性CTL疫苗为目标，以新近鉴定出的前列腺癌相关抗原PSCA为靶标，依据阳离子肽类(如PLL)"包装"DNA的特性，将优势CTL表位肽PSCA14-22与PLL相连，用带正电荷的抗原肽PLL-PSCA14-22"包装"带负电荷的包含PSCA编码基因的质粒DNA，调节正负电荷比使其形成"病毒样"颗粒，构建PSCA肽-DNA颗粒型疫苗，以期提高疫苗的免疫原性。以HLA-A2/Kb转基因小鼠为模型，检测该疫苗的免疫效应。预期的研究结果为进一步的动物实验奠定了基础。目的：设计、制备和鉴定PLL-PSCA14-22/pcDNA3.1(+)-PSCA复合疫苗并检测其免疫学效应。方法：通过化学合成多聚赖氨酸(全序列为N-PLL-ALQPGTALL-C)，将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联，将上述阳离子多肽PLL-PSCA14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA利用正负电荷相吸作用制备靶向PSCA肽-DNA复合疫苗。通过DNA阻滞实验观察不同电荷比的复合疫苗的电泳情况，检测带负电荷的质粒pcDNA3.1(+)-PSCA是否被带正电荷的PLL-PSCA14-22所包裹;通过DNaseⅠ保护实验鉴定制备的疫苗，检测制备成功的复合疫苗能否抵挡DNaseI的消化作用;将制备成功的不同电荷比的复合疫苗体外转染Hela细胞，通过RT-PCR检测该疫苗的转染效率，确定转染效率最高的复合疫苗的正负电荷比;通过LDH释放实验检测该疫苗对PSCA阳性的前列腺癌细胞系LNCaP的特异性杀伤效应。结果：当PLL-PSCA14-22多肽与pcDNA3.1(+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时，DNA电泳条带完全消失，说明重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA完全被PLL-PSCA14-22多肽所包裹;当PLL-PSCA14-22多肽与pcDNA3.1(+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时，复合疫苗可有效抵抗DNaseⅠ的消化作用。复合疫苗在体外可有效转染Hela细胞，且当正负电荷比为64：1时出现最佳的转染效率。与对照组相比，复合疫苗诱发的CTLs其杀伤LNCaP细胞的能力显著提高。结论：成功构建的靶向PSCA的多肽-DNA复合疫苗可有效转染真核细胞，诱导CTL应答杀伤前列腺癌细胞，该研究为进一步体内动物实验探讨该疫苗对前列腺癌的免疫治疗效应奠定了基础。

关键词： PSCA 前列腺癌复合疫苗 CTL

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引起驴驹腹泻的致病性大肠杆菌分离鉴定及复合疫苗研制

引起驴驹腹泻的致病性大肠杆菌分离鉴定及复合疫苗研制

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作者：王仁虎聊城大学

学位级别：硕士

驴产业是我国重要的区域特色畜牧业。腹泻是规模化驴场最常见的一类疾病,也是影响犊驴驹成活率的主要因素之一。1.规模驴场腹泻病的调查2015年017年,对49个规模化驴场调查显示:0～6月龄驴驹腹泻病的场发病率约为67.3%（33/49）,驴驹个... 详细信息

驴产业是我国重要的区域特色畜牧业。腹泻是规模化驴场最常见的一类疾病,也是影响犊驴驹成活率的主要因素之一。1.规模驴场腹泻病的调查2015年017年,对49个规模化驴场调查显示:0～6月龄驴驹腹泻病的场发病率约为67.3%（33/49）,驴驹个体发病率为23.1%（1099/4755）,其中高发日龄为15～45 d。约有15%的病例在发病48 h2 h内死亡,发病后驴驹的生长发育性能受到严重影响,造成了严重的经济损失。引起驴驹腹泻的因素比较复杂,与长途运输应激、饮水不洁过凉、卫生状况差、寄生虫（蛔虫）的感染、病原微生物的侵袭等有关。调查发现致病性大肠杆菌（血清型O78、O101和O8）感染是最主要的致病性因素。腹泻驴驹的病变包括肠道组织粘膜脱落、绒毛断裂、粘膜水肿、出血等,符合感染性肠炎的组织学特征。2.驴驹腹泻病例中致病性大肠杆菌的分离鉴定2015年017年,从聊城市规模驴场腹泻病料中分离到416株大肠杆菌,经纯化培养、电镜分析,全自动生化鉴定,动物感染试验和16S rRNA测序,共鉴定出85株致病性大肠杆菌。电镜分析表明纯培养物的平均大小为329.4 nm×223.5 nm。使用全自动细菌鉴定仪通过生化鉴定方法可以快速的完成细菌学鉴定。对致病性大肠杆菌的敏感药物包括氟苯尼考、阿米卡星、妥布霉素等,不敏感药物包括哌拉西林、氨苄西林、头孢噻吩、头孢西叮等。DNAStar Megalign对16S rRNA序列分析表明7株***驴源分离株之间的同源性为98.2%9.7%,与牛、马、猪、禽和人源菌株的同源性分别为97.0%9.9%,88.6%1.0%,97.7%9.6%,95.8～97.3和98.8～99.9%,表明其来源复杂。3.驴驹致病性大肠杆菌全基因组序列分析对两株致病性大肠杆菌分离株（*** La18,*** Lb73）菌株,进行基因组重测序得到的原始数据量进行过滤后数据量为2.55 G,原始数据在NCBI数据库中登录号为SRP148724。将其序列分别与NCBI中登录的马源大肠杆菌菌株（Escherichia coli3.2608 Contig0022）和牛源大肠杆菌菌株（Escherichia coli O157:H7 strain FRIK2455）参考基因组序列比对。对比对结果评估,突变质控结果共有35586个SNP、20805个SNP,共有4157个In Del、23821个InDel;对结果进行突变声明和注释,分析得到通过比对基因组突变密度的差异,发现与NZ-AEZS000010.1染色体、NZ-CP015843.2染色体,突变位点、突变频率最多;本试验通过突变类型柱状图分析,在13种突变类型中发现3种（downsteam-gene-variant、synonymous-variant、upstream-gene-variant）突变类型的计数最高,分别达到175222个、27751个、178117个;通过突变位置分布统计发现:3个基因组区域（DOWNSTREAM、EXON、UPSTREAM）突变数最高。4.驴驹致病性大肠杆菌新型疫苗的研制将*** La18分离株在CGMCC进行细菌保藏（登记号为CGMCC No.14058）。使用其菌体和K99亚单位成分制成复合疫苗,经稳定性试验、攻毒保护试验、安全试验和对比试验,测定了临床保护率。菌体与疫苗亚单位的最佳比例为75亿:2.375mg。与对照组相比,临床保护率达到95.7%。综上所述,在驴驹腹泻病例中致病性大肠杆菌的分离鉴定、全基因组重测序和复合疫苗的研制,将为驴驹腹泻性疾病的防治提供重要理论依据和技术支撑。

关键词：驴驹腹泻大肠杆菌分离鉴定致病性基因组重测序复合疫苗

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FDA批准第一种复合疫苗Proquad

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制药原料及中间体信息 2005年第11期 54-54页

默克制药公司9月7日宣布：美国FDA已批准该公司的复合疫苗Proquad（麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒活性疫苗）用于12个月到12岁儿童预防麻疹、腮腺炎、风疹和水痘。

关键词：复合疫苗 FDA 制药公司腮腺炎痘病毒麻疹

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急性肠病复合疫苗的保护效力

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畜牧兽医科技信息 1999年第24期1卷 7-7页

作者：李琼璋

俄研制出一种能预防幼畜肠道疾病的复合疫苗。取30头怀孕晚期的黑白花种乳牛分成试验组和对照组。饲养管理条件相同。试验组(n=15),在分娩前1.5—2个月,皮下注射7.0ml抗急性肠病复合疫苗,过10天再以同量同法注射一次;对照组(n=15),肌注1... 详细信息

俄研制出一种能预防幼畜肠道疾病的复合疫苗。取30头怀孕晚期的黑白花种乳牛分成试验组和对照组。饲养管理条件相同。试验组(n=15),在分娩前1.5—2个月,皮下注射7.0ml抗急性肠病复合疫苗,过10天再以同量同法注射一次;对照组(n=15),肌注10ml抗大肠杆菌病多价福尔马林菌苗。接种后分别在第10天和第20天作临床检查和检测血清抗体滴度。上述乳牛所产犊牛。