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复制酶与运动蛋白编码基因的突变对烟草花叶病毒的弱化效应

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中国科学（C辑） 2001年第5期31卷 416-422页

作者：杨恭邱并生魏军亚刘广超中国科学院微生物研究所分子病毒与生物工程开放实验室北京100080

番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石... 详细信息

番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA), 构建了复制酶单突变体--TMV-Cvrase, 运动蛋白单突变体--TMV-Cvmp和复制酶与运动蛋白双突变体--TMV-Cvrase-mp. 烟草侵染试验发现, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp能侵染枯斑(Xanthi NC)和系统(K326)寄主, 后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状; 子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致, 具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力, 且其基因组仍保持着突变, 而复制酶单突变体TMV-Cvrase不能侵染烟草. 以上结果表明, 复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状, 从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究.

关键词：烟草花叶病毒复制酶运动蛋白弱化效应基因突变体乳石突变赭石突变

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几种抑制HIV-1复制酶的植物成分

药学学报 2010年第2期45卷 235-240页

作者：彭宗根许利嘉叶文才肖培根陈鸿珊中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所北京100193 暨南大学药学院广东广州510632

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点,已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一。为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物,本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型,对45个来源于毛茛科、芸香科和... 详细信息

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点,已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一。为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物,本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型,对45个来源于毛茛科、芸香科和五味子科等植物的结构清楚的化合物进行了体外活性测定。12个三萜类化合物中8个具有抑制HIV-1PR活性,其中2个还具有抑制IN活性;15个木脂素类化合物中2个具有抑制HIV-1RT活性。6个生物碱类、7个黄酮类及5个其他结构类型的化合物都无明显抑制3种复制酶的作用。植物来源的三萜类化合物抑制PR或IN的活性较好,值得深入研究。

关键词：植物成分 HIV-1 复制酶活性筛选

中国小麦花叶病毒(CWMV)复制酶基因在病株体内的表达分析

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植物病理学报 2017年第5期47卷 640-646页

作者：张芬蔡年俊羊健李静陈剑平张恒木浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆... 详细信息

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆至原核表达载体pGEX-6P1,然后导入大肠杆菌*** BL21(DE3)pLysS中诱导表达。重组的复制酶蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。Western-blot分析表明该抗体具有高度的特异性,能用于病株体内CWMV复制酶蛋白的检测。检测分析显示在病株体内,CWMV基因组RNA1可直接充当其复制酶基因的mRNA;在感染的细胞中,其复制酶组分主要是RNA1 ORF1编码的蛋白,分子量约153 kDa,且特异性地定位于膜结构上。

关键词：中国小麦花叶病毒多克隆抗体复制酶

马铃薯卷叶病毒复制酶基因3'端克隆及序列分析

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病毒学报 1997年第3期13卷 278-282页

作者：梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄内蒙古大学

马铃薯卷叶病毒复制酶基因３端克隆及序列分析梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄（内蒙古大学，呼和浩特市０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒，复制酶，基因克隆，ＰＣＲ马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）属... 详细信息

马铃薯卷叶病毒复制酶基因３端克隆及序列分析梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄（内蒙古大学，呼和浩特市０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒，复制酶，基因克隆，ＰＣＲ马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）...

关键词：植物病毒马铃薯卷叶病毒复制酶基因克隆

基于α-病毒复制酶的基因疫苗对人黑色素瘤的免疫作用

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第三军医大学学报 2005年第14期27卷 1432-1435页

作者：倪兵姜曼黎万玲毛丽伟何仰东肖宇吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的研究基于α-病毒复制酶的人黑色素瘤基因疫苗免疫学作用。方法建立及鉴定人/鼠嵌合模型(trim-era),将基于α-病毒复制酶的mage-3基因疫苗免疫动物,检测动物体内特异抗体滴度;用标准4h51Cr释放实验检测动物体内特异CTL活性。结果FAC... 详细信息

目的研究基于α-病毒复制酶的人黑色素瘤基因疫苗免疫学作用。方法建立及鉴定人/鼠嵌合模型(trim-era),将基于α-病毒复制酶的mage-3基因疫苗免疫动物,检测动物体内特异抗体滴度;用标准4h51Cr释放实验检测动物体内特异CTL活性。结果FACS分析显示,trimera小鼠腹腔细胞中人白细胞占总细胞的88·84%,脾脏细胞中人白细胞的比例占57%,同国外文献报道一致。基于α-病毒复制酶的重组基因疫苗mage-3/pSMART2a对trimera小鼠免疫后,小鼠腹腔细胞的CTL在效靶比为100∶1时杀伤率达到70%左右,此时的对照组mage-3/pCI-neo组最大杀伤率为40%左右。ELISA结果显示,重组基因疫苗mage-3/pSMART2a组产生的mage-3抗原特异性抗体效价达到1∶512,mage-3/pCI-neo组为1∶256。结论成功建立了人/鼠嵌合模型,并在动物体内激发出针对人黑色素瘤基因疫苗的初次免疫应答。

关键词： α-病毒复制酶基因疫苗 trimera 人黑色素瘤

突变和重组可克服异源复制酶在病毒复制中的功能缺陷

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浙江农业学报 2017年第3期29卷 445-449页

作者：卢金达廖乾生杜志游浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018

异源复制酶的组合无法有效地支持重组病毒的复制是雀麦花叶病毒科病毒存在的普遍现象。利用雀麦花叶病毒科黄瓜花叶病毒属的典型成员黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,TAV)作为研究对象,分... 详细信息

异源复制酶的组合无法有效地支持重组病毒的复制是雀麦花叶病毒科病毒存在的普遍现象。利用雀麦花叶病毒科黄瓜花叶病毒属的典型成员黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,TAV)作为研究对象,分析2个复制酶的异源组合对重组病毒复制的影响。通过农杆菌浸润,将CMV RNA1(C1)和TAV RNA2(T2)进行异源组合,并将此与CMV RNA3(C3)或TAV RNA3(T3)混合侵染本生烟。接种后10 d,C1T2C3和C1T2T3接种的植物没有出现明显的病毒症状,通过Northern杂交,在系统叶中仅检测到微弱的病毒特异条带,这说明C1T2的异源组合无法高效地支持病毒的复制和侵染。当C1T2C3转接3代之后,接种的本氏烟植株表现明显的病毒症状,且病毒RNA的积累水平显著增加。病毒基因组RNA的测序结果显示,C1第1 390位、T2第1 695位发生点突变,而且C3的3'末端融合了T2的完整3'UTR序列。以上结果表明,通过病毒的突变或/和重组可有效提高异源复制酶对重组病毒的复制效率。

关键词：黄瓜花叶病毒番茄不孕病毒复制酶突变重组

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杯状病毒复制酶的结构与功能

中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 170-180页

作者：刘光清中国农业科学院上海兽医研究所

本文综述了近年来有关杯状病毒RdRp的结构和功能的研究进展,并对与RdRp可能发生相互作用的伴侣分子进行了综述。此外,我们还讨论了所有杯状病毒的RdRp中可能存在的保守结构基序。

关键词：杯状病毒复制酶结构

葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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果树学报 2006年第2期23卷 252-255页

作者：徐章逸王国平洪霓华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

以感染有葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevineleafroll-associatedvirus-3,GLRaV-3)的葡萄韧皮部组织中提取到的dsRNA为模板,利用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,对GLRaV-3的复制酶(RNA-dependentRNApolymerase,RdRp)基因进行克隆,获得了预期大小的目标片段。将此片段克隆到载体pBluescriptSKⅡ,酶切鉴定后测序。测序结果表明:RdRpcDNA全长为1618bp。经BLAST分析推导其可能编码538个氨基酸,与报道的GLRaV-3美国分离物NY1RdRp核苷酸相似性为99.3%,氨基酸相似性为99.6%;推导的氨基酸序列与其同属的PMWaV-2、GLRaV-1和LChV-2的RdRp氨基酸序列相似性分别为53%,50%和38%,包含了GDD在内的8个保守基元序列。将该段RdRp连接到表达载体pET22b(+)上,获得的重组子pET-RdRp转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后,用1mmol/L的IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,RdRp在大肠杆菌中被诱导表达,融合蛋白分子量约为61kDa。

关键词：葡萄卷叶伴随病毒-3 复制酶反转录-聚合酶联反应原核表达

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番木瓜环斑病毒复制酶基因的克隆和序列分析

中山大学学报（自然科学版） 1996年第6期35卷 125-127页

作者：叶长明陈谷黄俊潮于湄李宝健中山大学生物工程研究中心

用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＰＲＶ－ＡＬ中分离到复制酶（ＲＰ）基因，将基因克隆进载体ｐＵＣ１８，用双脱氧链终止法测定了基因序列，表明其全长为１６０２ｂｐ，与国内外报道的ＨＡ５－１、ＹＫ和Ｓｍ的ＲＰ基因相比，同源性分别达８２．... 详细信息

用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＰＲＶ－ＡＬ中分离到复制酶（ＲＰ）基因，将基因克隆进载体ｐＵＣ１８，用双脱氧链终止法测定了基因序列，表明其全长为１６０２ｂｐ，与国内外报道的ＨＡ５－１、ＹＫ和Ｓｍ的ＲＰ基因相比，同源性分别达８２．８０％，９５．０７％和９１．８３％．

关键词：番木瓜环斑病毒复制酶基因无性系序列分析