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壮骨健膝方对巨噬细胞极化的影响及作用机制研究

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世界中医药 2024年第13期19卷 1959-1965页

作者：张鹏郭洁梅肖艳陈鹏张英杰刘俊陈雨邱梦婷苏友新福建中医药大学中医学院福州350122 福建中医药大学康复学院福州350122

目的:探讨壮骨健膝方对巨噬细胞经典活化型(M1)/替代活化型(M2)极化的影响及作用机制。方法:佛波酯诱导人单核白血病细胞分化为非活化巨噬细胞(M0),脂多糖刺激M0复制M1极化模型,将细胞分为空白组(M0+空白血清)、模型组(M1+空白血清)、... 详细信息

目的:探讨壮骨健膝方对巨噬细胞经典活化型(M1)/替代活化型(M2)极化的影响及作用机制。方法:佛波酯诱导人单核白血病细胞分化为非活化巨噬细胞(M0),脂多糖刺激M0复制M1极化模型,将细胞分为空白组(M0+空白血清)、模型组(M1+空白血清)、抑制剂组(M1+NF-κB抑制剂+空白血清)、壮骨健膝方组(M1+含药血清)。干预24 h后,检测各组M1标志分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1),M2标志分子分化簇206、163、209(CD206、163、209)mRNA表达,炎症介质白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),抗炎因子IL-4、IL-10水平及mRNA表达,核因子κB(NF-κB)信号通路中节点蛋白核内NF-κBp65、NF-κBp50及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达。结果:模型组M1标志分子、炎症介质及NF-κBp65、NF-κBp50蛋白均高于空白组(P壮骨健膝方组M1标志分子、炎症介质及NF-κBp65、NF-κBp50蛋白均低于模型组(P壮骨健膝方组MHC-Ⅱ、MCP-1 mRNA及炎症介质均低于抑制剂组(P壮骨健膝方可抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1极化,促进M2极化,其机制可能与降低细胞中NF-κB信号通路活性有关。

关键词：壮骨健膝方含药血清膝骨关节炎巨噬细胞极化 M1/M2型巨噬细胞滑膜炎 THP-1源巨噬细胞

壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路的影响

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中华中医药杂志 2019年第9期34卷 4055-4059页

作者：洪振强滕方舟郭洁梅何俊君苏友新福建中医药大学中医学院/中医骨伤与运动康复教育部重点实验室福州350122 福建卫生职业技术学院福州350101

目的:观察壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路关键信号分子及下游效应产物的影响,阐明该方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制。方法:取正常人及膝骨关节炎(KOA)患者软骨标本体外分离软骨细胞并培养至... 详细信息

目的:观察壮骨健膝方含药血清对人退变关节软骨细胞caveolin-p38MAPK信号通路关键信号分子及下游效应产物的影响,阐明该方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制。方法:取正常人及膝骨关节炎(KOA)患者软骨标本体外分离软骨细胞并培养至第3代。将正常人软骨细胞设为正常组,KOA患者软骨细胞随机分为KOA组、阻滞剂组、含药血清组及含药血清+阻滞剂组。分别用20%空白血清、20%空白血清、20%空白血清+20μmol/L SB203580、20%含药血清、20%含药血清+20μmol/L SB203580进行干预;48h后,收集细胞;采用Western Blot检测细胞中caveolin-1、p-p38蛋白表达,RT-PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达。结果:与正常组比较,KOA组软骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著升高(P骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P骨细胞中caveolin-1蛋白及MMP-13 mRNA表达显著降低(P骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白及TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达显著降低(P壮骨健膝方含药血清保护人退变关节软骨细胞的机制可能与其抑制caveolin-p38MAPK信号通路中关键信号分子caveolin-1、p-p38蛋白表达,降低下游效应产物TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-13 mRNA表达有关。

关键词：壮骨健膝方人软骨细胞 caveolin-p38MAPK信号通路肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β 基质金属蛋白酶-3 基质金属蛋白酶-13

壮骨健膝方对IL-1β诱导后软骨细胞表达Caveolin-1、p-p38、MMP-3、MMP-13及TNF-α的影响

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中华中医药杂志 2014年第9期29卷 2931-2933页

作者：陈宝军闫虎林学义张庆张子怡王艺茹李亚楠苏友新福建中医药大学福州350122

目的:观察壮骨健膝方对IL-1β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制。方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h... 详细信息

目的:观察壮骨健膝方对IL-1β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制。方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h后随机分为空白血清组、含药血清组、阻滞剂A组、阻滞剂B组,并设未诱导的细胞为正常对照组,分别用不同方法干预6h后,检测软骨细胞及其培养液中上述5个指标的表达。结果:空白血清组5个指标的表达均高于其它各组(P壮骨健膝方对关节软骨的保护作用可能与其抑制Caveolinp38MAPK信号通路的激活,进而降低软骨细胞表达MMP-3、MMP-13及TNF-α有关。

关键词：骨关节炎软骨细胞壮骨健膝方小窝蛋白1 磷酸化p38 基质金属蛋白酶3 基质金属蛋白酶13 肿瘤坏死因子-α

壮骨健膝方对退变关节软骨细胞“Wnt/β-catenin”通路的影响

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壮骨健膝方对退变关节软骨细胞“Wnt/β-catenin”通路的影响

作者：陈秀明福建中医药大学

学位级别：硕士

目的基于‘’Wnt/β-catenin"信号通路几个关键信号分子探究壮骨健膝方含药血清对退变软骨细胞的干预作用及机理,从分子生物学水平阐述壮骨健膝方保护关节软骨的部分微观机制与环节,为壮骨健膝方应用于临床提供实验依据。方法 1.40只... 详细信息

目的基于‘’Wnt/β-catenin"信号通路几个关键信号分子探究壮骨健膝方含药血清对退变软骨细胞的干预作用及机理,从分子生物学水平阐述壮骨健膝方保护关节软骨的部分微观机制与环节,为壮骨健膝方应用于临床提供实验依据。方法 1.40只清洁级SD大鼠,随机分为正常血清组(给予0.9%生理盐水灌胃)与含药血清组(给予壮骨健膝方药液灌胃),连续灌胃5天,2次/日,于末次灌胃3h后腹主动脉采血,制各大鼠的正常血清及壮骨健膝方含药血清。 2.取2周龄SD大鼠膝关节软骨建立离体培养的软骨细胞体系,应用形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色进行鉴定;MTT检测1-5代软骨细胞增殖情况,绘制细胞增殖曲线。 3.用10ng/ml IL-1β建立诱导退变软骨细胞模型,RT-PCR检测正常及诱导退变软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达,Western Blot法检测正常及诱导退变软骨细胞中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达。 4.用正常血清和壮骨健膝方的含药血清分别干预IL-1β诱导退变的软骨细胞,RT-PCR检测两种血清作用于诱导退变软骨细胞不同时间段(24h、36h、48h、72h)后β-catenin、 GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达,Western Blot法检测软骨细胞中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达;ELISA法检测培养液中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达。结果 1.体外培养软骨细胞,经倒置显微镜下形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色符合软骨细胞的生物学特性,传3代以内可以保持表型稳定。 2.正常软骨细胞β-catenin mRNA的表达阳性强度低于IL-1β诱导退变的软骨细胞,而GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达强度高于诱导退变的软骨细胞;正常软骨细胞Dkk-1、 sFRP-3蛋白的表达高于诱导退变的软骨细胞。 3.不同血清作用于退变软骨细胞,含药血清组β-catenin mRNA的表达水平随时间而减弱,正常血清组随时间而增强;含药血清组GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA及Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平随时间而增强,而正常血清组的表达随时间减弱;含药血清组软骨细胞培养液中Dkk-1、sFRP-3的蛋白表达水平随时间逐渐增强,正常血清组两种蛋白的表达均随时间而逐渐减弱。结论 IL-1β诱导的软骨细胞退变过程伴随着"Wnt/β-catenin"信号通路的激活;壮骨健膝方含药血清对诱导退变的软骨细胞有保护作用,该作用可能与壮骨健膝方含药血清通过降低退变软骨细胞内β-catenin的水平,促进GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA和蛋白的表达,使进入核内的β-catenin减少,从而抑制‘’Wnt/β-catenin"信号通路的激活有关。

关键词：骨性关节炎壮骨健膝方 Wnt β-catenin GSK-3β Dkk-1 sFRP-3

基于LXRs/NF-κB信号通路对A型滑膜细胞的调控探讨壮骨健膝方的作用机制

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中国中西医结合杂志 2022年第9期42卷 1087-1094页

作者：陈鹏郭洁梅肖艳林震张英杰张鹏李保林苏友新福建中医药大学康复医学院福州350122 福建中医药大学中医学院福州350122 中医骨伤及运动康复教育部重点实验室福州350122 福建卫生职业技术学院医学院福州350101

目的观察壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的兔A型滑膜细胞肝X受体(LXRs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨壮骨健膝方治疗膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症的机制。方法制备壮骨健膝方含药血清并采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC... 详细信息

目的观察壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的兔A型滑膜细胞肝X受体(LXRs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨壮骨健膝方治疗膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症的机制。方法制备壮骨健膝方含药血清并采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS/MS)进行质量控制(龙胆苦苷885 ng/mL、阿魏酸185 ng/mL)。将兔A型滑膜细胞随机分为空白组和LPS组,LPS组经LPS诱导后建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后随机分为模型组、壮骨健膝方组、LXRα抑制剂组、核受体辅助抑制因子(N-CoR)抑制剂组,分别予以10%空白血清、10%含药血清、10%含药血清+LXRα抑制剂、10%含药血清+N-CoR抑制剂,空白组予10%空白血清干预。干预24 h后,收集各组细胞及上清液,Western Blot、RT-qPCR检测各组细胞中LXRα、N-CoR、P50、P65蛋白及m RNA的表达,ELISA检测各组上清液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及MMP-13含量。结果与空白组比较,模型组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均升高(P壮骨健膝方组P50和P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P壮骨健膝方组比较,LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组LXRα、N-CoR蛋白及mRNA表达下降(P壮骨健膝方可通过上调LXRα和N-CoR蛋白及mRNA表达,下调P50、P65蛋白及mRNA表达,从而抑制LXRs/NF-κB信号通路的传导,减少下游炎症相关指标IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13的分泌,最终达到控制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。

关键词：壮骨健膝方 A型滑膜细胞 LXRs/NF-κB信号通路膝骨关节炎滑膜炎症

壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症肝X受体/核因子κB通路的影响

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世界中医药 2021年第21期16卷 3198-3203页

作者：毛骁肖艳郭洁梅陈鹏张鹏张英杰朱亚菊苏友新福建中医药大学福州350122 中医骨伤及运动康复教育部重点实验室福州350122 福建卫生职业技术学院福州350101 孝感市中医院孝感432000

目的:基于肝X受体/核因子κB信号通路观察壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症模型的影响,探讨其对滑膜炎症的作用及机制。方法:将24只新西兰大白兔随机分为正常组6只和造模组18只。造模组行膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎滑... 详细信息

目的:基于肝X受体/核因子κB信号通路观察壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症模型的影响,探讨其对滑膜炎症的作用及机制。方法:将24只新西兰大白兔随机分为正常组6只和造模组18只。造模组行膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎滑膜炎症模型。造模成功后将模型兔随机分为模型组、扶他林组和壮骨健膝方组,每组6只。扶他林组和壮骨健膝方组分别给予扶他林混悬液、壮骨健膝方药液灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃。观察干预前后各组兔膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分;膝关节液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13含量;滑膜组织评分;滑膜组织中LXRα、N-CoR、P50、P65 mRNA的表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔一般情况差,膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均升高(均P壮骨健膝方组及扶他林组膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均较低(均P壮骨健膝方组LXRα与N-CoR mRNA表达升高(均P0.05)。与扶他林组比较,壮骨健膝方组LXRα、N-CoR mRNA表达升高(均P0.05)。结论:壮骨健膝方可能通过调控肝X受体/核因子κB信号通路的转导,减少下游炎症介质分泌,达到抑制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。

关键词：壮骨健膝方膝骨关节炎滑膜炎肝X受体/核因子κB通路肝X受体α 核受体辅助抑制因子炎症介质

基于“caveolin-p38MAPK”通路研究壮骨健膝方对体外诱导退变关节软骨细胞的影响

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基于“caveolin-p38MAPK”通路研究壮骨健膝方对体外诱导退变关节...

作者：林学义福建中医药大学

学位级别：硕士

目的基于"caveolin-p38MAPK"信号通路几个关键信号分子及其下游促分解性细胞因子、MMPs与软骨细胞凋亡等效应指标的变化,从分子生物学水平明确壮骨健膝方对IL-1β诱导退变关节软骨细胞的的影响及其作用机制,为该方应用于临床奠定实验基... 详细信息

目的基于"caveolin-p38MAPK"信号通路几个关键信号分子及其下游促分解性细胞因子、MMPs与软骨细胞凋亡等效应指标的变化,从分子生物学水平明确壮骨健膝方对IL-1β诱导退变关节软骨细胞的的影响及其作用机制,为该方应用于临床奠定实验基础。方法1.20只普通级3月龄新西兰兔,随机分为空白血清组(0.9%生理盐水灌胃)与含药血清组(壮骨健膝方药液灌胃),连续灌胃5天,2次/日,于末次灌胃3h后腹主动脉采血,制备新西兰兔的正常血清及壮骨健膝方含药血清。2.取4周龄普通级新西兰兔双侧膝关节透明软骨,建立离体培养的关节软骨细胞体系,应用形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色观察并鉴定,MTT法检测第2代软骨细胞增殖情况。3.10ng/ml IL-1β诱导软骨细胞退变,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色观察并鉴定;MTT法检测壮骨健膝方含药血清对退变软骨细胞增殖的影响,并确定含药血清干预的最佳时间及浓度。4.诱导退变的软骨细胞随机分为模型组、含药血清组、阻滞剂组(SB203580干预)、含药血清+阻滞剂组,并设无IL-1p诱导干预的为正常组,分别干预48h后,流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western Blot法检测软骨细胞中caveolin-1和p-p38蛋白的表达;RT-PCR检测细胞IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13及caveolin-1mRNA表达的变化。结果1.研究中分离培养的第2代关节软骨细胞,经形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色显示符合软骨细胞的生物学特性。IL-1p干预的关节软骨细胞呈现退变表现：细胞生长速度减慢,细胞变狭长,胞内见空泡,形态不规则,其甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色均变淡。2.壮骨健膝方含药血清对IL-1p诱导退变的软骨细胞增殖作用呈剂量依赖性的促进趋势,48h时,正常组、15%、20%含药血清组与模型组比较有显著性差异(p0.05),含药血清以20%为最佳干预浓度,其最佳干预时间为48h。***-lp诱导退变的软骨细胞再继续培养48h出现明显的凋亡,凋亡率达(14.17+0.43)%,含药血清组、阻滞剂组、含药血清+阻滞剂组细胞凋亡率明显降低,与模型组比较均有极显著差异(p骨细胞中caveolin-1、p-p38蛋白的表达均见增强。其中模型组的caveolin-1、p-p38的表达显著增加,含药血清及SB203580均可降低其表达。各组软骨细胞IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13、caveolin-1mRNA均见表达,模型组明显增强(p骨细胞退变过程存在"caveolin-p38MAPK"信号通路的激活,表现为caveolin-1与p-p38的蛋白表达增高,通路下游软骨细胞出现过凋亡及IL-1β、TNF-α、 MMP-3、MMP-13、caveolin-1mRNA的表达升高。壮骨健膝方保护关节软骨细胞的作用机制可能与促进诱导退变关节软骨细胞的增殖,抑制"caveolin-p38MAPK"信号通路中关键蛋白caveolin-1与p-p38的蛋白表达,降低通路下游IL-1β、TNF-α、MMP-3、 MMP-13、caveolin-1mRNA的表达并减少退变关节软骨细胞的凋亡密切相关。

关键词：骨关节炎壮骨健膝方软骨细胞含药血清信号通路

壮骨健膝方对脂多糖诱导兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响

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福建中医药 2023年第6期54卷 13-17页

作者：张英杰张鹏肖艳刘俊陈雨邱梦婷苏友新福建中医药大学中医学院福建福州350122 福建中医药大学康复医学院福建福州350122

目的探讨壮骨健膝方对兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响及作用机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激兔滑膜成纤维细胞(FLS)建立炎症模型,筛选壮骨健膝方干预炎症模型的最佳条件(浓度10%,时间48h)后,采用随机数字表法随机分为空白组、模型组和... 详细信息

目的探讨壮骨健膝方对兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响及作用机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激兔滑膜成纤维细胞(FLS)建立炎症模型,筛选壮骨健膝方干预炎症模型的最佳条件(浓度10%,时间48h)后,采用随机数字表法随机分为空白组、模型组和壮骨健膝方组,分别给予相应条件干预后采用ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,qPCR法检测各组细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、增殖细胞核抗原(PCNA)、IκBα、NF-κB p65 mRNA表达,Western blot法检测各组细胞中PCNA、核因子κB抑制因子α(IκBα)及核内核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著升高(P均壮骨健膝方组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著降低(P均壮骨健膝方可减轻LPS诱导的兔FLS炎症反应并能抑制FLS的过度增殖,从而发挥“除痹”功效,其部分作用机制与抑制兔FLS细胞中NF-κB信号通路激活有关。

关键词：膝骨关节炎滑膜成纤维细胞细胞炎症模型细胞增殖壮骨健膝方

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壮骨健膝方含药血清对经IL-1β诱导的大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子蛋白表达的影响

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福建中医药 2021年第2期52卷 18-20页

作者：郭洁梅陈秀明陈鹏肖艳毛骁苏友新福建卫生职业技术学院福建福州350101 福建中医药大学福建福州350122 福建中医药大学附属康复医院福建福州350003

目的观察壮骨健膝方含药血清对大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk-1、sFRP-3蛋白表达的影响,揭示该方保护膝关节软骨细胞的可能分子机制。方法取清洁级2周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS... 详细信息

目的观察壮骨健膝方含药血清对大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk-1、sFRP-3蛋白表达的影响,揭示该方保护膝关节软骨细胞的可能分子机制。方法取清洁级2周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养,干预24 h后制备退变软骨细胞模型,模型鉴定成功后随机分为空白血清组和含药血清组,分别采用含10%大鼠空白血清、10%壮骨健膝方大鼠含药血清的DMEM进行干预,干预24、36、48、72 h时分别采用Western blot法检测软骨细胞Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平。结果空白血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐下降,干预48 h和78 h均显著低于24 h(P均壮骨健膝方含药血清可能通过提高Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对经IL-1β诱导退变的大鼠膝关节软骨细胞起保护作用,其效果在一个细胞培养换液周期内随培养时间延长而增强。

关键词：膝骨关节炎壮骨健膝方 IL-β Wnt/β-catenin Dkk-1 sFRP-3