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NSUN2对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响及机制研究

NSUN2对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响及机制研究

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作者：陈进湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:前列腺癌（Prostate cancer）是我国男性常见的恶性肿瘤,发病率及死亡率逐年上升。诊断技术的进步及早期筛查使得大多数前列腺癌患者得以治疗,局限性前列腺癌患者的5年生存率达到90%以上。然而,部分患者在初诊时就已经进展至中晚... 详细信息

背景:前列腺癌（Prostate cancer）是我国男性常见的恶性肿瘤,发病率及死亡率逐年上升。诊断技术的进步及早期筛查使得大多数前列腺癌患者得以治疗,局限性前列腺癌患者的5年生存率达到90%以上。然而,部分患者在初诊时就已经进展至中晚期并伴有局部或远处转移,在经过雄激素剥夺治疗（ADT）后最终会发展为去势抵抗性前列腺癌（CRPC）,且容易发生骨转移,5年生存率仅有30%。尽管随着治疗方式的改进,患者生活质量有所提高,但总体治疗效果并不理想。因此,寻找新型的治疗靶点并进一步探索前列腺癌恶性发展的分子机制是十分有必要的。RNA m5C甲基化及调控蛋白在肿瘤发生发展中起重要作用。NSUN2是m5C RNA甲基化的甲基转移酶,与不同类型癌症的临床分期、肿瘤耐药性及放、化疗抵抗有关,NSUN2通过调节RNA代谢、细胞周期及影响细胞增殖、迁移等过程在癌症的发生、发展中发挥重要作用。本课题主要探讨NSUN2甲基转移酶对前列腺癌的影响及生物学机制。目的:探索前列腺癌中NSUN2的表达及意义;探索前列腺癌PC3细胞中NSUN2对细胞增殖、迁移、凋亡和代谢的影响及机制研究。方法:1、通过TCGA数据库及在线数据库分析前列腺癌中NSUN2的表达及意义;2、通过免疫组化法检测前列腺癌患者癌及癌旁样本中NSUN2的表达情况;3、通过慢病毒转染系统构建稳定敲低NSUN2的前列腺癌PC3细胞系,通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测稳转细胞系的建立情况;4、通过细胞克隆形成、CCK8实验以及流式细胞仪检测对照组和NSUN2敲低组PC3细胞增殖活力以及增殖指标的变化;通过Transwell细胞迁移实验检测对照组和NSUN2敲低组PC3细胞迁移能力;通过流式细胞仪检测NSUN2对照组和敲低组PC3细胞凋亡水平的变化;5、蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR检测对照组和NSUN2敲低组PC3细胞磷酸戊糖代谢途径限速酶（G6PD）mRNA和蛋白表达;NADP+/NADPH检测试剂盒检测对照组和NSUN2敲低组PC3细胞中NADP+/NADPH水平的变化;蛋白免疫印迹检测NSUN2对AKT信号通路的影响。结果:TCGA数据分析显示与癌旁组织相比,前列腺癌组织中NSUN2的表达明显升高,临床样本免疫组化结果与数据分析结果一致;前列腺癌中NSUN2的表达与临床分期及Gleason评分相关,可为影响前列腺癌预后的独立危险因素;前列腺癌中NSUN2的表达与免疫细胞浸润程度有关;在前列腺癌PC3细胞中,通过慢病毒转染后蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR结果显示NSUN2 mRNA及其蛋白表达降低,提示稳定敲低NSUN2的PC3细胞成功构建;NSUN2敲低后抑制PC3细胞的增殖与迁移;NSUN2敲低后促进PC3细胞的凋亡;KEGG、GO富集分析提示NSUN2与代谢信号通路有关,前列腺癌中NSUN2的表达与磷酸戊糖代谢途径限速酶-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）显著相关;NSUN2敲低后G6PD的mRNA及蛋白水平降低,NADPH的含量降低,NADP+/NADPH比值升高。NSUN2敲低后,p-AKT蛋白水平降低,AKT信号通路受到抑制。结论:***2在前列腺癌组织中高表达,与前列腺癌的临床分期、Gleason评分以及预后相关;***2敲低后抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移以及促进PC3细胞凋亡;***2敲低后下调葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）表达,抑制磷酸戊糖代谢（ppp）;***2敲低后抑制AKT信号通路

关键词：前列腺癌 NSUN2 增殖、迁移及凋亡 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD) AKT

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