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塔里木裂腹鱼KISS1和KISS2基因的克隆、组织表达及KISS1繁殖性状相关SNP位点筛选

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塔里木裂腹鱼KISS1和KISS2基因的克隆、组织表达及KISS1繁殖性状...

作者：赵年桦塔里木大学

学位级别：硕士

塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)是仅分布于新疆南疆的特有鱼类,由于过度捕捞、水利设施等因素再加上自身条件的限制,资源恢复相当困难。对于生长缓慢、繁殖成熟晚、自然种群补充不足的濒危鱼类而言,实现大规模人工繁殖和养殖是... 详细信息

塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)是仅分布于新疆南疆的特有鱼类,由于过度捕捞、水利设施等因素再加上自身条件的限制,资源恢复相当困难。对于生长缓慢、繁殖成熟晚、自然种群补充不足的濒危鱼类而言,实现大规模人工繁殖和养殖是资源恢复的重要途径之一,因此掌握该鱼的生殖调控方法迫在眉睫。KISS基因是生殖调节级联相关的关键调控因子,因此,鉴定和分析KISS基因的作用对进一步阐明塔里木裂腹鱼的繁殖机制具有重要意义。本实验以塔里木裂腹鱼作为研究对象,利用c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of c DNA ends,RACE)获得了塔里木裂腹鱼两种KISS基因(KISS1和KISS2)的全长c DNA序列;采用q RT-PCR技术检测了KISS1和KISS2基因在心、肝脏、中肾、肌肉、性腺、眼、下丘脑、垂体、鳃、鳍和鳔的分布特征;利用直接测序法检测出塔里木裂腹鱼KISS1基因的多态性,并筛选出繁殖性状有利的基因型,为了解KISS基因在塔里木裂腹鱼生殖中的作用提供理论基础,也为该鱼种的资源保护与恢复、优势品种的培育奠定分子基础。主要研究结果如下:1.塔里木裂腹鱼KISS1和KISS2基因的克隆与分子特征塔里木裂腹鱼KISS1基因序列全长为658bp,ORF全长327bp,编码108个氨基酸,5′UTR为62bp,3′UTR为269bp,KISS1蛋白理论等电点为9.34,分子量大小为12.45k D,其编码的108个氨基酸中,包含19种氨基酸,蛋白原子总数为1733个,且归属为不稳定性蛋白质,其二级结构主要包含α-螺旋、延伸链及无规则卷曲3种二级元件,信号肽位于第15和16号氨基酸之间,不存在跨膜结构域,其丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸磷酸化位点分别有10、8、7个,亚细胞主要定位于细胞外,推测其功能的发挥主要在细胞外。同源性结果分析表示,KISS1基因保守性较高,且与理氏裂腹鱼的亲缘关系最近,为98.04%,与其他生物的同源性在80.56%～94.74%之间。KISS2基因序列全长为582bp,ORF为378bp,编码125AA,5′UTR为12bp,3′UTR为192bp,KISS2蛋白理论等电点为8.93,分子量大小为14.60k D,125个氨基酸中包含18种氨基酸,蛋白原子总数为2028个,不稳定性指数为69.76,归类为不稳定性蛋白。其二级结构包含无规则卷曲、α-螺旋和延伸链3种类型,分别占56.00%、35.20%和8.80%,信号肽位于第19和20号氨基酸之间,不属于跨膜蛋白,其苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸磷酸化位点分别有8、15、4个,亚细胞主要定位于细胞核,推测其功能的发挥主要在细胞核。同源性结果分析表示,KISS2基因保守性较高。2.塔里木裂腹鱼KISS1和KISS2基因在不同组织中的表达量利用q RT-PCR技术检测出KISS1基因在塔里木裂腹鱼的心脏、肝脏、中肾、肌肉、性腺、眼、下丘脑、垂体、鳃、鳍和鳔组织中均存在表达,表达量最高的组织为性腺,次高表达量为肌肉,随后从高到低为鳔、垂体、心、下丘脑、鳃、鳍、肝、眼和中肾;KISS2基因也在11种组织中均有表达,在性腺中表达量最高,肌肉的表达量次之,随后从高到低为垂体、鳃、心、鳔、下丘脑、鳍、肝、中肾和眼。说明KISS1和KISS2基因参与塔里木裂腹鱼的生殖过程,也暗示该基因存在其他方面的生理功能。3.塔里木裂腹鱼雄鱼KISS1基因繁殖性状相关联的SNPs位点的筛选KISS1基因外显子区域检测到3个SNPs位点,三个位点在塔里木裂腹鱼群体中偏离Hardy-Weinberg平衡(PT位点显著影响塔里木裂腹鱼的性腺质量和成熟系数,其中在SNP c.3G>T处,TT基因型个体的性腺质量和成熟系数显著高于GG基因型的个体(P0.05)。因此,在塔里木裂腹鱼繁殖性能提升中可针对SNP c.3G>T位点信息对个体进行选配。

关键词：塔里木裂腹鱼 KISS1基因 KISS2基因基因克隆基因表达模式单核苷酸多态性

塔里木裂腹鱼人工繁殖、胚胎发育和早期仔鱼发育研究

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西北农业学报 2021年第12期30卷 1767-1776页

作者：赵年桦徐筱赵贺温子政刘茂春胡仁云聂竹兰塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木珍稀鱼类研究中心新疆阿拉尔843300 武汉中科瑞华生态科技股份有限公司武汉430000

为了实现塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)的人工养殖和资源增殖,于2020年进行塔里木裂腹鱼人工繁殖试验,探索塔里木裂腹鱼繁殖时期、雌雄鉴别、人工催产和人工孵化等关键技术,结果显示,催产塔里木裂腹鱼亲鱼44组,获受精卵25.08万... 详细信息

为了实现塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)的人工养殖和资源增殖,于2020年进行塔里木裂腹鱼人工繁殖试验,探索塔里木裂腹鱼繁殖时期、雌雄鉴别、人工催产和人工孵化等关键技术,结果显示,催产塔里木裂腹鱼亲鱼44组,获受精卵25.08万粒,获水花鱼苗14.9万尾,其中塔里木裂腹鱼人工催产药物最适浓度为鲤鱼脑垂体(PG) 13.47 mg/kg、马来酸地欧酮(DOM) 15.27mg/kg和促黄体素释放激素A_(2)(LRH-A_(2)) 19.28μg/kg;塔里木裂腹鱼的繁殖期在新疆南疆地区主要集中在4月下旬至6月上旬,塔里木裂腹鱼产微粘沉性卵,成熟卵卵径为(1.7±0.15) mm,吸水膨胀后达(2.8±0.16) mm;其胚胎发育过程经历胚盘、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和出膜7个阶段;在水温19~19.2℃的条件下,受精卵发育经过93 h 36 min孵化,总积温为1 785.24℃·h;初孵仔鱼全长(7.19±0.15) mm,具心跳和血液循环;早期仔鱼发育分为卵黄囊期、弯曲前期、弯曲期和弯曲后期4个时期,出膜后7 d,卵黄囊完全吸收。通过对塔里木裂腹鱼进行人工繁殖试验,掌握催产塔里木裂腹鱼最适药物浓度,描述塔里木裂腹鱼的胚胎和早期仔鱼发育特征,以期进一步丰富塔里木裂腹鱼早期生活史资料,为其资源保护提供基础数据。

关键词：塔里木裂腹鱼人工繁殖胚胎发育早期仔鱼发育

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塔里木裂腹鱼消化系统形态学与组织学研究

渔业科学进展 2020年第6期41卷 49-57页

作者：任永丽聂竹兰杨志军张升魏杰塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

利用传统石蜡切片、HE染色等方法对塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)消化系统形态学和组织学特征进行研究。结果显示,塔里木裂腹鱼消化系统由消化管和消化腺组成,消化管包括口咽腔、食道和肠(前肠、中肠、后肠和直肠)。口咽腔内具... 详细信息

利用传统石蜡切片、HE染色等方法对塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)消化系统形态学和组织学特征进行研究。结果显示,塔里木裂腹鱼消化系统由消化管和消化腺组成,消化管包括口咽腔、食道和肠(前肠、中肠、后肠和直肠)。口咽腔内具有发达的咽齿。无胃,肠与食道紧接,前肠膨大。消化道由腔面向外依次为黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层,但口咽腔只有黏膜层、黏膜下层和肌层,未发现有浆膜层。消化道4层中,黏膜层差异最大:口咽腔黏膜层为复层扁平上皮,其间分布有味蕾和大量黏液细胞;食道粗而短,黏膜层为复层扁平上皮,黏膜褶两侧分布大量黏液细胞,且固有膜血管丰富;肠道上皮细胞为单层柱状上皮,上皮间分布有杯状细胞,其数量由前向后逐渐增加,而黏膜褶高度逐渐降低。消化腺由肝脏和胰脏组成,肝脏的肝小叶不明显,但明显可见肝血窦及中央静脉分布,肝门管区不典型。胰脏仅在肠系膜中出现,而未在其他组织中发现,胰小叶间中央静脉明显,中央静脉中可见大量椭圆形有核的红细胞。本研究对塔里木裂腹鱼消化系统形态学和组织学特征与其食性的关系进行了探讨,旨在丰富塔里木裂腹鱼的生物学研究内容,可为其食性分析及饵料开发提供理论依据。

关键词：塔里木裂腹鱼消化系统形态学组织学

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塔里木裂腹鱼和厚唇裂腹鱼多变量形态学分析

浙江海洋大学学报（自然科学版） 2018年第3期37卷 221-227页

作者：杨天燕孟玮郭焱马燕武谢春刚高天翔浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 新疆维吾尔自治区水产科学研究所乌鲁木齐830000

运用多变量形态度量学方法,对新疆喀拉喀什河和玉龙喀什河塔里木裂腹鱼和厚唇裂腹鱼67尾个体框架结构测量中的31个指标进行了分析。两种裂腹鱼类有5个性状存在极显著差异(P<0.01),6个性状存在显著差异(P<0.05)。主成分分析显示前三个主... 详细信息

运用多变量形态度量学方法,对新疆喀拉喀什河和玉龙喀什河塔里木裂腹鱼和厚唇裂腹鱼67尾个体框架结构测量中的31个指标进行了分析。两种裂腹鱼类有5个性状存在极显著差异(P裂腹鱼类特征变量进行逐步判别分析,结果显示二者判别成功率为均达到90%以上,识别度较高。基于31个形态学特征的三维主成分分布可以看出,尽管个体间存在交叉散布现象,但两种裂腹鱼群体整体上能够形成相对独立的组群。基于形态学特征变量的聚类结果也证实了这一结论,表明基于多变量的形态学方法可以将不同种类的裂腹鱼进行区分。

关键词：塔里木裂腹鱼厚唇裂腹鱼多变量分析形态差异

塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响

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渔业科学进展 2022年第4期43卷 70-80页

作者：代金彩聂竹兰赵年桦任永丽魏杰塔里木大学动物科学学院新疆建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室塔里木珍稀鱼类研究中心新疆阿拉尔843300

为了建立塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)尾鳍细胞系,本研究采用组织块法,分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养塔里木裂腹鱼尾鳍组织,初步建立了塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系(BICF1)。采用MTT法测定分析盐度(NaCl)和碱度(NaH... 详细信息

为了建立塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)尾鳍细胞系,本研究采用组织块法,分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养塔里木裂腹鱼尾鳍组织,初步建立了塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系(BICF1)。采用MTT法测定分析盐度(NaCl)和碱度(NaHCO_(3))对其增殖的影响。结果显示,BICF1悬浮培养传至45代,最适培养液为DME/F12,最适FBS浓度为20%,最适温度为25℃。第10代BICF1的群体倍增时间为28.11 h,呈“S”型生长。第6代BICF1液氮冻存180 d后复苏,经台盼蓝染色计数,BICF1有(87.85±0.66)%的细胞具有活性,复苏后可增殖并传代。BICF1无细菌、真菌、支原体污染。第10代BICF1线粒体16S rRNA测序结果与GenBank基因序列进行一致性对比,结果显示,BICF1与JQ844133.1的一致率为100%,表明BICF1来自于塔里木裂腹鱼。BICF1增殖数量在盐度为1、2、4、6时呈上升趋势,在盐度为6、8、10时呈下降趋势;盐度为6时,BICF1增殖数量最高。BICF1增殖数量在碱度为2、3、4、5、6 g/L时呈上升趋势,在碱度为6、7、8、10 g/L时呈下降趋势;碱度为6 g/L时,BICF1增殖数量最高。细胞增殖数量随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。本研究旨在为合理开发和利用塔里木裂腹鱼遗传资源以及建立和保护其种质资源提供一定的科学依据。

关键词：塔里木裂腹鱼尾鳍组织细胞培养

叶尔羌河塔里木裂腹鱼肠道寄生线虫的种类鉴定与系统发育分析

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中国兽医科学 2022年第4期52卷 475-484页

作者：冯龙基郝翠兰田胜利张斐穆妮热·喀迪尔刘豆豆魏念文刘彦君范文豪岳城新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心新疆乌鲁木齐830063

2019年5月至2020年7月期间,运用形态学和分子生物学方法对叶尔羌河流域(塔县河段)塔里木裂腹鱼肠道内寄生的2种线虫进行种类鉴定及系统发育分析。结果显示,采集到的线虫据其形态数据可初步鉴定为杆咽属和对盲囊属,用PCR扩增的受检样本JG... 详细信息

2019年5月至2020年7月期间,运用形态学和分子生物学方法对叶尔羌河流域(塔县河段)塔里木裂腹鱼肠道内寄生的2种线虫进行种类鉴定及系统发育分析。结果显示,采集到的线虫据其形态数据可初步鉴定为杆咽属和对盲囊属,用PCR扩增的受检样本JG1、JG2的COⅠmtDNA序列与GenBank中已知的Rhabdochona salgadoi的同源性最高,为89.9%;用PCR扩增的受检样本JD1、JD2的ITS1 rDNA序列与鲁道夫对盲囊线虫B的同源性最高,为99.27%;鉴定结果表明,塔里木裂腹鱼上寄生的2种线虫为杆咽线虫未定种和鲁道夫对盲囊线虫;利用最大似然法和贝叶斯法分别构建了2种线虫的分子系统发育关系,并进行分析,其中杆咽属线虫的不同种类均能形成一个单系,COⅠmtDNA序列能很好地作为分子标记对其进行分析,但由于目前公布的杆咽属线虫分子数据较少,尚需要很多数据有待补充;待测对盲囊属线虫(Contracaecum(s.l))与来自波兰、中国、意大利等地区的鲁道夫对盲囊线虫聚为一支,系统发育结果很好地佐证了该线虫为鲁道夫对盲囊线虫。这些实验结果也为杆咽属线虫和对盲囊属线虫的系统发育进化研究补充了相关资料。

关键词：塔里木裂腹鱼杆咽线虫未定种鲁道夫对盲囊线虫种类鉴定系统发育分析

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塔里木裂腹鱼胚胎和仔鱼的发育与生长

上海海洋大学学报 2013年第6期22卷 827-834页

作者：龚小玲崔忠凯吴敏芝殷建国李岩王成辉上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 新疆博湖苇业股份有限公司新疆库尔勒841000 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点开放实验室上海201306

2012年4月至6月，在新疆博湖苇业股份有限公司三苇场（新疆且末县）进行了塔里木裂腹鱼的人工繁殖和苗种培育研究。人工授精的受精率为83%，孵化率为89%。塔里木裂腹鱼受精卵在16~19 ℃下历时约93 h经过卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚... 详细信息

2012年4月至6月，在新疆博湖苇业股份有限公司三苇场（新疆且末县）进行了塔里木裂腹鱼的人工繁殖和苗种培育研究。人工授精的受精率为83%，孵化率为89%。塔里木裂腹鱼受精卵在16~19 ℃下历时约93 h经过卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、孵化期等时期孵化出膜，初孵仔鱼平均体长（7.29±0.18） mm。1~25日龄的仔鱼可分为卵黄囊期、弯曲前期、弯曲期和弯曲后期4个发育阶段；对仔鱼阶段的全长（LT）、头长（LH）、躯干长（LQ）、尾部长（LC）、眼径（D）、体高（HB）、头高（HH）、湿重（W）8项生长指标的特定生长率进行了分析，结果表明仔鱼各个阶段的发育是异速的；仔鱼全长、尾部长、头长、头高、体高、眼径的生长方程都为二次多项式，体长与体质量之间呈指数相关。

关键词：塔里木裂腹鱼胚胎仔鱼发育生长

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塔里木裂腹鱼肌肉营养成分分析与品质评价

营养学报 2013年第2期35卷 203-205页

作者：魏杰王帅聂竹兰马振华塔里木大学动物科学学院/新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300 中国水产科学研究院南海水产研究所广州510300

塔里木裂腹鱼（Schizothorax biddulphi）属鲤形目，鲤科，裂腹鱼亚科，裂腹鱼属，属冷水性鱼类，与新疆的其它裂腹鱼类被当地渔民合称为“新疆鱼”，深受当地居民的喜爱。塔里木裂腹鱼是新疆特有鱼类。目前国内外有关塔里木裂腹鱼的研... 详细信息

塔里木裂腹鱼（Schizothorax biddulphi）属鲤形目，鲤科，裂腹鱼亚科，裂腹鱼属，属冷水性鱼类，与新疆的其它裂腹鱼类被当地渔民合称为“新疆鱼”，深受当地居民的喜爱。塔里木裂腹鱼是新疆特有鱼类。目前国内外有关塔里木裂腹鱼的研究资料主要集中在基础生物学、遗传多样性及特化等级等方面，而关于塔里木裂腹鱼的营养成分和品质评价尚未见到相关报道。

关键词：塔里木裂腹鱼肌肉营养成分品质评价

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塔里木裂腹鱼体长、体质量的关联分析

渔业研究 2021年第4期43卷 403-409页

作者：李艳慧聂竹兰魏杰塔里木大学生命科学学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300

旨在明确塔里木裂腹鱼体长、体质量的关系,为塔里木裂腹鱼的合理利用及保护提供理论支持。本文根据2018年5月塔里木河流域拖网调查资料,在实验室中收集塔里木裂腹鱼体长、体质量数据,运用预报性回归法拟合体长-体质量幂函数表达式,并进... 详细信息

旨在明确塔里木裂腹鱼体长、体质量的关系,为塔里木裂腹鱼的合理利用及保护提供理论支持。本文根据2018年5月塔里木河流域拖网调查资料,在实验室中收集塔里木裂腹鱼体长、体质量数据,运用预报性回归法拟合体长-体质量幂函数表达式,并进一步计算肥满度,分析雌、雄两个群体间差异的显著性。结果显示:雌性群体体长、体质量均小于雄性群体,且两个群体体长分布均符合正态分布,两个群体之间差异不显著,运用Fulton状态指数K表示塔里木裂腹鱼肥满度,雄性肥满度高于雌性,且两者之间差异显著,塔里木裂腹鱼的体长、性别与肥满度之间的相关性较大(P<0.05);拟合体长-体质量方程,雌性为W=0.000023×L^(2.8668)(r=0.9768),雄性为W=0.000049×L^(2.7013)(r=0.9529),雌、雄群体均为异速增长,且两群体体长-体质量关系参数a、b均无异常值。

关键词：塔里木裂腹鱼体长体质量