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基质金属蛋白酶组织抑制因子-1对小鼠肝脏肝脏巨噬细胞募集作用的研究

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临床和实验医学杂志 2018年第6期17卷 561-564页

作者：王燕红郑书全黄小莉刘天会王萍刘涛高山郭良霞尤红丛敏首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心北京100050 苏州瑞博生物技术有限公司(北京) 北京100050

目的观察用脂质载体Lipidoid携带小干扰RNA(siRNA)的方式降低小鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达对肝脏巨噬细胞募集的影响。方法 8周龄雄性C57BL/6小鼠分别给予四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠肝脏纤维化模型,造模同... 详细信息

目的观察用脂质载体Lipidoid携带小干扰RNA(siRNA)的方式降低小鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达对肝脏巨噬细胞募集的影响。方法 8周龄雄性C57BL/6小鼠分别给予四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠肝脏纤维化模型,造模同时尾静脉注射Lipidoid、Lipidoid/siRNA-TIMP-1。应用Masson染色评估各组小鼠肝脏纤维化程度;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测Lipidoid/siRNA-TIMP-1对小鼠肝脏组织TIMP-1蛋白以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响;通过F4/80染色,观察Lipidoid/siRNA-TIMP-1降低TIMP-1后对小鼠肝脏纤维化过程中巨噬细胞募集的影响。结果 Masson染色发现,CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型中,Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够缓解肝脏纤维化程度;qRT-PCR和Western blotting显示Lipidoid/siRNA-TIMP-1治疗组较CCl4+Lipidoid对照组小鼠肝脏组织中TIMP-1蛋白表达降低(P蛋白的表达也受到抑制;F4/80染色结果提示,Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够减少巨噬细胞在CCl4诱导的小鼠纤维化肝脏组织中的募集。结论 Lipidoid/siRNA-TIMP-1能够有效降低小鼠肝脏组织中TIMP-1的表达,影响巨噬细胞募集,发挥抗纤维化作用。

关键词：小鼠肝脏纤维化基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝脏巨噬细胞单核细胞趋化因子-1

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在肝硬化组织中的表达及意义

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新疆医科大学学报 2007年第10期30卷 1128-1129页

作者：蒋莹赵文军新疆医科大学第二附属医院感染科新疆乌鲁木齐830028

目的:了解基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在肝硬化组织中的表达和分布状态。方法:采用免疫组化法(S-P)检测52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1的表达。结果:52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1蛋白表达的阳性率为100%,而正常肝组织未见阳... 详细信息

目的:了解基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在肝硬化组织中的表达和分布状态。方法:采用免疫组化法(S-P)检测52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1的表达。结果:52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1蛋白表达的阳性率为100%,而正常肝组织未见阳性表达,差异有统计学意义(P组织病理改变相关。(2)检测TIMP-1的表达可对肝硬化病变从分子水平进行评估,也可作为早期诊断及临床治疗和判断预后的分子病理学指标。

关键词：肝硬化基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 细胞外基质免疫组织化学

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达与Dukes A和B期大肠癌预后的关系

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中国消化内镜 2009年第2期3卷 39-43页

作者：马岚青段丽平刁畅陈娅蓉张磊张洪斌昆明医学院第一附属医院消化内科 650032 昆明医学院第一附属医院胃肠外科昆明医学院第一附属医院肿瘤治疗中心

目的研究DukesA和B期大肠癌标本中基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达与预后的关系。方法62例DukesA和B期大肠癌手术切除标本,采用RT-PCR法测定肿瘤组织中TIMP-1 mRNA表达,所有患者接受5年以上随访。结果在随访期内出现局部... 详细信息

目的研究DukesA和B期大肠癌标本中基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达与预后的关系。方法62例DukesA和B期大肠癌手术切除标本,采用RT-PCR法测定肿瘤组织中TIMP-1 mRNA表达,所有患者接受5年以上随访。结果在随访期内出现局部复发或远处转移的患者与无复发或转移的患者相比,其TIMP-1基因表达存在显著性差异。结论通过测定肿瘤标本中TIMP-1基因表达可能预测DukesA和B期大肠癌局部复发或远处转移的危险性。

关键词：大肠癌基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

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基质金属蛋白酶组织抑制因子-1与肝纤维化

河北医药 2006年第2期28卷 126-128页

作者：缪伟峰薛博瑜南京中医药大学 2003级硕士研究生210029 南京中医药大学第一临床医院内科教研室

肝纤维化的主要病理变化就是细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)在肝脏中过多沉积。肝脏ECM的代谢主要由基质金属蛋白酶(matrix metal protease,MMPs)及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metal protease,TIMPs)所调节,MMPs促进ECM的降解,而TIMPs通过抑制MMPs,阻止ECM的降解,从而形成或促进肝纤维化。实验及临床研究表明,肝脏中仅有基质金属蛋白酶组织抑制因子-1,-2T(TIMP-1、TIMP-2)存在,对肝纤维化的诊断,TIMP-1的特异性和敏感性均明显高于TIMP-2。因此,越来越多的研究人员将TIMP-1看作是肝纤维化发生过程中一个非常重要的促发因素。[第一段]

关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝纤维化 protease TIMP-1 matrix TIMP-2 MMPs 细胞外基质 TIMPs ECM

重组腺病毒介导基质金属蛋白酶组织抑制因子-1对人肝癌HepG2细胞的影响与作用机制

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中华肿瘤杂志 2007年第11期29卷 813-817页

作者：夏冬徐亮付华綦晓龙权毅严律南泸州医学院附属医院普外科 646000 四川大学华西医院普外科

目的探讨携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)的重组腺病毒(AdhTIMP-1)对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、转移、凋亡以及瘤内血管生成的作用。方法构建AdhTIMP-1并感染人肝癌HepG2细胞,采用Boyden chamber检测细胞体外侵袭能力;感... 详细信息

目的探讨携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)的重组腺病毒(AdhTIMP-1)对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、转移、凋亡以及瘤内血管生成的作用。方法构建AdhTIMP-1并感染人肝癌HepG2细胞,采用Boyden chamber检测细胞体外侵袭能力;感染AdhTIMP-1的HepG2细胞接种于裸鼠皮下观察其成瘤情况;建立荷瘤鼠模型,瘤内注射AdhTIMP-1,观察其对肿瘤生长的作用;处死荷瘤鼠,计数肺转移结节;CD34免疫组化观察肿瘤血管生成;原位末端标记(TUNEL)法检测肝癌细胞凋亡。结果AdhTIMP-1感染的HepG2细胞体外侵袭力下降91.4%,成瘤量下降75.8%,荷瘤鼠瘤体内注射AdhTIMP-1使肿瘤生长减少45.4%,组织血管密度减少47.8%,肺转移结节减少70.4%,肿瘤组织中细胞凋亡则增加了3倍。结论AdhTIMP-1能抑制肝癌HepG2细胞的侵袭、转移及瘤内血管形成,诱导肝癌细胞凋亡,可用于肝癌基因治疗的研究。

关键词：肝肿瘤重组腺病毒基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

甘草甜素下调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因的表达

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世界华人消化杂志 2005年第18期13卷 2183-2187页

作者：王巧侠成军郭江李文凡魏红山兰州大学临床医学院甘肃省兰州市730000 北京地坛医院传染病研究所北京市100011 甘肃省人民医院消化科甘肃省兰州市730000

目的:了解甘草甜素对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子活性的调节作用,探讨甘草甜素的抗纤维化机制.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子,命名为TIMP-1P,以T-A克隆法,将TIMP-1P基因片段连入载... 详细信息

目的:了解甘草甜素对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子活性的调节作用,探讨甘草甜素的抗纤维化机制.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子,命名为TIMP-1P,以T-A克隆法,将TIMP-1P基因片段连入载体pGEM-Teasy.将获得的质粒pGEMTeasy-TIMP-1P,与报告质粒pCAT3-basic分别用NheI和XhoI双酶切后构建TIMP-1启动子报告基因表达载体pCAT3-TIMP-1P,以重组表达质粒pCAT3-TIMP-1P瞬时转染HepG2细胞,4h后以0.1mmol甘草甜素刺激,48h后收获细胞.同时以转染pCAT3-basic的HepG2细胞为阴性对照,每组设复孔对照,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测标本在415nm波长的吸光度值,其数值反映细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达水平.结果:构建的报告基因表达载体pCAT3-TIMP-1P经过序列分析和酶切鉴定正确.瞬时转染HepG2细胞后,pCAT3-basic的吸光度值为0.004±0.002,pCAT3-TIMP-1P为2.329±0.685,经方差分析两者差异有统计学意义(F=26.075,P抑制TIMP-1的基因表达.

关键词：甘草甜素基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 抗纤维化

2型糖尿病患者基质金属蛋白酶组织抑制因子-1的表达及与空腹血糖的相关性

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中国老年学杂志 2014年第24期34卷 6894-6896页

作者：戴荣峰何军常州市第三人民医院内分泌科江苏常州213000

目的探讨2型糖尿病患者基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1的表达及与空腹血糖的相关性。方法收集该院内分泌科2010年1月至2013年12月住院的2型糖尿病患者21例作为病例组,另选取体检正常者21例作为对照组,利用双抗体夹心ELISA法测定血... 详细信息

目的探讨2型糖尿病患者基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1的表达及与空腹血糖的相关性。方法收集该院内分泌科2010年1月至2013年12月住院的2型糖尿病患者21例作为病例组,另选取体检正常者21例作为对照组,利用双抗体夹心ELISA法测定血浆TIMP-1水平,AU640生化分析仪检测空腹血糖水平。结果病例组总TIMP-1表达为(4.125±1.210)ng/ml,明显高于对照组(3.214±0.125)ng/ml(P蛋白正常排泄组的总TIMP-1表达为(3.544±1.225)ng/ml,低于异常排泄组的(5.128±1.326)ng/ml(P<0.05);病例组中TIMP-1的表达随着病程逐渐升高(F=9.987,P=0.000);病例组空腹血糖平均值为(8.125±2.458)mmol/L,与血浆TIMP-1之间散点图呈负相关趋势,pearson相关性分析呈现明显的负相关(r=-0.876,P=0.000)。结论 2型糖尿病患者血浆TIMP-1的表达水平比正常者高,并且随着病程逐渐增高。与空腹血糖之间呈现明显负相关关系。

关键词： 2型糖尿病基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 空腹血糖

子宫内膜异位症中膜型1-基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的研究

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中国实用妇科与产科杂志 2006年第5期22卷 367-368页

作者：孔丽娜孙青李书勤李铁臣卢林明皖南医学院附属弋矶山医院安徽芜湖241001 皖南医学院安徽芜湖241001

目的探讨膜型1-基质金属蛋白酶(MT1-MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在子宫内膜异位症发生中的作用。方法皖南医学院附属弋矶山医院2003-07-2004-04采用免疫组化SP方法研究25例子宫内膜异位症患者的异位内膜组织和22例正常... 详细信息

目的探讨膜型1-基质金属蛋白酶(MT1-MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在子宫内膜异位症发生中的作用。方法皖南医学院附属弋矶山医院2003-07-2004-04采用免疫组化SP方法研究25例子宫内膜异位症患者的异位内膜组织和22例正常子宫内膜组织中的MT1-MMP和TIMP-1蛋白的表达情况。结果子宫内膜异位症组中的MT1-MMP蛋白表达水平明显高于对照组(P蛋白表达水平在两组之间比较差异无显著性意义。结论MT1-MMP在子宫内膜异位症的发生发展中起一定的作用。

关键词：子宫内膜异位症膜型1-基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

荧光定量聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的建立

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中华检验医学杂志 2005年第5期28卷 533-537页

作者：丛敏阎钟钰王萍张岩徐雍卢炎王宝恩贾继东尤红首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心 100050

目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础.方法提取大鼠星状细胞系HSC-T6的mRNA,经RT-PCR扩增TIMP-1基因后与... 详细信息

目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础.方法提取大鼠星状细胞系HSC-T6的mRNA,经RT-PCR扩增TIMP-1基因后与pGMT-Vector 连接,转化到大肠杆菌DH5α,以筛选得到的阳性克隆质粒作为标准品进行梯度稀释,分别用Taqman荧光探针技术和SYBR Green I荧光染料技术进行荧光定量PCR检测,建立标准曲线,并对两者结果进行了对比.同时进行普通PCR检测,与荧光定量PCR方法检测结果进行比较.结果重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pGMT-TIMP-1基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增, 应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线的线性检测范围为7×104～7×108拷贝,检测灵敏度为7×104拷贝;应用SYBR Green I荧光染料技术的线性检测范围为7×106～7×108拷贝,检测灵敏度为7×106拷贝,且熔解曲线显示出现非特异性扩增;两种技术相对于普通PCR技术均具有定量功能.结论所构建的pGMT-TIMP-1基因荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好, 灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为荧光定量PCR检测TIMP-1基因的标准方法.

关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 荧光定量聚合酶链反应检测 Taqman荧光探针技术荧光定量PCR检测 TIMP-1基因聚合酶链反应(PCR) 荧光定量PCR方法 RT-PCR扩增 Green 检测灵敏度标准曲线 HSC-T6 重组质粒 SYBR 荧光染料