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低温冻存对骨髓基质细胞生物学特性的影响

中国应用生理学杂志 2003年第3期19卷 306-309页

作者：杨平地黄友章沈建良兰雨向丹海军总医院血液科北京100037

目的 :探讨低温冻存对骨髓细胞和贴壁基质细胞生物学特性的影响。方法 :取新鲜骨髓和经Dexter法培养 1 4d的骨髓贴壁基质细胞 (称“基质细胞”) ,经 - 1 96℃液氮冻存 (前者称“冻存骨髓” ,后者称“冻存基质细胞”) 2周 ,复温 ,再用Dex... 详细信息

目的 :探讨低温冻存对骨髓细胞和贴壁基质细胞生物学特性的影响。方法 :取新鲜骨髓和经Dexter法培养 1 4d的骨髓贴壁基质细胞 (称“基质细胞”) ,经 - 1 96℃液氮冻存 (前者称“冻存骨髓” ,后者称“冻存基质细胞”) 2周 ,复温 ,再用Dexter法培养这些细胞 ,检测细胞增殖、细胞形态、细胞化学染色、细胞表面抗原及基质细胞支持另一骨髓造血细胞形成的鹅卵石造血区 (CAFC) ,长期培养起始细胞 (LTC IC)的变化 ,比较冻存对骨髓细胞和基质细胞生物学特性的影响。结果 :生长特性 :冻存骨髓比新鲜骨髓、冻存基质细胞比新鲜基质细胞培养后融合成片的时间延迟 ,细胞增殖数比也有减低。细胞成分 :冻存骨髓比新鲜骨髓形成的成纤维细胞、内皮细胞比率下降 ,而巨噬细胞和脂肪细胞比率升高 ,冻存基质细胞上述现象更明显 ;冻存后含凋亡小体的细胞在骨髓细胞和基质细胞内均有增加。细胞表面抗原 :冻存骨髓、冻存基质细胞CD1 4、HLA DR抗原表达百分率比新鲜骨髓、新鲜基质细胞高 ,CD45、CD33反之。支持造血 :冻存前后骨髓和基质细胞支持形成的CAFC和LTC IC ,生长良好 ,无显著差异。结论 :骨髓细胞和经培养生成的贴壁基质细胞 ,经冻存和复温 ,生物学特性有一定变化 ,但仍可以保留良好的支持造血重建功能。

关键词：低温冻存骨髓基质细胞生物学特性

siRNA沉默HIF-1α对胎肝基质细胞SDF-1α表达的影响

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生物化学与生物物理进展 2007年第10期34卷 1040-1048页

作者：吉蕾习佳飞袁红丰张鹏刘雨潇王韫芳施双双陈琳南雪白慈贤裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染... 详细信息

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式细胞分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测了转染细胞中HIF-1α基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,常氧下培养的细胞HIF-1α基因表达量仅为其相对表达量的18.8%和25.5%,干涉效率分别为81.2%和74.5%,低氧处理后的细胞HIF-1α相对表达量分别为对照组的21.2%和29.3%,干涉效率分别为78.8%和70.7%,均具有显著差异.蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达也明显受抑制,且重组干涉质粒pSicoR-HIF-1α1的干涉效应较强.RT-PCR、免疫荧光和ELISA法检测了沉默HIF-1α后胎肝基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)在RNA和蛋白质水平的表达变化,干涉后细胞SDF-1α的表达明显减低.低氧条件下SDF-1α基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在干细胞增殖分化的分子调控机制中具重要作用.

关键词： siRNA 基因沉默低氧诱导因子1α 慢病毒基质细胞基质细胞衍生因子1α

慢病毒介导的稳定表达bFGF的胎儿肝脏基质细胞株的建立

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生物化学与生物物理进展 2007年第2期34卷 207-214页

作者：习佳飞王韫芳张鹏袁红丰施双双闫舫陈琳白慈贤南雪裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetalliverstromalcell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长... 详细信息

通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetalliverstromalcell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长特性和表面标志的鉴定,其在体外维持传代35代,依然保持正常的染色体核型.从胎儿骨髓间充质干细胞中克隆得到bFGF基因,构建重组慢病毒载体,感染FLSC,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的低表达和高表达bFGF的两株细胞,RT-PCR和蛋白质印迹证实,细胞株中bFGF基因的稳定表达.RT-PCR结果显示,弱荧光和强荧光表达细胞的bFGF,在mRNA水平的表达分别是转染空载体细胞的2.33倍和6.19倍;蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达分别是1.76倍和5.05倍.用建立的bFGF/FLSC作饲养层细胞体外培养人胚胎干细胞(humanembryonicstemcells,hES),结果证明,其能在无或少量添加外源bFGF的条件下,维持人ES细胞增殖及其干性达20代.bFGF/FLSC细胞株的建立,将为构建低成本、安全高效的人胚胎干细胞的培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境.

关键词：胎儿肝脏基质细胞慢病毒碱性成纤维细胞生长因子转基因人胚胎干细胞

Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株Sup-B15与基质细胞共培养后对伊马替尼敏感性的变化

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中华血液学杂志 2015年第6期36卷 460-464页

作者：张焕新陈翀闫志凌宋旭光陈伟李德鹏邱婷婷张璞曾令宇李振宇徐开林徐州医学院附属医院血液科 221000

目的探讨基质细胞OP9能否影响ph＋急性淋巴细胞白血病细胞株Sup-B15细胞对伊马替尼的敏感性以及作用机制.方法实验分为Sup-B15细胞组及基质细胞OP9与Sup-B15共培养组（即Sup-B15/OP9组）.采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检... 详细信息

目的探讨基质细胞OP9能否影响ph＋急性淋巴细胞白血病细胞株Sup-B15细胞对伊马替尼的敏感性以及作用机制.方法实验分为Sup-B15细胞组及基质细胞OP9与Sup-B15共培养组（即Sup-B15/OP9组）.采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检测Annexin V/7-AAD标记的细胞凋亡率、CD34＋CD38-细胞比例;荧光定量PCR检测细胞ALDH1、CD144、β-catenin mRNA水平;Western blot法检测细胞CD133、CD144、β-catenin蛋白表达水平;免疫共沉淀方法检测结合于CD144的β-catenin水平.结果 10～45 μmol/L伊马替尼对Sup-B15、Sup-B15/OP9细胞均有增殖抑制作用,其IC50值分别为26.3和35.8 μmol/L,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.30 μmol/L伊马替尼作用于Sup-B15、Sup-B15/OP9细胞24h,细胞总凋亡率分别为（14.24±2.11）％和（3.45±0.68）％,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.与Sup-B15组相比,Sup-B15/OP9组CD34＋CD38-细胞比例增高[（3.42±0.28）％对（2.16±0.15）％,P＜0.05],ALDH1 mRNA水平增高（0.097±0.012对0.046±0.010,P＜0.05）,CD133蛋白表达水平升高;CD144 mRNA水平增高（0.103±0.015对0.010±0.003,P＜0.05）,CD144蛋白表达水平亦明显增高;β-catenin mRNA水平无明显变化（P＞0.05）,其蛋白总量明显上升,转位到细胞核的β-catenin蛋白明显增加,结合于CD144的β-catenin蛋白增加.结论与OP9细胞共培养后,Sup-B15细胞对伊马替尼敏感性下降,该作用可能与上调CD144表达、稳定CD144/β-catenin信号通路、增加β-catenin核转位有关.

关键词：费城染色体白血病,淋巴细胞,急性抗原,CD144 β-catenin 基质细胞

17β-雌二醇对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙的快速调节效应

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生理学报 2008年第2期60卷 169-174页

作者：王强岳利民张金虎田吉梅何亚萍四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

本文旨在研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙振荡的影响和机制,探讨E2对着床期子宫内膜基质细胞是否存在非基因组快速作用。实验的第一部分,小鼠分为6组,每组4只,即0.1%二甲基亚砜(dimethylsulfox... 详细信息

本文旨在研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙振荡的影响和机制,探讨E2对着床期子宫内膜基质细胞是否存在非基因组快速作用。实验的第一部分,小鼠分为6组,每组4只,即0.1%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)对照组、1×10-8mol/L牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)对照组、1×10-8mol/L E2组、1×10-8mol/L E2-BSA组、1×10-8mol/L E2+无钙液组、1×10-8mol/L E2+5μg/mL他莫西芬(tamoxifen)组。急性分离延迟着床小鼠孕第7天子宫内膜基质细胞,应用激光共聚焦显微镜技术实时检测各组基质细胞[Ca2+]i的变化。实验的第二部分,分离7只延迟着床小鼠孕第7天子宫内膜基质细胞,用免疫荧光法检测1×10-8mol/L E2作用前和作用后5min、15min、30min细胞内磷酸化磷脂酶C(phospholipase C,PLC)的变化。基质细胞[Ca2+]i的变化结果显示,在E2,E2-BSA和E2+无钙液组中[Ca2+]i均明显升高,15min达到高峰,随后下降回到基础值。但DMSO和BSA组中[Ca2+]i未见明显变化;加入传统雌激素胞浆受体阻断剂tamoxifen不能抑制E2引起的[Ca2+]i升高。免疫荧光结果显示,加入1×10-8mol/L E2后,PLC的磷酸化水平升高,15min达高峰(P基质细胞[Ca2+]i的变化具有快速调节效应,该作用可能是通过非基因组途径实现的,与磷酸化PLC信号途径有关。

关键词：雌激素磷脂酶C 钙基质细胞

促红细胞生成素基因修饰的胎肝基质细胞促进脐血CD34+细胞向红系分化

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生物化学与生物物理进展 2010年第4期37卷 381-388页

作者：杨超吉蕾施双双岳文何丽娟南雪裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 中国科学院动物研究所计划生育与生殖生物学国家重点实验室北京100101

通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetal liver stromal cells,FLSCs),建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的细胞株EPO/FLSCs.从胎儿肝脏克隆EPO基因,构建重组慢病毒EPO的表达载体,感染FLSCs,根据荧光表达... 详细信息

通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetal liver stromal cells,FLSCs),建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的细胞株EPO/FLSCs.从胎儿肝脏克隆EPO基因,构建重组慢病毒EPO的表达载体,感染FLSCs,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的高表达EPO基因的FLSCs,RT-PCR和ELISA结果证实,细胞株中的EPO基因稳定表达.RT-PCR结果显示,FLSCs的EPO在mRNA水平的表达分别是未转染FLSCs和转染空载体FLSCs的5.63倍和5.71倍.ELISA法检测了转染重组慢病毒EPO表达载体的FLSCs EPO蛋白表达水平,结果显示EPO蛋白的表达水平也明显升高.收集EPO/FLSCs的条件培养基,体外诱导脐血CD34+细胞向造血细胞分化,结果显示向红系定向分化的细胞比例明显居多,有可能为临床细胞治疗提供稳定、高质量的细胞来源.

关键词：胎儿肝脏基质细胞慢病毒促红细胞生成素转基因

基质细胞调节的EMT在肿瘤浸润转移中作用的研究进展

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生命科学 2021年第1期33卷 95-103页

作者：路小超宗如月罗新鹏赵同军河北工业大学理学院生物物理研究所天津300401

恶性肿瘤的浸润转移是肿瘤恶变的主要表现形式之一,而上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是造成肿瘤浸润转移的重要机制。肿瘤细胞通过EMT获得迁移性,进而从原发灶脱离进入血液,随血液循环流动,然后从血管溢出并定植... 详细信息

恶性肿瘤的浸润转移是肿瘤恶变的主要表现形式之一,而上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是造成肿瘤浸润转移的重要机制。肿瘤细胞通过EMT获得迁移性,进而从原发灶脱离进入血液,随血液循环流动,然后从血管溢出并定植,形成转移灶。EMT的发生与分布在肿瘤周围的基质细胞有密切的关系,受到基质细胞分泌的多种细胞因子的调节。该文就近年来基质细胞调节的EMT在肿瘤浸润转移中作用的研究加以综述,讨论各种基质细胞对EMT诱导的影响,重点讨论肿瘤微环境中对EMT影响较大的几类基质细胞与EMT之间的关系。

关键词：肿瘤微环境上皮间质转化基质细胞细胞因子

三类骨髓基质细胞条件培养液体外扩增巨核系细胞

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生理学报 2005年第2期57卷 247-253页

作者：黄艳红王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

为了研究骨髓成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞条件培养液对巨核细胞的体外扩增作用,本文通过分离纯化骨髓成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞,收集无血清骨髓成纤维细胞条件培养液(fibroblast conditioned medium,F-CM)、骨髓内皮细胞条件... 详细信息

为了研究骨髓成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞条件培养液对巨核细胞的体外扩增作用,本文通过分离纯化骨髓成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞,收集无血清骨髓成纤维细胞条件培养液(fibroblast conditioned medium,F-CM)、骨髓内皮细胞条件培养液(endothelial cell conditioned medium,E-CM)和骨髓巨噬细胞条件培养液(macrophage conditioned medium,M- CM),分别离心、超滤,获得原液、分子量(MW)>10 kDa组分及MW 10 kDa组分和细胞体外液体培养体系,观察成熟巨核细胞的生成。结果表明:F-CM和E-CM 及其>10 kDa组分加入培养体系后,成熟巨核细胞的生成显著增多,分别为对照组的(287.33±16.77)%、(141.21±17.47)%、(236.67±39.72)%和(179.03±30.98)%;F-CM的作用明显大于E-CM(P10 kDa组分和细胞数无明显改变。分别将F-CM、E-CM、M-CM加入巨核细胞液体扩增体系,24 h后取细胞作巨核细胞集落形成单位(colony forming unit-megakaryocyte,CFU-Meg)的测定。结果表明:F-CM和E-CM对CFU-Meg生成均有促进作用,M-CM对CFU-Meg生成无明显影响,扩增强度分别为扩增前的(168.18 ±30.24)%、(215.17±17.4)%和(85.0±7.0)%。逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT- PCR)实验结果表明:骨髓成纤维细胞表达促血小板生成素(thrombopoietin,TPO),不表达转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1);骨髓内皮细胞表达TGF-β1,不表达TPO。上述结果提示:F-CM、E-CM及其>10 kDa组分均对巨核系成熟细胞及巨核系祖细胞体外扩增有促进作用;F-CM对巨核系成熟细胞体外扩增的促进作用强于E-CM。

关键词：骨髓基质细胞条件培养液巨核细胞扩增

用芯片技术分析鼻咽癌周围的基质细胞基因表达特点

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癌症 2003年第3期22卷 235-238页

作者：李虹韩为农冯湘玲周文姚开泰中南大学湘雅医学院肿瘤研究所分子病理学研究室

背景与目的:鼻咽的基质细胞是如何参与鼻咽癌的癌变过程一直是研究的热点,本研究利用芯片技术分析鼻咽癌周围的基质细胞基因表达特点,探讨基质细胞在鼻咽癌发生和发展中的可能机制。方法:采用atlashumanselecttumorarray滤膜,通过比较... 详细信息

背景与目的:鼻咽的基质细胞是如何参与鼻咽癌的癌变过程一直是研究的热点,本研究利用芯片技术分析鼻咽癌周围的基质细胞基因表达特点,探讨基质细胞在鼻咽癌发生和发展中的可能机制。方法:采用atlashumanselecttumorarray滤膜,通过比较鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系的基因表达谱,获得鼻咽癌周围的基质细胞基因表达特点。结果:鼻咽癌周围的基质细胞至少可以特异地表达40个基因显示。结论:鼻咽癌周围的基质细胞具有基因的特异表达。

关键词：鼻咽肿瘤基质细胞基因表达