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miR⁃26a⁃5p靶向PTEN基因影响成骨细胞分化及基质矿化

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中国骨质疏松杂志 2022年第8期28卷 1126-1130,1138页

作者：叶恒张卫华韩俊张建业蒋现永武汉科技大学附属汉阳医院骨一科湖北武汉430050

目的探究微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)对第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)的靶向作用及对成骨细胞分化及基质矿化的影响。方法通过在线软件预测miR-26a-5p与PTEN基因的结合位点,并经双荧光素酶报告基因检测验证。取生长状... 详细信息

目的探究微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)对第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)的靶向作用及对成骨细胞分化及基质矿化的影响。方法通过在线软件预测miR-26a-5p与PTEN基因的结合位点,并经双荧光素酶报告基因检测验证。取生长状态良好的MC3T3-E1细胞,分为miR-26a-5p模拟物(mimic)组、miR-26a-5p mimic阴性对照(NC)组、pcDNA3.1-PTEN组、miR-26a-5p+pcDNA3.1-PTEN组,通过MTT法检测细胞增殖、碱性磷酸酶活性测定研究细胞分化情况、骨钙素定量检测分析和茜素红染色观察细胞基质矿化情况、Western blot检测成骨分化标志物和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达变化。结果与NC组比较,miR-26a-5p mimic组miR-26a-5p水平、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素、矿化率及β-catenin表达升高,PTEN mRNA及蛋白表达和糖原合成酶激酶-3b(Gsk-3b)表达降低(P矿化率及β-catenin表达降低(P矿化率及β-catenin表达降低(P基质矿化。

关键词：微小RNA-26a-5p 分化能力基质矿化第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因 Wnt/β-catenin信号通路

microRNA-494通过TLR-4通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制

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中国比较医学杂志 2018年第10期28卷 55-60页

作者：匡嘉兵徐昊张克良沈波许闫严武汉市普爱医院暨华中科技大学同济医学院附属普爱医院西院骨一科武汉430030

目的探讨microRNA-494(miR-494)通过Toll样受体-4(TLR-4)通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制。方法选用小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为体外模型,采用miR-494 mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3-E1,采用qRT-PCR法测定miR-494在小鼠成骨... 详细信息

目的探讨microRNA-494(miR-494)通过Toll样受体-4(TLR-4)通路抑制成骨细胞分化及基质矿化的分子机制。方法选用小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为体外模型,采用miR-494 mimic转染小鼠成骨细胞株MC3T3-E1,采用qRT-PCR法测定miR-494在小鼠成骨细胞株MC3T3-E1转染前后的表达情况;通过MTT法检测转染前后小鼠成骨细胞株MC3T3-E1的增殖情况;通过测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,研究小鼠成骨细胞株MC3T3-E1的分化情况;通过骨钙素(osteocalcin,OC)定量检测分析和Von Kossa钙化染色检测小鼠成骨细胞株MC3T3-E1的基质矿化情况;通过Western blot等检测转染前后TLR-4蛋白的表达差异。结果 qRT-PCR测定结果显示,与阴性对照组相比,小鼠成骨细胞株MC3T3-E1转染后的miR-494的mRNA的表达量升高(P矿化结节的数目、减少(P矿化结节数,抑制成骨细胞分化及基质矿化。

关键词： microRNA-494 成骨细胞基质矿化 TLR-4

骨碎补提取液及柚皮甙对小鼠成骨细胞MC3T3-E1基质矿化作用影响的比较研究

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口腔医学 2009年第8期29卷 403-404,408页

作者：唐琪王仁飞王维倩丁佩惠陈莉丽杭州口腔医院牙周科杭州310006 浙江大学医学院附属第二医院口腔科杭州310006

目的比较骨碎补水、醇提取液及柚皮甙对小鼠成骨细胞MC3T3-E1基质矿化作用的影响。方法制备骨碎补的水、醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为细胞模型,用Von kossa钙化染色法了解上述药物提取液对成骨细胞基质矿化作用的影响。结果1 m... 详细信息

目的比较骨碎补水、醇提取液及柚皮甙对小鼠成骨细胞MC3T3-E1基质矿化作用的影响。方法制备骨碎补的水、醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为细胞模型,用Von kossa钙化染色法了解上述药物提取液对成骨细胞基质矿化作用的影响。结果1 mg/L骨碎补水提液及0.01 mg/L骨碎补醇提液均可提高MC3T3-E1细胞体外钙化点面积百分比(P基质矿化的物质。

关键词：中药骨碎补柚皮甙成骨细胞基质矿化

柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

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中国中药杂志 2009年第13期34卷 1712-1716页

作者：丁佩惠唐琪陈莉丽浙江大学医学院附属第二医院口腔科浙江杭州310006 杭州口腔医院浙江杭州310006

目的:检测骨碎补有效成分柚皮苷对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法:以成骨细胞株MC3T3-E1细胞为体外药效的试验模型(药物组和对照组),通过CCK-8法观察10,1,0.1,0.01,0.001,0.000 1μmol.L-1的柚皮苷溶液对MC3T3-E1... 详细信息

目的:检测骨碎补有效成分柚皮苷对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法:以成骨细胞株MC3T3-E1细胞为体外药效的试验模型(药物组和对照组),通过CCK-8法观察10,1,0.1,0.01,0.001,0.000 1μmol.L-1的柚皮苷溶液对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响;通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验观察以上浓度的柚皮苷溶液对细胞毒性能力的影响。通过骨形成蛋白-2(BMP-2),碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞分化能力的影响;通过Von kossa钙化染色法观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响。结果:高浓度的柚皮苷溶液在12 h和24 h时能促进MC3T3-E1细胞的增殖作用。而低浓度的柚皮苷溶液则无此作用。所测的各个组别细胞毒性百分比都较小,且随着时间的推移(12,24,48 h)变化较小。光镜下观察各个时间点细胞的密度和形态也未发生明显的变化。BMP-2细胞免疫化学结果表明,24,48 h时柚皮苷浓度10,1,0.1μmol.L-1包浆内棕色着色比对照组明显。ALP检测结果表明48 h时,1,0.1μmol.L-1的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05)。72 h时,0.1μmol.L-1的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05)。OC检测结果表明12 d时,10,1μmol.L-1柚皮苷溶液作用组与对照组相比OC活性明显提高(P<0.05)。Vonkossa染色钙化面积百分比结果表明3组柚皮苷溶液作用组与对照组相比无明显区别。结论:柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖能力和分化能力。

关键词：柚皮苷成骨细胞增殖分化基质矿化

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

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中国药理学通报 2010年第4期26卷 509-513页

作者：武密山赵素芝李恩白霞河北医科大学中医学院河北石家庄050091 河北医科大学生化教研室河北石家庄050091 石家庄市桥东区医院河北石家庄050041

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性... 详细信息

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。

关键词：梓醇地黄成骨细胞增殖分化基质矿化

中药地龙提取液的促成骨作用及对实验性牙槽骨吸收疗效的研究

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浙江大学学报（理学版） 2008年第6期35卷 684-689页

作者：丁佩惠唐琪陈莉丽严杰浙江大学医学院附属第二医院口腔科浙江杭州310006 杭州口腔医院浙江杭州310006 浙江大学医学院病原生物学教研室浙江杭州310058

探讨了中药地龙水提液和醇提液有无促进成骨细胞增殖、分化和基质矿化的作用及对大鼠牙槽骨吸收疗效进行了研究.制备地龙的水相及醇相提取液,以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为体外药效的试验模型,分别通过MTT法,流式细胞术,碱性磷酸酶活性... 详细信息

探讨了中药地龙水提液和醇提液有无促进成骨细胞增殖、分化和基质矿化的作用及对大鼠牙槽骨吸收疗效进行了研究.制备地龙的水相及醇相提取液,以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为体外药效的试验模型,分别通过MTT法,流式细胞术,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Vonkossa基质矿化染色法观察上述药物的促细胞增殖、分化、基质矿化作用.以实验牙位龈正中注射脂多糖建立的SD大鼠实验性牙槽骨吸收作为体内药效试验模型,通过组织切片形态学骨密度观察和抗酒石酸酸性磷酸酶染色评价上述药物对大鼠实验性牙槽骨吸收的疗效.结果发现:1mg.L-1水提液,0.01mg.L-1和1mg.L-1醇提液能显著促进MC3T3-E1细胞增殖.各浓度的水提液和醇提液均能使S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少.0.01mg.L-1水提液和1mg.L-1醇提液作用于细胞的第1～3d内、100mg·L-1醇提液作用第7～9d内、100mg·L-1水提液作用第10～12d内可显著提高细胞骨钙素合成和分泌.0.01mg·L-1水提液和醇提液,1mg·L-1水提液可显著促进细胞体外基质矿化.地龙水提液和醇提液组的骨密度均有显著增高,破骨细胞数显著降低.阴性对照组至第30d时牙槽骨仍可见大量破骨细胞.结果表明:地龙水相和醇相提取物中均存在较高活性的促成骨细胞增殖、分化和基质矿化的物质,且对实验性牙槽骨吸收模型有一定治疗作用,可抑制其牙槽骨吸收,促进成骨活动使其修复重建.

关键词：中药地龙成骨细胞增殖分化基质矿化实验性牙槽骨吸收模型

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牙本质形成的研究进展

上海医学 2004年第7期27卷 534-536页

作者：梅丽琴石四箴同济大学儿童口腔医学研究所上海200032

牙本质形成包括细胞分化、成牙本质细胞分泌细胞外基质及基质矿化.目前认为这一过程有很多因素参与调控,如特异性蛋白、骨形成蛋白(BMP)及多种生长因子.现就近年牙本质形成有关影响因素的报道作一综述.……

关键词：牙本质形成研究进展骨形成蛋白基质矿化成牙本质细胞

新疆马鹿角提取物对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

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中成药 2012年第1期34卷 148-151页

作者：刘盟马玉高晓黎魏丽阿尔孜古丽.吐尔逊新疆医科大学附属肿瘤医院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830054 新疆乌鲁木齐市第四人民医院新疆乌鲁木齐830002 新疆药物制剂工程技术研究中心新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院新疆乌鲁木齐830054

目的研究新疆马鹿角提取物对体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法以MC3T3-E1细胞作为药物筛选模型,用MTT法测定不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞增殖作用,采用碱性磷酸酶活性测定和骨钙素含有量检测,观察不同... 详细信息

目的研究新疆马鹿角提取物对体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法以MC3T3-E1细胞作为药物筛选模型,用MTT法测定不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞增殖作用,采用碱性磷酸酶活性测定和骨钙素含有量检测,观察不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞分化作用,以Von kossa钙化染色法观察新疆马鹿角提取物溶液对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响。结果 MTT检测结果表明5×102、5×101、5μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h均可促进MC3T3-E1细胞增殖,且呈时间依赖性。ALP检测结果表明5×102、5×101μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h可提高MC3T3-E1细胞内ALP的活性。BGP检测结果表明5×102、5×101μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在8、12 d可促进MC3T3-E1细胞内BGP的合成和分泌。Von kossa染色钙化面积百分比结果表明3组新疆马鹿角提取物溶液与对照组比较无明显区别。结论新疆马鹿角提取物可促进成骨细胞株MC3T3-E1的增殖和分化能力。

关键词：新疆马鹿角提取物 MC3T3-E1 增殖分化基质矿化

两种补肾法治疗绝经后骨质疏松症的分子机制差异

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中华中医药杂志 2015年第5期30卷 1570-1574页

作者：李悦姜自伟侯雪芹杨冰黄莉邱建利曾景奇黄枫广州中医药大学广州510405 广州中医药大学第一附属医院创伤骨科广州510405 广州军区广州总医院康复科广州510010

目的:观察两种补肾法对去势大鼠骨代谢和Ⅰ型胶原合成、交联及基质矿化相关基因表达的影响。方法:建立SD大鼠去势模型,给予补肾阳法和补肾阴法干预,观察骨组织形态学,检测骨密度及血清骨组织特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基末... 详细信息

目的:观察两种补肾法对去势大鼠骨代谢和Ⅰ型胶原合成、交联及基质矿化相关基因表达的影响。方法:建立SD大鼠去势模型,给予补肾阳法和补肾阴法干预,观察骨组织形态学,检测骨密度及血清骨组织特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基末端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原氨基末端肽(NTX)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX),测定Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化相关调控基因COLIA-1、COLIA-2、Lhx9、Bglap、Ibsp、Runx-2和Smad3的表达。结果:补肾阳法和补肾阴法均可明显提高大鼠骨密度并改善骨组织微观结构,同时通过不同的方式影响骨代谢和Ⅰ型胶原合成、交联及基质矿化相关基因的表达。结论:补肾阴法和补肾阳法均可有效治疗大鼠绝经后骨质疏松症,但二者的作用机制存在明显差异。

关键词：补肾法绝经后骨质疏松症骨代谢 Ⅰ型胶原基质矿化分子机制