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鞘内注射入β-内啡肽基因重组腺病毒对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用

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中华麻醉学杂志 2005年第6期25卷 428-432页

作者：尤圣武徐学武俞卫锋于布为钱其军苏长青王星华第二军医大学附属东方肝胆外科医院麻醉科上海市200438 上海第二医科大学瑞金医院麻醉科第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤病毒基因治疗研究室

目的观察鞘内注射入β-内啡肽(β-EP)基因重组腺病毒(Ad-NEP)对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用。方法36只雄性SD大鼠,体重210-260 g,随机分为手术组(n=26)、假手术组(n= 5)、空白对照组(n=5),手术组分为三个亚组:Ad-NEP组(n=9)、绿色荧... 详细信息

目的观察鞘内注射入β-内啡肽(β-EP)基因重组腺病毒(Ad-NEP)对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用。方法36只雄性SD大鼠,体重210-260 g,随机分为手术组(n=26)、假手术组(n= 5)、空白对照组(n=5),手术组分为三个亚组:Ad-NEP组(n=9)、绿色荧光蛋白基因重组腺病毒(Ad- GFP)组(n=9)、生理盐水组(n=8)。大鼠腹腔注射氯胺酮100 mg/kg和阿托品50 mg/kg麻醉后,手术组构建大鼠坐骨神经慢性捆扎(CCI)模型,假手术组进行同样手术,但不捆扎坐骨神经,空白对照组不进行手术;手术组经L5,6间隙蛛网膜下腔置入PE-10导管,7d后分别注射1×108pfu的Ad-NEP、Ad- GFP和40μl生理盐水。于手术后7 d(T0)、鞘内注射前当日(T1)、注射后1 d(T2)、1周(T3)、2周(T4)、3 周(T5)、4周(T6)、5周(T7)分别测定五组大鼠的左右足热痛阈;T3时取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠各1 只,取脊髓L3-6段作免疫组化检测;鞘内注射后10 d取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠,经腹腔内注射1 mg/kg 纳络酮,每间隔10min记录右足热痛阈(t0-9,共观察90min),并分别测定这两组T1-7时的脑脊液内β- EP浓度。结果Ad-GFP组和生理盐水组大鼠右足热痛阈明显低于假手术组和空白对照组(P0.05)。Ad-NEP组脊髓外膜可见明显的橙黄色浓染带,后角区可见少量橙黄色细胞,T2-7时脑脊液内β-EP浓度均高于Ad-GFP组(P重组腺病毒Ad-NEP对慢性神经病理痛大鼠有明显的镇痛效果,作用时间长达4周以上。

关键词：鞘内注射人β-内啡肽基因重组腺病毒慢性神经病理痛镇痛

应用AdEasy腺病毒载体系统构建人骨形成蛋白2基因重组腺病毒

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中华实验外科杂志 2005年第5期22卷 583-585页

作者：余斌苏秀云汪志中王志芳张丽芸卢晓刘凤玲南方医科大学南方医院创伤骨科广州510515

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建人骨形成蛋白2(BMP2)基因重组腺病毒并在293E细胞中扩增制备重组病毒。方法自人骨形成蛋白2真核表达载体pcDNA3-hBMP2中酶切出hBMP2基因,插入pAdtrackCMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdtrackCMV-hBMP2,经... 详细信息

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建人骨形成蛋白2(BMP2)基因重组腺病毒并在293E细胞中扩增制备重组病毒。方法自人骨形成蛋白2真核表达载体pcDNA3-hBMP2中酶切出hBMP2基因,插入pAdtrackCMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdtrackCMV-hBMP2,经酶切线性化后,采用电穿孔转化到事先电转化腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌电感受态细菌中,挑选同源重组质粒,酶切线性化重组质粒并转染293E细胞包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。重组病毒上清感染293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果经限制性内切酶检测和GFP表达证实成功地构建了携带hBMP2基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论成功地构建了携带hBMP2基因的重组腺病毒载体,为进一步研究rBMP2基因治疗奠定了基础。

关键词：基因重组腺病毒人骨形成蛋白2 AdEasy 系统构建 pcDNA3-hBMP2 重组腺病毒载体 BMP2基因重组病毒真核表达载体重组质粒微镜观察电穿孔转化 293细胞 GFP表达穿梭质粒大肠杆菌骨架质粒病毒颗粒基因治疗线性化

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大鼠骨形成蛋白4基因重组腺病毒的构建

中国现代医学杂志 2006年第9期16卷 1314-1316,1321页

作者：万小平李小荣谭辉何峰裴海平申竑李小刚中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心湖南长沙410008 中南大学湘雅三医院湖南长沙410008 中南大学湘雅医院湖南长沙410008

目的利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠骨形成蛋白BMP4的重组腺病毒。方法高保真PCR得到大鼠BMP4cDNA,克隆到质粒pCR-BluntII-TOPO中,然后将目的基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV,测序后在Cre重组酶作用下,将BMP4cDNA转移... 详细信息

目的利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠骨形成蛋白BMP4的重组腺病毒。方法高保真PCR得到大鼠BMP4cDNA,克隆到质粒pCR-BluntII-TOPO中,然后将目的基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV,测序后在Cre重组酶作用下,将BMP4cDNA转移到腺病毒载体pLP-Ade-no-X-CMV。在HEK293细胞中扩增重组腺病毒,并检测BMP4基因重组腺病毒在细胞中的表达和功能。结果PCR法和限制性内切酶XholI消化法均证实BMP4重组腺病毒的成功构建,RT-PCR和WesternBlot检测证实该重组腺病毒显著性增强了CFSC-2G细胞中BMP4的mRNA和蛋白表达水平。结论Cre-loxP特异性位点基因重组技术是一种快速、高效构建基因重组腺病毒的方法,大鼠BMP4基因重组腺病毒的成功构建为进一步研究BMP4的细胞调控功能和BMP4基因治疗提供了良好的工具。

关键词： Cre-loxP特异性位点基因重组 BMP4 基因重组腺病毒骨形成蛋白4

人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

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中国实验诊断学 2013年第6期17卷 1001-1003页

作者：王桂杰冷吉燕卢新卫张婧葛媛媛吉林大学第一医院干部病房吉林长春130021

脂联素（adiponectin,ADPN）是脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白质,具有改善胰岛素抵抗、抗炎、抗动脉粥样硬化、降血糖、保护血管内皮等作用[1],生理浓度范围内的脂联素通过抑制NF-κB信号传导通路能够剂量依赖性地抑制肿瘤坏死因子（TNF... 详细信息

脂联素（adiponectin,ADPN）是脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白质,具有改善胰岛素抵抗、抗炎、抗动脉粥样硬化、降血糖、保护血管内皮等作用[1],生理浓度范围内的脂联素通过抑制NF-κB信号传导通路能够剂量依赖性地抑制肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的血管内皮细胞黏附分子的表达。本研究通过将人脂联素基因重组腺病毒感染人脐静脉内皮细胞（human umbilical veins endothelial cells,HUVECs）,研究其对人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞超化因子1（MCP-1）和细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule,ICAM-1）和mRNA表达的影响。

关键词：血管内皮细胞黏附分子基因重组腺病毒 ICAM-1表达脂联素 MCP-1 人脐静脉内皮细胞抗动脉粥样硬化细胞间粘附分子

低氧诱导因子-1α基因重组腺病毒体外转染胚鼠神经干细胞研究

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中华实验外科杂志 2010年第3期27卷 399-399页

作者：孔令胜于如同赵万巨山东济宁医学院附属医院神经外科 272029 江苏徐州医学院附属医院神经外科

低氧诱导因子（HIF）-1α是低氧应答时基因表达和维持细胞内氧环境稳定的调节中心，神经干细胞（NSCs）是进行基因治疗的良好载体。我们将HIF-1α理基因重组腺病毒体外转染NSCs后，通过免疫原位杂交和Westernblot检测等方法证明成功建... 详细信息

低氧诱导因子（HIF）-1α是低氧应答时基因表达和维持细胞内氧环境稳定的调节中心，神经干细胞（NSCs）是进行基因治疗的良好载体。我们将HIF-1α理基因重组腺病毒体外转染NSCs后，通过免疫原位杂交和Westernblot检测等方法证明成功建立基因工程化NSCs。

关键词：低氧诱导因子-1α 基因重组腺病毒神经干细胞体外转染 Westernblot 胚鼠 HIF-1α NSCs

透明质酸复合BMP-2转染骨髓间充质干细胞修复兔桡骨干骨缺损

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中华骨科杂志 2005年第10期25卷 608-612页

作者：章军辉陈永强汤亭亭楼觉人郝永强郁朝峰戴尅戎上海第二医科大学附属第九人民医院骨科浙江省宁波市第六医院骨科200011

目的评价携带人BMP-2(hBMP-2)基因重组腺病毒(Adv-hBMP-2)转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与透明质酸(HA)复合构建的组织工程化骨对骨缺损的修复效果。方法取兔骨髓行BMSCs培养及Adv-hBMP-2的体外转染,建立桡骨干1.5cm缺损模型。20只兔(4... 详细信息

目的评价携带人BMP-2(hBMP-2)基因重组腺病毒(Adv-hBMP-2)转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与透明质酸(HA)复合构建的组织工程化骨对骨缺损的修复效果。方法取兔骨髓行BMSCs培养及Adv-hBMP-2的体外转染,建立桡骨干1.5cm缺损模型。20只兔(40侧)分四组(n=10):第一至三组分别注射Adv-hBMP-2转染细胞+HA、Adv-hBMP-2转染细胞、单纯HA,第四组为空白对照。结果(1)注射后第12周,第一组8侧骨缺损中6侧完全愈合,皮质骨形成,部分髓腔再通;第二组8侧骨缺损中有3侧完全愈合;第三、四组骨缺损均未愈合。X线疗效评分各组差异有统计学意义。(2)第一、二组4～8周时骨缺损内有多量新生骨痂形成,12周时部分髓腔再通;第三、四组4～8周时骨缺损处为纤维组织填充,12周时骨缺损未愈合,两骨端硬化。第一、二组之间新生骨小梁面积差异有统计学意义。(3)第一组的最大压缩载荷和弹性模量分别为(211.54±63.58)N和(113.36±56.47)MPa,第二组为(126.74±53.13)N和(98.91±63.36)MPa,差异有统计学意义。平均最大压缩载荷与正常桡骨之比:前者为75.86%,后者为45.45%。结论HA复合Adv-hBMP-2转染BMSCs构建的组织工程化骨可以修复兔桡骨干骨缺损,HA是一种安全的、有效的组织工程载体。

关键词：骨形态发生蛋白类基因疗法间质干细胞透明质酸兔骨骨髓间充质干细胞桡骨干骨缺损干细胞修复体外转染透明质酸 BMP-2 复合组织工程化骨基因重组腺病毒

内皮型一氧化氮合酶基因转染防治移植静脉再狭窄的实验研究

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中华外科杂志 2005年第10期43卷 657-658页

作者：陶登顺王辉山汪曾炜朱洪玉张铁铮姜志明沈阳军区总医院心血管外科 110016

移植静脉再狭窄是影响冠状动脉旁路移植 (CABG)术后远期疗效的主要因素.许多研究表明,CABG术后血管桥再狭窄的发生与一氧化氮(NO)的功能异常相关[1-4],2004年7月至9月本研究采用兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,应用含人内皮型一氧化氮... 详细信息

移植静脉再狭窄是影响冠状动脉旁路移植 (CABG)术后远期疗效的主要因素.许多研究表明,CABG术后血管桥再狭窄的发生与一氧化氮(NO)的功能异常相关[1-4],2004年7月至9月本研究采用兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,应用含人内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS) 基因重组腺病毒(AdCMVeNOS)转染移植静脉的方法,探讨eNOS基因防治静脉移植血管再狭窄的作用及其机制,为移植静脉再狭窄的防治提供实验和理论依据。

关键词：移植静脉再狭窄内皮型一氧化氮合酶实验研究基因转染内皮型一氧化氮合成酶冠状动脉旁路移植基因重组腺病毒 CABG术后 2004年血管再狭窄远期疗效功能异常移植模型颈外静脉静脉移植基因防治 eNOS 血管桥

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胚胎大鼠神经干细胞分离培养及基因转染研究

中国现代医学杂志 2010年第5期20卷 679-683,688页

作者：孔令胜于如同赵万巨济宁医学院附属医院神经外科山东济宁272029 徐州医学院附属医院神经外科江苏徐州221002

目的以低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)基因重组腺病毒体外转染胚胎大鼠神经干细胞,建立能稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞,为进一步的实验研究提供理论和物质基础。方法①分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经... 详细信息

目的以低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)基因重组腺病毒体外转染胚胎大鼠神经干细胞,建立能稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞,为进一步的实验研究提供理论和物质基础。方法①分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经生长因子EGF、bFGF和B27的神经干细胞条件培养基中克隆培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原神经巢蛋白(nestin)、自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞;②用含有HIF-1α基因的腺病毒感染培养第2代的神经干细胞,通过绿色荧光蛋白的表达证明转染基因的表达,Western-blot检测转染后HIF-1α蛋白表达的变化,免疫原位杂交检测转染后HIF-1αmRNA阳性细胞。结果①分离培养出了大量具有不断增殖能力的神经干细胞;②70%～80%的神经干细胞能感染HIF-1α基因重组腺病毒,Western-blot和免疫原位杂交实验显示HIF-1α蛋白大量表达。结论成功建立了神经干细胞的分离培养方法及能长期稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞。

关键词：神经干细胞细胞培养基因重组腺病毒转染

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外科基础

中国医学文摘（外科学） 2007年第6期26卷 481-482页

小于扰RNA对特异性沉寂淋巴细胞白细胞介素-2基因表达和功能的影响；表达转化生长因子βⅡ型受体胞外区-活化T细胞表达和分泌的调节因子融合基因重组腺病毒的构建与鉴定；沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究；大鼠... 详细信息

小于扰RNA对特异性沉寂淋巴细胞白细胞介素-2基因表达和功能的影响；表达转化生长因子βⅡ型受体胞外区-活化T细胞表达和分泌的调节因子融合基因重组腺病毒的构建与鉴定；沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究；大鼠创伤后胰岛素抵抗与胰岛素信号转导关系的研究；不同冷冻温度对许旺细胞抗原性的影响及最佳温度值的确定.

关键词：转化生长因子βⅡ型受体白细胞介素-2 基因重组腺病毒胰岛素信号转导外科 T细胞表达抗肿瘤作用树突状细胞