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植物基因工程中的基因转化系统

邯郸农业高等专科学校学报 2000年第1期17卷 18-20页

作者：宁书菊魏道智邯郸农业高等专科学校农学系河北永年057150

本文详细介绍了植物基因工程中的两大基因转化系统及其转化方法并对两系统作一简要地比较

关键词：基因转化系统载体介导转化系统直接转化系统植物基因工程

密蒙花(Buddlija officinalis)基因转化受体系统的建立

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四川大学学报（自然科学版） 2003年第5期40卷 958-962页

作者：白洁刘将新唐琳祝欣刘文娟陈放四川大学生命科学学院成都610064

以密蒙花(BuddlijaofficinalisMaxim)芽、叶、茎段为外植体,在B5,MS,White培养基上获得愈伤组织.结果表明:芽、幼叶脱分化能力差异不大;不同时期的叶片差异较大,以幼叶诱导为佳;作者筛选出的愈伤组织最佳培养基为B5+6 BA0.5mg/L+2,4 D0.... 详细信息

以密蒙花(BuddlijaofficinalisMaxim)芽、叶、茎段为外植体,在B5,MS,White培养基上获得愈伤组织.结果表明:芽、幼叶脱分化能力差异不大;不同时期的叶片差异较大,以幼叶诱导为佳;作者筛选出的愈伤组织最佳培养基为B5+6 BA0.5mg/L+2,4 D0.5mg/L.在继代培养阶段,B5比MS和White更适合细胞的快速生长和繁殖;并且以叶片的愈伤组织生长较快,芽、茎段次之.最佳继代培养基为B5+6 BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L.继代的愈伤组织可在B5+6 BA1mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.1mg/L培养基中分化出幼苗,在生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L或1/2MS+NAA0.6mg/L中分化出根且获得再生植株.将长4～6cm的再生小苗练苗3d后移植,幼苗成活率达100%,并于当年开花.

关键词：密蒙花愈伤组织继代培养植株再生基因转化系统

黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第2期21卷 58-58页

作者：刘钟滨同济大学医学院微生物与免疫学教研室

黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌，它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点，因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外，在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方... 详细信息

黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌，它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点，因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外，在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌，首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶，缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化，向其导入含pyrG基因的质粒，可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上，此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因，并在此基础上构建了表达性质粒载体，建立了pyrG基因为标志基因，以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。

关键词：基因 pyrG 重组质粒黑曲霉菌基因转化系统

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农杆菌介导的马铃薯转基因体系的建立

农杆菌介导的马铃薯转基因体系的建立

作者：李颖华中农业大学

学位级别：硕士

马铃薯是世界最重要的粮食作物之一。在目前的马铃薯生产中，病虫害等问题很大程度上限制了马铃薯产业的发展。同时，市场对马铃薯品质的要求越来越高，以及中国加入世界贸易组织后马铃薯产业所面临的问题都给马铃薯的育种工作提出了新... 详细信息

马铃薯是世界最重要的粮食作物之一。在目前的马铃薯生产中，病虫害等问题很大程度上限制了马铃薯产业的发展。同时，市场对马铃薯品质的要求越来越高，以及中国加入世界贸易组织后马铃薯产业所面临的问题都给马铃薯的育种工作提出了新的课题。由于马铃薯栽培种具有同源四倍体遗传分离的特点，所以用常规杂交育种很难在较短时间内育成优良品种。利用转基因技术可以将单个有价值的基因转入现有的优良品种之中，同时不改变现有品种本身所特有的优良性状。农杆菌介导的转基因方法已被应用于许多马铃薯品种的基因转化之中。但由于马铃薯的基因转化中存在基因型依赖性问题，所以有必要根据前人方法进行验证和改进。本试验用E3、N2、N552、3#四个品种的茎段、叶柄、叶片为材料，建立了高效、稳定的马铃薯基因转化的受体系统。发现以茎段为外植体较好，诱导愈伤组织的最佳激素配方为1mgL BA、0.1mgL NAA和0.1mgLGA，诱导不定芽的再生的最佳激素配方为1mgL BA、3mgLGA。此受体系统可使三个不同基因型的马铃薯品种得以高效再生。试验进行了预培养时间、侵染时间、共培养时间三个因素对转化效率影响的研究，确定了预培养2天、侵染5分钟、共培养2天的最佳转化途径。通过使用上述受体系统和转化途径，以茎段为外植体的转基因外植体上芽分化率最高可达到13.89％，但这一频率并不稳定;而以薯块为外植体的转基因外植体上芽分化率最高可达到17.02％，且这一频率比较稳定。同时，由于以茎段为外植体的再生需要通过诱导愈伤组织来实现，而以薯块为外植体可直接再生不定芽，转化步骤更简便，所以以薯块为外植体的转化体系比以茎段为外植体的转化体系优势更强。

关键词： Solanum tuberosum L. Agrobacterium 基因转化系统

农杆菌介导遗传转化在水稻基因工程育种中的应用

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分子植物育种 2005年第4期3卷 543-549页

作者：吕彦王平荣孙业盈董春林陈德西邓晓建烟台大学化学生物理工学院烟台264005 四川农业大学水稻研究所成都611130

随着生物技术的发展,水稻基因工程育种在水稻育种中发挥着越来越重要的作用。在诸多的转基因方法中,农杆菌作为一种天然的植物基因转化系统,以其独特优点而倍受重视。本文概述了农杆菌介导转化水稻的原理,农杆菌介导转化水稻的优点并且... 详细信息

随着生物技术的发展,水稻基因工程育种在水稻育种中发挥着越来越重要的作用。在诸多的转基因方法中,农杆菌作为一种天然的植物基因转化系统,以其独特优点而倍受重视。本文概述了农杆菌介导转化水稻的原理,农杆菌介导转化水稻的优点并且介绍了农杆菌菌株、受体材料和培养基成分的不同对农杆菌介导转化水稻的影响。另外对农杆菌介导遗传转化在水稻抗虫基因工程育种、抗病基因工程育种、抗逆基因工程育种、优质基因工程育种、耐除草剂基因工程育种及提高水稻光合效率和延缓衰老方面的研究进展进行了综述。最后对农杆菌介导遗传转化在水稻基因工程育种中存在的问题和发展前景做了简要说明。

关键词：基因工程育种遗传转化农杆菌介导转化应用基因转化系统转基因方法培养基成分生物技术水稻育种受体材料研究进展延缓衰老光合效率耐除草剂发展前景抗虫抗病抗逆优质

启动子探针型穿梭载体pEQ3的构建及BCG启动子片段的分离

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 160-161页

作者：邱薇徐恒刘世贵成都军区后勤部军事医学研究所昆明650032 四川联合大学生物工程研究所成都610064

卡介苗(Bacille de Calmette-Guerin,BCG)是世界上应用最广泛的菌苗,而且也是最安全,最稳定的疫苗,还是目前所知最强的免疫佐剂之一。由于在免疫学上具有许多独特优点,如:可研制成活菌苗、提高免疫力、延长保护期、适合表达免疫原性弱... 详细信息

卡介苗(Bacille de Calmette-Guerin,BCG)是世界上应用最广泛的菌苗,而且也是最安全,最稳定的疫苗,还是目前所知最强的免疫佐剂之一。由于在免疫学上具有许多独特优点,如:可研制成活菌苗、提高免疫力、延长保护期、适合表达免疫原性弱的抗原基因、方便、成本低等,使卡介苗在90年代迅速成为基因工程疫苗研究中的热点。要将BCG改造成为活的重组多价疫苗载体,集佐剂与抗原于一身,就需要在分枝杆菌中建立与***类似的基因转化系统。

关键词：启动子穿梭载体分枝杆菌卡介苗肠杆菌重组质粒基因工程疫苗插入片段基因转化系统启动子探针型载体

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黑曲霉菌pyrG缺陷株的建立

微生物学杂志 2001年第3期21卷 15-16页

作者：刘钟滨 David J.Jeenes David B.Archer 同济大学医学院医学微生物与免疫学教研室上海200331 Institute of Food Research

运用紫外线照射致突变方法建立了黑曲霉菌ATCC 12 0 49,134 96和N40 2等 3种菌株的乳清酸核苷 5′ 磷酸脱羧酶基因 (pyrG)缺陷株。其中ATCC 134 96是一种蛋白酶缺陷株。含黑曲霉菌pyrG基因的重组质粒 pY 1.2可使它们发生转化 ,成为Pyr... 详细信息

运用紫外线照射致突变方法建立了黑曲霉菌ATCC 12 0 49,134 96和N40 2等 3种菌株的乳清酸核苷 5′ 磷酸脱羧酶基因 (pyrG)缺陷株。其中ATCC 134 96是一种蛋白酶缺陷株。含黑曲霉菌pyrG基因的重组质粒 pY 1.2可使它们发生转化 ,成为Pyr+ ,转化效率约为 8～ 40转化子 / μgDNA。这些

关键词： pyrG缺陷株黑曲霉菌基因转化系统