检索结果-南通市图书馆

作者：唐林天津医科大学

学位级别：硕士

目的建立IL-6启动子活性检测方法并将该方法应用于对前列腺癌的研究中，从基因水平探讨IL-6在前列腺癌发病过程中的作用。方法 1．利用ELISA方法测定非雄激素依赖型前列腺癌细胞DU145的IL-6分泌水平;用TNF-α刺激细胞，比较刺激前... 详细信息

目的建立IL-6启动子活性检测方法并将该方法应用于对前列腺癌的研究中，从基因水平探讨IL-6在前列腺癌发病过程中的作用。方法 1．利用ELISA方法测定非雄激素依赖型前列腺癌细胞DU145的IL-6分泌水平;用TNF-α刺激细胞，比较刺激前后IL-6的分泌水平。2．将连接有IL-6启动子和报告基因的重组质粒转化到大肠杆菌DH5α菌株中进行扩增，获取大量重组质粒。将重组后的质粒与内对照质粒协同转染入DU145细胞，通过测定细胞中报告基因luc表达产物荧光素酶的相对活性，间接反映IL-6启动子的活性;同样应用TNF-α为诱导剂刺激转染的DU145细胞，比较刺激前后细胞中IL-6启动子的活性的变化。结果 ***145细胞的IL-6分泌水平为215.25±26.80pg／ml，经不同浓度TNF-α(2ng／ml，20ng／ml)刺激后的分泌水平升高，分别为488.5±20.65和1747±154.43pg／ml，与刺激前的结果相比有显著性差别(P＜0.05)。2．转染后的DU145细胞中，阴性对照组细胞的荧光素酶相对活性极低，为0.004±0.000406，阳性对照组细胞的荧光素酶相对活性较高，为1.164±0.009267，与阴性对照组进行比较有显著性差异(P＜0.01)。实验组细胞荧光素酶相对活性为0.193±0.00484，与阴性对照组进行比较有显著性差别(P＜0.01);经TNF-α刺激转染后的DU145细胞荧光素酶相对活性升高至0.615±0.03552，与刺激前结果相比有显著性差异(P＜0.05)。结论 1．利用报告基因建立了IL-6启动子活性的检测方法。2．非雄激素户丈撇要依赖型前列腺癌细胞DU145可分泌较高水平的IL一6，刺激物TNF一Q是其分泌作用的正向调节因子。3.证明TNF一a在转录水平上调节IL一6基因在前列腺癌细胞中的表达和分泌。

关键词： IL-6 前列腺癌 DU-145 TNF-α 基因表达与调节

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HBV蛋白通过转录因子YY1调节miRNAs形成相关因子DGCR8的表达

HBV蛋白通过转录因子YY1调节miRNAs形成相关因子DGCR8的表达

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作者：任敏重庆医科大学

学位级别：硕士

目的研究HBV蛋白对miRNAs形成相关因子DGCR8表达的调控作用，并对其作用机制进行初步探讨，为研究HBV引起的miRNAs异常表达机制提供一种新的思路。方法1.用RT-PCR和Real-Time PCR的方法检测DGCR8在HepG2细胞及HepG2.2.15细胞中的差异表... 详细信息

目的研究HBV蛋白对miRNAs形成相关因子DGCR8表达的调控作用，并对其作用机制进行初步探讨，为研究HBV引起的miRNAs异常表达机制提供一种新的思路。方法1.用RT-PCR和Real-Time PCR的方法检测DGCR8在HepG2细胞及HepG2.2.15细胞中的差异表达，并将HBV表达质粒(pCH9/3091)瞬时转染HepG2细胞，进一步确证HBV对DGCR8表达的影响，最后用Western blot验证上述结果。2.双荧光素酶报告系统分析HBV是否对DGCR8启动子有调节作用。首先构建DGCR8启动子质粒（pGL3-DGCR8-P），将其与pCH9/3091共转染HepG2细胞，以此检测HBV对DGCR8启动子活性的影响。3.构建HBV的四种蛋白的表达质粒HBc、HBp、HBs及HBx，分别与pGL3-DGCR8-P共转染HepG2细胞，分析HBV蛋白对DGCR8启动子活性的影响情况。在HepG2.2.15细胞中干扰掉相应蛋白，用双荧光素酶报告系统及Western blot验证上述蛋白对DGCR8表达的影响。4.寻找DGCR8启动子上可能结合的转录因子，通过RT-PCR及Western blot的方法检测HBV对相关转录因子的mRNA和蛋白表达的影响。通过双荧光素酶报告系统检测相关转录因子对DGCR8启动子活性的影响，Western blot检测转录因子对DGCR8蛋白表达的影响，并用shRNA在HepG2.2.15细胞中干扰相应转录因子的表达，通过双荧光素酶报告系统和Western blot验证上述结果。结果1. RT-PCR和Real-Time PCR结果显示， DGCR8mRNA在HepG2.2.15细胞中的表达较HepG2细胞降低，将HBV表达质粒以一定的浓度梯度转染入HepG2细胞后可见DGCR8的表达随HBV转染量的增高而降低，Western blot结果证实HBV可以下调DGCR8蛋白表达水平。2.构建了DGCR8启动子表达质粒，并证明了其活性。将DGCR8启动子质粒与pCH9/3091共转HepG2细胞，发现HBV能降低DGCR8启动子的活性，并且HBV对启动子的抑制作用呈剂量依赖性，最后我们通过双荧光素酶报告系统进一步在稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞中验证了HBV对DGCR8启动子活性的抑制作用。3.将HBV四种蛋白的表达质粒与DGCR8启动子质粒共染转HepG2细胞，发现HBs和HBx对DGCR8启动子活性影响最为明显。在HepG2.2.15细胞中分别抑制HBs和HBx的表达后，双荧光素酶报告系统检测显示DGCR8启动子活性有所恢复，Western blot检测显示DGCR8蛋白表达水平有所升高。4.通过生物信息学的方法搜寻到DGCR8启动子区域有转录因子YY1的结合位点。首先我们通过RT-PCR和Western blot的方法证实了HBV可以促进YY1的表达。然后将YY1的表达质粒与DGCR8启动子共转染HepG2细胞后发现YY1能下调DGCR8启动子活性，Western blot实验也验证了这一结果。随后在HepG2.2.15细胞中抑制YY1的表达，DGCR8启动子活性有所升高，DGCR8蛋白表达水平也升高。结论HBV能通过减弱DGCR8启动子活性降低其转录水平和蛋白水平的表达，其中HBs和HBx蛋白起主要作用，这一过程可能是通过转录因子YY1介导的。本研究探讨了HBV对DGCR8表达的调节机制，为研究HBV导致的miRNA的异常表达提供了新的思路，进一步阐明了HBV的生物学作用。

关键词： HBV DGCR8 启动子基因表达与调节

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人αD型干扰素cDNA 3′端非编码序列对该基因在大肠杆菌中表达的影响

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病毒学报 1985年第2期 97-99页

作者：崔宏,侯云德中国预防医学中心病毒学研究所中国预防医学中心病毒学研究所北京北京

本文采用DNA体外重组技术,研究了人αD型干扰素cDNA 3′端非编码序列对该基因在大肠杆菌中表达的影响。发现3′端非编码序列的缺失,使得人αD型干扰素基因在大肠杆菌中的表达水平降低约87倍。这一结果提示,在进行人αD型干扰素cDNA在大... 详细信息

本文采用DNA体外重组技术,研究了人αD型干扰素cDNA 3′端非编码序列对该基因在大肠杆菌中表达的影响。发现3′端非编码序列的缺失,使得人αD型干扰素基因在大肠杆菌中的表达水平降低约87倍。这一结果提示,在进行人αD型干扰素cDNA在大肠杆菌中的表达设计时,有必要保留其3′端非编码序列。

关键词：基因表达与调节干扰素

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