检索结果-南通市图书馆

中华检验医学杂志 2006年第10期29卷 954-955页

作者：李永哲中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100710

编辑同志: 　　拜读编辑部转来的胡红焱读者的来信,信中所提问题绝大部分是正确的,大多为论文写作及编辑过程疏忽造成所出现的低级错误,以后应从中吸取教训.请转达我对读者严谨认真的科学态度的敬意和谢意.现对胡红焱读者所提出的问题... 详细信息

编辑同志: 　　拜读编辑部转来的胡红焱读者的来信,信中所提问题绝大部分是正确的,大多为论文写作及编辑过程疏忽造成所出现的低级错误,以后应从中吸取教训.请转达我对读者严谨认真的科学态度的敬意和谢意.现对胡红焱读者所提出的问题逐条答复如下。

关键词：原发性胆汁性肝硬化基因克隆表达包膜蛋白抗体诊断自身抗原答复 LBR p62

超广谱Β内酰胺酶SHV-4型基因克隆表达与纯化研究

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中华检验医学杂志 2006年第2期29卷 119-120页

作者：楼永良王震郑颖吕建新陈秀枢尹惠琼邱薇李作生范泉水高国辉陆永绥温州医学院检验医学院微生态学研究所 325035 成都军区联勤部军事医学研究所

在临床微生物学诊断、食品监测、药物生产等研究中均对超广谱β内酰胺酶(ESBL)有广泛需求,而目前市售商品酶都是从天然耐药菌提取的低纯度酶,且价格高昂。

关键词：超广谱β内酰胺酶基因克隆表达纯化 4型微生物学诊断食品监测药物生产耐药菌

猪戊型肝炎病毒tORF2蛋白的基因克隆表达及免疫原性测定

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黑龙江畜牧兽医 2011年第11期 106-108页

作者：邓生珍格尔木市动植物检疫站青海格尔木816000

戊型肝炎（hepatitis E）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）引起的以黄疸为主的急性病毒性肝炎。该病主要经粪-口途径传播,在非人灵长类动物、啮齿类动物、猪、牛、羊、鸡等其他动物中广泛分布和传播,是一种人畜共患病。因此,... 详细信息

戊型肝炎（hepatitis E）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）引起的以黄疸为主的急性病毒性肝炎。该病主要经粪-口途径传播,在非人灵长类动物、啮齿类动物、猪、牛、羊、鸡等其他动物中广泛分布和传播,是一种人畜共患病。因此,该病已经成为预防医学和公共卫生学领域研究的热点之一,受到广泛关注。该病临床表现为发热、食欲不振、恶心、呕吐、尿色深黄、常见黄疸,病程可持续1周,但具有自限性。

关键词：戊型肝炎病毒基因克隆表达 ORF2蛋白免疫原性非人灵长类动物测定猪 virus

栗疫菌蛋白激发子PECp1基因克隆表达与功能分析

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栗疫菌蛋白激发子PECp1基因克隆表达与功能分析

作者：龙旭梅四川农业大学

学位级别：硕士

板栗是四大坚果之一,具有重要的经济价值和营养价值。板栗在我国适应性强,分布范围广泛,具有重要的生态价值,也是贫困山区脱贫致富的重要树种。板栗疫病的发生阻碍了板栗的增收增产,严重时造成全株死亡。蛋白激发子能够引发植物的免疫反... 详细信息

板栗是四大坚果之一,具有重要的经济价值和营养价值。板栗在我国适应性强,分布范围广泛,具有重要的生态价值,也是贫困山区脱贫致富的重要树种。板栗疫病的发生阻碍了板栗的增收增产,严重时造成全株死亡。蛋白激发子能够引发植物的免疫反应,增强植物的抗逆能力,在植物抗病害过程中起着重要作用,目前关于板栗疫病蛋白激发子的研究还未见报道。本文以板栗疫病为研究对象,通过与已知蛋白激发子进行同源性比对,进行栗疫菌蛋白激发子PECp1(Protein elicitor of Cryphonectria parasitica 1)片段的克隆,并进行原核表达,优化其表达条件,并将表达出的蛋白作用于植物种子和幼苗,分析了栗疫菌蛋白激发子的结构,同时也为深入研究该蛋白的功能奠定了理论基础,本研究取得的主要成果如下：1.栗疫菌蛋白激发子PECp1的基因克隆：通过与已知的蛋白激发子进行同源性比对,采用同源克隆,扩增出PECp1的DNA片段,通过RT-PCR扩增出PECp1的cDNA片段,将DNA和cDNA序列进行比对,PECp1的DNA全长824bp,包含两段总长为204bp的内含子,PECp1的cDNA全长618bp,共编码205个氨基酸,含有一个完整的阅读框。2.栗疫菌蛋白激发子PECp1的生物信息学分析：采用]DNA MAN、protaram、 SOPMA等生物信息学分析软件分析PECp1的理化性质和二级结构,结果表明,PECp1蛋白理论分子量为22291.51,等电点pI为4.621,该蛋白为亲水性蛋白,并且不稳定;同源性分析表明该蛋白N端具有NAC蛋白家族的保守区,C端具有NAC中UBA的保守区,同时与细极链格孢菌激活蛋白PeaTl具有高达70%的同源性,二级结构分析表明该蛋白无跨膜区,并且没有信号肽位点。3.栗疫菌蛋白激发子PECp1表达载体的构建和优化表达：在引物两端添加EcoR1和Nde1酶切位点,将栗疫菌蛋白激发子PECp1连入到表达载体pET-28a中进行原核表达,可溶性分析表明栗疫菌蛋白激发子属于可溶蛋白,采用自动诱导和IPTG诱导两种方法进行蛋白的诱导表达,结果表明,自动诱导培养基和IPTG两种方法都够能得到分子量大小约为40KD的融合蛋白;利用IPTG诱导蛋白表达时,IPTG浓度为0.5mM、温度为30℃、诱导时间4h时,可以获得表达量较高的蛋白,说明采用自动诱导培养基可以代替IPTG进行大规模诱导培养。4.栗疫菌蛋白激发子PEcp1的功能分析：采用不同浓度的重组蛋白对玉米、黄瓜、四季豆浸种后,分别测定重组蛋白对植物发芽、根系生长和相关防御酶的影响。结果表明,不同浓度的重组蛋白对植物种子的发芽有不同的促进作用,其中对四季豆的影响最明显,以稀释300倍的效果最好,比对照提高了约70.5%;在根长方面,该蛋白能够促进黄瓜和玉米根的生长;在幼苗的生长方面,栗疫菌激发子能够促进植物幼苗的生长,但是其作用时间有一定的限制,6d后黄瓜和四季豆与对照相比无显著差异;在根系活力和防御酶上,栗疫菌激发子重组蛋白能够显著提高玉米的根系活力、POD和CAT活性,与对照相比差异显著,根系活力提高约2倍,POD活性相比对照增加了56.49%,CAT活性是对照的2.7倍,表明栗疫菌蛋白激发子PEcp1具有激活蛋白PenT1和NAC蛋白的部分功能,能够提高植物的抗逆性,在一定程度上促进植物的生长。

关键词：栗疫菌蛋白激发子基因克隆表达生物功能

小麦木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ基因克隆表达及产物特性研究

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小麦木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ基因克隆表达及产物特性研究

作者：高慧浙江大学

学位级别：硕士

β-1，4-木聚糖酶(EC 3．2．1．8)是降解木聚糖的关键酶，能大幅度提高半纤维素物质的利用效率，因此广泛应用于饲料、造纸和食品等工业，而植物中木聚糖酶抑制剂的存在影响了酶活性的发挥。本文克隆了小麦木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ基因，... 详细信息

β-1，4-木聚糖酶(EC 3．2．1．8)是降解木聚糖的关键酶，能大幅度提高半纤维素物质的利用效率，因此广泛应用于饲料、造纸和食品等工业，而植物中木聚糖酶抑制剂的存在影响了酶活性的发挥。本文克隆了小麦木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ基因，使其在***21中表达，筛选阳性重组子;并对表达产物的抑制特性进行了研究;根据不同木聚糖酶对抑制剂敏感度的差异，从而筛选出一种对抑制剂低敏感的木聚糖酶。主要结果如下：根据GenBank上已登陆的小麦木聚糖酶抑制剂基因TAXI-Ⅰ(AJ438880)设计引物，克隆出长度为1284bp的目的片段。根据已克隆的木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ基因的酶切图谱及表达载体pET-30a(+)的多克隆位点(MCS)，设计了一对含限制性酶切位点的表达引物：5TAXI02E(EcoRI)／3TAXI02E(XhoI)。以含木聚糖酶基因的pUCm-TTAXIVector(以下简称T-TAXI)质粒为模板进行PCR扩增，获得了相应的两端带有限制性酶切位点的DNA片段，其大小为1175bp。将以上DNA片段与pUCm-T Vector质粒连接获得亚克隆重组质粒pUCm-T TAXIE Vector(简称T-TAXIE)。T-TAXIE经EcoRI和XhoI双酶切后分别与经相同酶双酶切的表达载体pET-30a(+)连接，获得重组表达质粒pET-30a(+)-TAXIE，然后导入***21中表达，筛选出阳性重组子。对***-30a(+)-TAXIE分泌的木聚糖酶抑制剂抑制特性研究表明，其分子量为46.7KDa，在20℃时抑制剂活性最低;在20℃的条件下，当作用时间不超过30min时，抑制剂活性上升较快，以后随着反应时间的延长，活性没有发生显著性变化;在0℃-70℃处理40min，抑制剂活性不受温度的显著影响;对来自G／11家族的细菌和真菌木聚糖酶进行研究，与细菌的木聚糖酶(TFX、BtXA和MHX)相比，真菌的木聚糖酶(ANX和TrXA)更易被TAXI-Ⅰ抑制，在20℃下处理30min，ANX反应后的残余酶活只剩15.8％，而BtXA和MHX残余酶活还具有53.0％和73.8％，TFX抗抑制能力最强，残余酶活高达88.4％。因此，从对抑制剂的敏感度方面考虑，TFX更适合应用，是一种优良的木聚糖酶。

关键词：木聚糖酶木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ 基因克隆表达大肠杆菌抑制特性

轮枝镰孢菌（Fusarium verticillioide）孢子表面蛋白提取、基因克隆表达与功能分析

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轮枝镰孢菌（Fusarium verticillioide）孢子表面蛋白提取、基因...

作者：于艳山东农业大学

学位级别：硕士

菌寄生是菌寄生真菌与寄主真菌间的一种寄生方式,是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioide)是一种重要的植物病原真菌和菌寄生中的寄主真菌,菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)... 详细信息

菌寄生是菌寄生真菌与寄主真菌间的一种寄生方式,是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioide)是一种重要的植物病原真菌和菌寄生中的寄主真菌,菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是轮枝镰孢菌上一种菌寄生真菌,能够与轮枝镰孢菌相互识别,互作并寄生。有证据显示,在菌寄生真菌与寄主真菌相互识别过程中,寄主真菌孢子表面蛋白具重要作用,对其进行研究具有重要科学意义。疏水蛋白(hydrophpbin)是真菌孢子的一种表面蛋白,它由丝状真菌特异产生的一类分泌型小分子蛋白质,存在于真菌菌丝细胞壁、孢子表面等结构。它含有8个半胱氨酸残基和一段分辨性的信号肽,能够自组装成双亲性界面,在真菌生长发育过程中起着极为重要生物学作用。本文首先采用不同的方法(TCA法、SDS煮沸法、蔗糖渗涨法和冻融法)提取轮枝镰孢菌孢子表面蛋白,SDS-PAGE电泳检测结果表明,采用三氟乙酸法获得了约7条蛋白质条带,其中一条12kDa处蛋白含量较高;采用SDS煮沸法获得了约4条蛋白质条带且有约2条带分子量在12kDa处;蔗糖渗涨法和冻融法分别获得约14条和6条蛋白质条带,前者提取出了大于50kDa的蛋白并且比后者多出一条约25kDa的蛋白。这四种方法获取蛋白质条带数量不同,但具有分子量几乎相同的条带。通过比较得知,三氟乙酸法和SDS煮沸法提取的孢子表面蛋白分子量较小,蔗糖渗涨法和冻融法提取的孢子表面蛋白除分子量20kDa以下的蛋白外还能够提取较大分子量的蛋白。为了获得轮枝镰孢菌疏水蛋白基因,根据GenBank中注册的两种疏水蛋白基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到HydⅠ和HydⅡ两种疏水蛋白基因cDNA,其中HydⅠ和HydⅡ cDNA全长分别为381bp和372bp,分别包含一个由127和124个氨基酸组成的开放阅读框。构建了毕赤酵母重组表达载体pPIC9K/HydI和pPIC9K/HydII,将重组表达质粒pPIC9K/HydI和pPIC9K/HydII转化毕赤酵母GS115,获得了转酵母工程菌株G-HydⅠ和G-HydⅡ并诱导表达和纯化。纯化HydⅠ蛋白得到一条分子量为11.7kDa的条带,其理论等电点为6.08,纯化HydⅡ蛋白得到一条分子量为11.2kDa的条带,其理论等电点为7.61。纯化后的蛋白与轮枝镰孢菌和纤细齿梗孢孢子进行互作,发现这两种蛋白能够使孢子凝集,HydⅠ使孢子凝集的最适宜pH值为6.0,孢子凝集最多的时间为15min;HydⅡ使孢子凝集的最适宜pH值为7.0,孢子凝集最多的时间为10min。在研究了疏水蛋白孢子对轮枝镰孢菌孢子及纤细齿梗孢孢子的凝聚作用之后,选取了绿色木霉(Trichoderma viride)、疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)及九州镰孢菌(Fusarium kyushuense)真菌孢子作为研究对象,进行孢子凝聚实验。结果显示疏绵状嗜热丝孢菌及九州镰孢菌孢子与疏水蛋白互作后孢子凝集,而使凝聚的绿色木霉孢子分散。为了从轮枝镰孢菌基因组中敲除HydⅡ基因,利用同源重组原理,在质粒pUCATPH和pROKII基础上构建了HydⅡ基因的敲除载体pUCATPH-S-PtrpC-hph-TtrpC-X,将带有真菌启动子的潮霉素B抗性基因表达盒PtrpC-hph-TtrpC导入转化载体pROKⅡ中,构建了适合真菌转化的载体pROKⅡ-S-PtrpC-hph-TtrpC-X。

关键词：菌寄生疏水蛋白基因克隆表达基因敲除功能分析

蜡状芽孢杆菌CZ阿拉伯糖异构酶的基因克隆表达及催化生产L-核酮糖的研究

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蜡状芽孢杆菌CZ阿拉伯糖异构酶的基因克隆表达及催化生产L-核酮糖...

作者：乔玮华南理工大学

学位级别：硕士

L-阿拉伯糖异构酶（L-AI;EC5.***.1.4）可以催化醛酮糖的异构化反应，实现从L-阿拉伯糖经一步转化为L-核酮糖。L-核酮糖是近年来发现的一种功能性单糖，属于稀有糖的一种。在生物、医药、保健、食品等领域具有重要的应用价值。为了更好地... 详细信息

L-阿拉伯糖异构酶（L-AI;EC5.***.1.4）可以催化醛酮糖的异构化反应，实现从L-阿拉伯糖经一步转化为L-核酮糖。L-核酮糖是近年来发现的一种功能性单糖，属于稀有糖的一种。在生物、医药、保健、食品等领域具有重要的应用价值。为了更好地利用廉价原料L-阿拉伯糖，得到产量更高的L-核酮糖。本论文以蜡状芽孢杆菌CZ为出发菌株，将其中的L-阿拉伯糖异构酶克隆到枯草杆菌WB800中并使其表达出L-阿拉伯糖异构酶，对其酶学性质也进行了优化。蜡状芽孢杆菌CZ中L-AI基因的克隆实验包括L-阿拉伯糖异构酶基因的扩增，L-阿拉伯糖异构酶基因与pMD18-T simple载体的连接，L-阿拉伯糖异构酶基因在大肠杆菌JM110中的扩增，L-阿拉伯糖异构酶基因序列的测序及序列分析等四个部分，同时对目的基因和连接转化及基因序列进行检测。结果表明，L-阿拉伯糖异构酶基因成功扩增并且成功与T载体连接转化到大肠杆菌JM110中。测序结果表明，扩增出的L-阿拉伯糖异构酶基因全长1,824bp，编码608个氨基酸，与已报道的L-阿拉伯糖异构酶的分子量大小大致相吻合，这证明了克隆得到的DNA片段就是所需要的L-阿拉伯糖异构酶基因。 L-AI基因的表达实验包括质粒pBE3-ara转化枯草WB800、验证质粒pBE3-ara转化枯草WB800是否成功、酶活力测定三个部分，同时对连接转化及有无酶活进行检测。结果表明，质粒pBE3-ara成功转化到枯草WB800菌株并且成功表达出L-阿拉伯糖异构酶。在以上实验的基础上，对L-阿拉伯糖异构酶催化L-阿拉伯糖生成L-核酮糖进行酶学性质研究。单因素实验包括：碳源、温度、pH、时间、酶浓度（酶与底物反应比例）、金属离子、表面活性剂。实验结果表明，通过标准曲线计算生成的L-核酮糖含量及其转化率得到单因素最佳条件为：碳源L-阿拉伯糖，温度85℃，pH7.0，时间24h，表面活性剂CTAB，酶浓度（酶与底物反应比例）0.2E+0.8S。由实验数据得知，对实验结果影响显著性大的三个因素为温度、pH、时间。根据这一结论运用响应面分析法(Responsesurface methodology，简称RSM)对其进行酶学性质优化，得到最佳组合为：温度84℃、pH7.0、时间25h时，转化率将达到最大值10.53%，验证实验转化率为11.65%;与预期基本相符。本实验对通过将蜡状芽孢杆菌CZ中的L-阿拉伯糖异构酶基因进行克隆表达及酶学性质优化，有助于提高L-阿拉伯糖异构酶产量及利用L-阿拉伯糖异构酶催化优化L-核酮糖产量的提高，利于生产中调控和工业生产L-核酮糖。

关键词： L-阿拉伯糖异构酶基因克隆表达酶学性质 L-核酮糖响应面

对《核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗原基因克隆表达及其抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的价值初探》一文的商榷

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中华检验医学杂志 2006年第10期29卷 954-954页

作者：胡红焱北京武警总医院检验科 100039

编辑同志: 　　贵刊2005年第11期刊登了李永哲等《核包膜蛋白gp210、p62和LBR 自身抗原基因克隆表达及其抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的价值初探》一文,在阅读过程中,发现有些表述欠妥,特提出与作者商榷。

关键词：原发性胆汁性肝硬化基因克隆表达包膜蛋白抗体诊断自身抗原 LBR p62 价值

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人降钙素基因克隆表达和重组产物的纯化

生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 128-128页

作者：毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰王官将第二军医大学生物化学教研室上海200433

人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段... 详细信息

人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段化学合成,经磷酸化、连接反应,克隆于pGEM7z载体。DNA序列测定证明,hCT DNA结构与预期的一致。

关键词：基因克隆表达人降钙素生物化学 DNA序列测定军医大学骨质疏松骨肿瘤寡聚核苷酸基因工程技术制备和纯化

Thermococcus siculi HJ21高温普鲁兰酶基因的克隆表达及其热稳定性保护剂研究

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中国酿造 2024年第7期43卷 154-161页

作者：倪豪郝悦于轶群薛陆州郝青芳亢新鑫王淑军江苏海洋大学海洋科学与水产学院江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏海洋大学海洋科学与水产学院江苏省海洋生物技术重点实验室江苏连云港222005

普鲁兰酶是水解α-1,6糖苷键的淀粉脱支酶,可提高淀粉制糖的糖化率。该研究将古菌Thermococcus siculi HJ21的超嗜热普鲁兰酶Pul-HJΔ782基因克隆在冷休克启动子cspA的质粒pColdⅠ,在宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中诱导表达,研... 详细信息

普鲁兰酶是水解α-1,6糖苷键的淀粉脱支酶,可提高淀粉制糖的糖化率。该研究将古菌Thermococcus siculi HJ21的超嗜热普鲁兰酶Pul-HJΔ782基因克隆在冷休克启动子cspA的质粒pColdⅠ,在宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中诱导表达,研究其酶学性质,通过单因素和响应面试验优化该酶的热稳定性保护剂,并考察保护剂对酶水解马铃薯淀粉的影响。结果表明,该酶的最适作用温度和pH分别为90℃和6.5,在温度80~100℃及pH 4.0~9.0范围稳定性良好。最佳热稳定性保护剂配方为Ca^(2+)添加量0.15 mol/L、甘油添加量5.4%、Tween 20添加量3.8 mL/L、明胶添加量4.0 g/L。在该优化条件下,90℃保温12 h后,酶活保留率为97.43%,比对照组提高了34.94%。该酶的糖化率显著提高,对马铃薯淀粉糖化40 h葡萄糖当量(DE)值为58.35%,比对照组比提高了11.78%。

关键词： Thermococcus siculi HJ21 普鲁兰酶基因克隆表达热稳定性保护剂