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慢病毒介导的RNA干扰hmga2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

中华血液学杂志 2012年第6期33卷 448-452页

作者：刘文丹谭丽熊喜峰梁叶萍谭获广州医学院第一附属医院海印院区肿瘤血液中心 510230 广东省泌尿外科重点实验室广州医学院组织学与胚胎学教研室

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2（hmga2）基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素（cyclin）B2、cyclinA2表达的影响。方法制备表达hmga2基因短发夹RNA（shRNA）的重组慢病毒载体，转染HL-60细胞。... 详细信息

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2（hmga2）基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素（cyclin）B2、cyclinA2表达的影响。方法制备表达hmga2基因短发夹RNA（shRNA）的重组慢病毒载体，转染HL-60细胞。通过半定量RT—PCR和West—elTlblot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞hmga2基因表达；CCK-8法检测细胞增殖抑制率；软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术（FCM）检测细胞周期；RT—PCR及Westernblot检测cyclinB2、cyclinA2mRNA和蛋白表达水平。结果RT—PCR和测序证实，成功构建了表达hmga2shRNA的重组慢病毒载体；RT—PCR和Westernblot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞hmga2mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑，抑制率分别达（80．66±7．98）％和（76．35±12．72）％；CCK-8比色结果显示，hmga2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制，细胞增殖曲线低平，缺乏指数增殖特征。FCM检测显示，与对照组相比，转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2／M期阻滞，G2／M期细胞分别为（13．90±4．07）％和（30．00±5．78）％（P〈0．05）。hmga2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclinB2mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比，抑制率分别为（67．55±7．69）％和（51．77±4．81）％（P〈0．01）。而cyclinA2的表达无明显改变。结论hmga2基因沉默可下调cyclinB2表达，从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2／M期阻滞。

关键词：基因,hmga2 RNA干扰细胞增殖细胞系,HL-60

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