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玉米粉中戊唑醇基体标准物质的研制

中国粮油学报 2023年第10期38卷 204-210页

作者：李开瑞刘啸林李奉杰慕建州涂晓慧程婷贾明宏北京农学院生物与资源环境学院北京102206 江苏衡谱分析检测技术有限公司南京210046 北京诺码标准技术有限公司北京102206 天津检通生物技术有限公司天津300457

建立玉米粉中戊唑醇残留基体标准物质的研制方法。选用新鲜玉米籽粒,经过粉碎、初次冷冻干燥、复溶加标、一次混匀、二次冷冻干燥、粉碎、研磨、过筛、二次混匀、均匀性初检、分装,制得一批玉米粉中戊唑醇基体标准物质。采用液相色谱-... 详细信息

建立玉米粉中戊唑醇残留基体标准物质的研制方法。选用新鲜玉米籽粒,经过粉碎、初次冷冻干燥、复溶加标、一次混匀、二次冷冻干燥、粉碎、研磨、过筛、二次混匀、均匀性初检、分装,制得一批玉米粉中戊唑醇基体标准物质。采用液相色谱-串联质谱测定,外标法定量,经均匀性和稳定性检验后,8家应用型实验室对其联合定值,并对不确定度进行评估。通过定值和不确定度评估得到玉米粉中戊唑醇残留基体标准物质的特性量值为0.432 mg/kg。,扩展不确定度为0.0302 mg/kg,该基体标准物质均匀性良好,可稳定保存至少26周。通过该方法制备的基体标准物质具有良好的均匀性与稳定性,为玉米粉中戊唑醇检测的方法开发、质量控制和实验室能力验证提供参考。

关键词：基体标准物质玉米粉戊唑醇均匀性稳定性定值

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转基因玉米MIR604基体标准物质研制

作物学报 2020年第4期46卷 473-483页

作者：李俊李亮李夏莹宋贵文沈平张丽翟杉杉柳方方吴刚张秀杰武玉花中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室湖北武汉430062 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 农业农村部科技发展中心北京100025

转基因生物安全监管是生物技术产业健康发展的保障,而转基因检测标准物质是进行转基因监管检测的物质基础,缺少标准物质就难以保证检测数据的准确性、可靠性和可比性。转基因玉米MIR604是我国批准进口用作加工原料的转基因品种,对其安... 详细信息

转基因生物安全监管是生物技术产业健康发展的保障,而转基因检测标准物质是进行转基因监管检测的物质基础,缺少标准物质就难以保证检测数据的准确性、可靠性和可比性。转基因玉米MIR604是我国批准进口用作加工原料的转基因品种,对其安全监管亟须制备标准物质。本项目通过对转基因玉米MIR604种子进行原材料鉴定、研磨、过筛、含水量测定等步骤,制备出转基因玉米MIR604纯品基体标准物质。均匀性检验和稳定性检验结果表明,本批标准物质在瓶内和瓶间均具有良好的均匀性,可在常温下运输1个月,长期稳定性达到6个月,量值稳定。本批标准物质的特性量值为转基因DNA与总DNA的拷贝数比值,由9家实验室采用MIR604/Adh1二重数字PCR联合定值,量值为0.50。充分评估了标准物质定值结果的各个不确定度分量,合成扩展不确定度为0.06 (copy/copy)。本批标准物质规格为1 g瓶–1,使用时最小取样量为100 mg,可用于转基因玉米MIR604的安全监管和定量标识、以及实验室质量控制等领域。

关键词：转基因玉米MIR604 基体标准物质数字PCR 实时荧光PCR 联合定值

转基因玉米NK603基体标准物质协同定值实验

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计量学报 2012年第1期33卷 81-86页

作者：董莲华隋志伟余笑波李亮王晶中国计量科学研究院北京100013 中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

对转基因玉米NK603基体标准物质荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质量值协同实验。选择7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米NK603基体标准物质量值进行了协同实验，通过分析比较各... 详细信息

对转基因玉米NK603基体标准物质荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，结果表明该方法适合于标准物质量值协同实验。选择7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米NK603基体标准物质量值进行了协同实验，通过分析比较各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证明该方法室间重复性较好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，3个水平基体标准物质的量值和扩展不确定度分别为0．57％±0．11％、1．21％±0．30％和4．92％±1．80％（k=2）。

关键词：计量学转基因玉米 NK603 基体标准物质实时荧光定量PCR

转基因玉米MON87427梯度含量基体标准物质的研制

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中国农业科学 2023年第8期56卷 1444-1455页

作者：李俊单露英肖芳李允静高鸿飞翟杉杉吴刚张秀杰武玉花中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部农业转基因生物溯源重点实验室农业农村部科技发展中心

【目的】转基因检测标准物质是转基因生物安全监管、标识制度实施的物质基础，是实验室内检测数据溯源、实验室间检测数据可比的保证。中国于2017年批准进口转基因玉米MON87427用作加工原料，其安全监管和检测急需研制有证标准物质。【... 详细信息

【目的】转基因检测标准物质是转基因生物安全监管、标识制度实施的物质基础，是实验室内检测数据溯源、实验室间检测数据可比的保证。中国于2017年批准进口转基因玉米MON87427用作加工原料，其安全监管和检测急需研制有证标准物质。【方法】以开发商提供的转基因玉米MON87427杂合种子和非转基因受体种子为原材料，对转基因玉米MON87427和其受体种子分别清洗、干燥、冷冻研磨、粒径及含水量检测，按质量分数（以干基计）称量配制得到质量分数分别为60.0、99.5和1 000.0 mg·g-1的转基因玉米MON87427基体标准物质MON87427a、MON87427b和MON87427c。运用实时荧光定量PCR进行粉末的均匀性初检，初检合格后分装。用MON87427/zSSIIb二重微滴数字PCR（ddPCR）方法进行标准物质均匀性、稳定性评估和8家实验室联合定值。根据《标准物质定值的通用原则及统计学原理》（JJF 1343）进行标准物质均匀性评估、稳定性评估、联合定值数据的处理及不确定度评定。【结果】本批标准物质有MON87427a、MON87427b、MON87427c 3个浓度，粒径小于200μm的粉末大于80%，含水量低于5%。用棕色玻璃瓶分装，不低于1.0 g/瓶，充氮后轧盖，3个浓度的标准物质各分装400瓶。3种标准物质均匀性检验的F值均小于临界值F0.05（14,30）（2.04），在瓶内和瓶间具有良好的均匀性，使用时，最小取样量为100 mg。标准物质在25℃、37℃和60℃条件下可稳定储存14 d，表明在常温下运输14 d标准物质特性量值不发生趋势性变化；在4℃和-20℃条件下长期稳定性达到12个月；开盖取样5次，标准物质特性量值未发生显著偏离。8家实验室联合测定的标准物质拷贝数比值无异常值、呈正态分布、且等精度，标准物质MON87427a、MON87427b、MON87427c的标准值及扩展不确定度分别为（2.92±0.44）%、（4.89±0.57）%、（52.1±3.4）%。【结论】研制的转基因玉米MON87427梯度含量基体标准物质均匀性良好，可稳定运输和储存，满足转基因玉米MON87427定性、定量检测需求，为转基因玉米MON87427的安全监管、定量标识制度的实施提供了可靠的有证标准物质。

关键词：转基因玉米MON87427 基体标准物质二重微滴数字PCR 特性量值不确定度

转基因玉米MON810基体标准物质Q—PCR量值协同实验研究

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计量学报 2011年第B12期32卷 114-118页

作者：傅博强臧超宋贵文孟亚男王晶董莲华余笑波李亮隋志伟杨立桃中国计量科学研究院北京100013 农业部科技发展中心北京100122 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平... 详细信息

针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q—PCR方法参考值分别为0．51％±0．10％、1．1％±0．2％、4．7％±0．7％（k=2）。

关键词：计量学转基因玉米 MON810 基体标准物质实时荧光定量PCR 协同实验

转基因水稻基体标准物质候选物真实性的鉴定技术研究

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计量学报 2014年第5期35卷 512-516页

作者：余笑波应荣俞晓平崔海峰王晶隋志伟李亮臧超叶子弘中国计量学院浙江杭州310018 中国计量科学研究院北京100029

以PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术为基础，对转基因水稻克螟稻2号和阴性受体秀水11进行真实性鉴定。利用典型性检测、指纹图谱技术对候选物的转基因事件的真实性、转入事件正确性（是否为特异性目标外源基因）、品系遗传背景进行鉴定，结... 详细信息

以PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术为基础，对转基因水稻克螟稻2号和阴性受体秀水11进行真实性鉴定。利用典型性检测、指纹图谱技术对候选物的转基因事件的真实性、转入事件正确性（是否为特异性目标外源基因）、品系遗传背景进行鉴定，结果表明，克螟稻2号只含特异性序列Cry1Ab，秀水11不含所选的外源基因，它们具有相同的遗传背景。随机各抽取克螟稻2号和秀水11水稻100株，通过特异性PCR、免疫印迹实验来检测原材料的纯度，结果表明，克螟稻2号为100％的转基因水稻，秀水11为100％的阴性受体水稻。

关键词：计量学转基因水稻基体标准物质品系鉴定纯度鉴定指纹图谱技术

转基因玉米TC1507基体标准物质协同实验及不确定度评定

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计量学报 2011年第B12期32卷 110-113页

作者：臧超傅博强宋贵文孟亚男王晶董莲华余笑波隋志伟李亮杨立桃中国计量科学研究院北京100013 农业部科技发展中心北京100122 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

7家实验室共同采用实时荧光定量PCR方法，对转基因玉米TC1507基体标准物质A、B、c3种含量水平的量值，进行了协同实验研究，并对得到的参考值进行了不确定度分析。实时荧光定量PCR方法协同实验结果表明，转基因玉米TC1507基体标准物质... 详细信息

7家实验室共同采用实时荧光定量PCR方法，对转基因玉米TC1507基体标准物质A、B、c3种含量水平的量值，进行了协同实验研究，并对得到的参考值进行了不确定度分析。实时荧光定量PCR方法协同实验结果表明，转基因玉米TC1507基体标准物质转基因含量的参考值分别为0．41％±0．22％、1．1％±0．4％、4．5％±1．2％（k=2）。

关键词：计量学转基因玉米TC1507 基体标准物质实时荧光定量PCR 协同实验

转基因大豆Mon89788基体标准物质协同实验研究

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计量学报 2011年第B12期32卷 106-109页

作者：张玲盛灵慧王晶曹应龙柳方方隋志伟卢长明中国计量科学研究院北京100013 中国农业科学院油料作物研究所湖北武汉430062 北京化工大学北京100029

对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认，标准物质的多家实验室协同实验，以及测最的不确定度评估。多家测定分析结... 详细信息

对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认，标准物质的多家实验室协同实验，以及测最的不确定度评估。多家测定分析结果表明，转基因大豆Mon897883种不同外源基因／内源基因含量水平的标准物质参考值和扩展不确定度分别为0．35％±0．17％，0．61％±0．14％，3．17％±1．70％（k=2）。基体为大豆粉的该标准物质可用于转基因大豆含量的定量检测。

关键词：计量学转基因大豆 Mon89788 实时荧光定量PCR 基体标准物质

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转基因玉米T25基体标准物质协同实验研究

计量学报 2014年第1期35卷 87-91页

作者：董莲华李亮周云龙曹应龙沈平卢长明王晶刘张岚中国计量科学研究院北京100013 农业部科技发展中心北京100122 中国农科院油料作物研究所湖北武汉430062

对转基因玉米125转化体特异性荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，选择了7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米125基体标准物质进行协同实验研究。通过比较分析各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证... 详细信息

对转基因玉米125转化体特异性荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证，选择了7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米125基体标准物质进行协同实验研究。通过比较分析各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数，进一步证明该方法室间重复性好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度，因此计算各实验室的总平均值做为标准物质的标准值。3个水平的基体标准物质的标准值和扩展不确定度（k=2）分另Ⅱ为1．17％±0．22％、2．17％±0．38％和9．81％±2．30％。

关键词：计量学转基因玉米 T25 基体标准物质实时荧光定量PCR