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草鱼垂体激素荧光酶联免疫检测体系的构建及应用

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草鱼垂体激素荧光酶联免疫检测体系的构建及应用

作者：欧阳雨华中农业大学

学位级别：硕士

垂体是鱼类最重要的内分泌器官,它能够合成与释放一系列激素,包括促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、生长激素(GH)、泌乳素(PRL)、生长乳素(SLα/β)和促甲状腺激素(TSH)等。上述激素通过作用于相应的靶器官来调节鱼类生殖、生长、能... 详细信息

垂体是鱼类最重要的内分泌器官,它能够合成与释放一系列激素,包括促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、生长激素(GH)、泌乳素(PRL)、生长乳素(SLα/β)和促甲状腺激素(TSH)等。上述激素通过作用于相应的靶器官来调节鱼类生殖、生长、能量代谢和水盐平衡等重要生理过程,因此垂体和血清中上述激素的分泌水平能够很好的反映鱼类的生理状态。由于种属差异,目前没有特异性定量检测草鱼垂体提取物和血清中垂体激素水平的试剂盒。基于此,本研究构建了竞争性荧光酶联免疫检测体系(FEIA)来定量检测草鱼垂体相关激素的水平。首先,根据草鱼垂体激素的序列,合成了上述激素的重组蛋白,并制备了特异性多克隆抗体;接着,通过免疫组化和western blot验证了上述抗体的特异性;然后,利用上述抗体和重组蛋白构建了草鱼垂体激素的荧光酶联免疫检测系统;最后,利用构建的检测系统,对草鱼垂体和血清中上述激素的水平进行了检测和验证。具体结果如下:草鱼促性腺激素荧光酶联免疫检测体系的构建及其应用。本研究基于竞争性结合的原理,开发出能够定量检测草鱼LH和FSH含量的竞争性荧光酶联免疫检测试剂盒。首先,利用制备的草鱼特异性多克隆抗体进行免疫荧光组化定位分析,结果发现LH和FSH均在草鱼腺垂体的间叶区域分泌,并且二者由不同的分泌细胞产生。其次,本检测方法中LH的标准曲线相关系数为R=0.9897,FSH的标准曲线相关系数为R=0.9924,标准曲线浓度范围都是0.126ng/m L～250 ng/m L。最后,利用该检测试剂盒分析发现,草鱼腹腔注射s Gn RH后血清中LH和FSH水平显著升高,并且s Gn RH能够显著诱导草鱼垂体原代细胞中LH和FSH的分泌。上述结果表明,该检测体系稳定且可靠。草鱼GH/PRL/SL家族激素荧光酶联免疫检测体系的构建及其应用。首先,构建了草鱼特异性GH、PRL、SLα、SLβ重组蛋白和多克隆抗体。利用制备的多克隆抗体进行免疫荧光组化分析发现PRL在腺垂体前叶区表达,GH分布在垂体间叶区域,SLα和SLβ定位在垂体的过渡叶区。然后,构建了草鱼GH/PRL/SL家族激素竞争性荧光酶联免疫检测试剂盒,其中,GH的标准曲线相关系数R=0.9846;PRL的标准曲线相关系数R=0.9948;SLα和SLβ的标准曲线相关系数分别为R=0.9849、R=0.985。GH和PRL标准曲线浓度范围是0.488 ng/m L～1000 ng/m L;SLα和SLβ标准曲线浓度范围是0.244 ng/m L～500ng/m L。最后,利用该试剂盒检测发现该体系可以稳定应用于定量分析草鱼腹腔注射后血清和垂体细胞培养液上清中的GH、PRL和SL的分泌水平。

关键词：草鱼垂体激素促性腺激素 GH/PRL/SL家族荧光酶联免疫检测

垂体激素和激素替代治疗对骨代谢调控的研究进展

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中国骨质疏松杂志 2021年第10期27卷 1503-1507页

作者：张平章雨帆徐晶晶吴涵周文斌何畏南京医科大学第一附属医院内分泌科江苏南京210029 南京医科大学第一附属医院乳腺外科江苏南京210029

既往研究多认为垂体分泌的激素通过其靶内分泌腺对骨代谢进行间接调控。但近年来,越来越多的研究发现垂体激素如生长激素、促甲状腺素、促性腺素、促肾上腺皮质素以及催产素等对骨代谢具有直接调节作用,这些激素通过作用于相应的受体,... 详细信息

既往研究多认为垂体分泌的激素通过其靶内分泌腺对骨代谢进行间接调控。但近年来,越来越多的研究发现垂体激素如生长激素、促甲状腺素、促性腺素、促肾上腺皮质素以及催产素等对骨代谢具有直接调节作用,这些激素通过作用于相应的受体,激活不同的信号通路,直接作用于成骨细胞、破骨细胞,从而发挥生物学效应,影响骨量及骨质疏松性骨折的发生率。垂体功能低下患者长期使用生长激素、糖皮质激素、性激素、甲状腺素等替代治疗亦对骨代谢有着不同的调控作用。它们也是直接与成骨或破骨细胞膜上相应的受体结合,通过基因或非基因效应,从而对骨量进行调节。本文综述了垂体激素对骨骼的直接作用及激素长期替代治疗对骨代谢的调控,旨在为疾病的早期诊断、精准个体化治疗提供一些思路。

关键词：垂体激素替代治疗骨代谢

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者垂体前叶激素水平及临床意义分析

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中国脑血管病杂志 2020年第7期17卷 379-383,402页

作者：曲鑫赵浩王宁尚峰程玮涛齐猛徐跃峤蒋丽丹陈文劲首都医科大学宣武医院神经外科北京100053

目的探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(a SAH)患者血清促甲状腺激素(TSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、泌乳素、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)及生长激素(GH)的水平及临床意义。方法回顾性分析2017年1至12月首都医科大学宣武医院神经外科重... 详细信息

目的探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(a SAH)患者血清促甲状腺激素(TSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、泌乳素、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)及生长激素(GH)的水平及临床意义。方法回顾性分析2017年1至12月首都医科大学宣武医院神经外科重症监护室收治的a SAH患者的临床资料,对患者发病后1~3 d血清ACTH、TSH、泌乳素、FSH、LH、GH的数据进行收集,并同时采用经颅多普勒超声检测大脑中动脉血流速度,依据垂体前叶激素水平将患者分为垂体激素分泌异常组(PD组,32例)和垂体激素分泌正常组(PN,59例),并对患者进行6个月随访,采用改良Rankin量表(mRS)评分评估患者预后。结果共纳入91例aSAH患者,男52例,女39例;年龄29~65岁,平均(52±9)岁。PD组血管痉挛发生率、Hunt-Hess分级≥Ⅳ级及Fisher分级≥Ⅲ级患者比例高于PN组[分别为56.2%(18/32)比28.8%(17/59),40.6%(13/32)比16.9%(10/59),56.2%(18/32)比22.0%(13/59)],差异均有统计学意义(χ^2值分别为6.598、6.158、10.814,均P垂体前叶激素分泌异常与Fisher分级、Hunt-Hess分级、动脉瘤部位、脑血管痉挛及预后有关。

关键词：动脉瘤性蛛网膜下腔出血垂体激素血管痉挛

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垂体激素与乳腺癌的相关临床研究

垂体激素与乳腺癌的相关临床研究

作者：刘芳铭大连医科大学

学位级别：硕士

研究目的:研究垂体激素(卵泡刺激素,黄体生成素,泌乳素,生长激素,促甲状腺激素)与乳腺癌临床病理等特征的相关性。方法:对2017年8月至2018年10月在中国医科大学附属医院收治的100名乳腺癌女性进行分析。均抽取清晨空腹血清并检测卵泡刺... 详细信息

研究目的:研究垂体激素(卵泡刺激素,黄体生成素,泌乳素,生长激素,促甲状腺激素)与乳腺癌临床病理等特征的相关性。方法:对2017年8月至2018年10月在中国医科大学附属医院收治的100名乳腺癌女性进行分析。均抽取清晨空腹血清并检测卵泡刺激素(folliculestimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),泌乳素(prolactin,PRL),生长激素(growth hormone,GH),促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)水平。患者术后均经组织病理学检查确诊为乳腺癌的女性患者。所有患者均无垂体疾病,内分泌相关疾病,精神疾病等,2年内未服用过激素类药物。查阅患者病历内容收集相关信息,包含以下内容:患者年龄、绝经状态、肿瘤大小、淋巴结转移,远处转移情况,雌激素受体(estrogen recepter,ER)、孕激素受体(progesterone recepter,PR)、人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor,Her-2)、Ki-67、病理类型等。根据研究目的,同时考虑到绝经前患者体内雌激素水平的影响以及FSH、LH的水平与卵巢功能相关,所以筛选出绝经后患者80例作为研究人群。同时查阅相关激素与乳腺癌之间的文献,从基础实验到临床数据分析得到预计的结果。所有数据均采用统计软件SPSS25.0进行统计学分析,对激素与各指标之间进行Pearson相关性分析与Spearman分析,同时绘制散点图及趋势线体现激素水平与相关指标的关系。结果:根据统计的相关性分析结果显示,卵泡刺激素水平与肿瘤大小的相关系数为0.104,呈正相关;与淋巴结转移情况的相关系数为-0.101,呈负相关;与临床分期的相关系数为0.104,呈正相关;与病理恶性程度的相关系数为0.256,在置信度(双测)为0.05时,呈正相关且相关性显著;与分子分型的相关系数为-0.023,呈负相关。黄体生成素水平与肿瘤大小的相关系数为0.083,呈正相关;与淋巴结转移情况的相关系数为0.019,呈正相关;与临床分期的相关系数为0.144,呈正相关;与病理恶性程度的相关系数为0.211,呈正相关;与分子分型的相关系数为-0.017,呈负相关。泌乳素水平与肿瘤大小的相关系数为0.013,呈正相关;与淋巴结转移情况的相关系数为0.177,呈正相关;与临床分期的相关系数为0.108,呈正相关;与病理恶性程度的相关系数为-0.043,呈负相关;与分子分型的相关系数为-0.005,呈正相关。生长激素水平与肿瘤大小的相关系数为0.318,在置信度(双测)为0.01时,呈正相关且相关性显著;与淋巴结转移情况的相关系数为0.076,呈正相关;与临床分期的相关系数为0.213,呈正相关;与病理恶性程度的相关系数为0.108,呈正相关;与分子分型的相关系数为-0.078,呈负相关。促甲状腺激素水平与肿瘤大小的相关系数为-0.191,呈负相关;与淋巴结转移情况的相关系数为0.017,呈正相关;与临床分期的相关系数为-0.143,呈负相关;与病理恶性程度的相关系数为-0.134,呈负相关;与分子分型的相关系数为0.205,呈正相关。结论:根据本研究的数据分析结果显示,五种垂体激素水平在整体上与乳腺癌的进展情况呈现正相关的趋势。其中较为显著的有两点,(1)卵泡刺激素与乳腺癌恶性程度呈正相关,且相关性显著。即高水平的卵泡刺激提示乳腺癌恶性程度大。(2)催乳素与乳腺癌肿物的大小呈正相关,且相关性显著。即高水平的催乳素可能提示肿瘤的增长和进展。但是本研究样本量小,研究组存在一定的局限性,统计结果分析的相关性不显著,需要进一步多中心、大样本的流行病学调查随访和前瞻性研究的验证。通过阅读大量的文献并对文献内容进行分析和总结,表明垂体分泌的相关激素可能是乳腺癌发生发展的重要标志物,垂体激素可能有相应的受体及作用靶点存在于乳腺癌组织中,从而推动疾病的进展,在乳腺癌日后的诊断、治疗、随访中具有一定临床参考价值。

关键词：垂体激素乳腺癌相关性

无功能性垂体腺瘤患者垂体激素整体水平的初步评估研究

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中华神经医学杂志 2018年第3期17卷 227-232页

作者：丁陈禹蚁雪涵尹腾昆肖德勇吴志峰王守森福州总医院神经外科福州350025 福建医科大学附属协和医院耳鼻咽喉头颈外科福州350001

目的探讨垂体腺瘤患者各类垂体激素的整体水平及“垂体总体激素”对垂体腺瘤分泌功能的评估价值。方法选择福州总医院神经外科自2009年1月至2013年4月收治并手术治疗的66例临床无功能性垂体腺瘤患者。收集患者手术前后的垂体激素水平及... 详细信息

目的探讨垂体腺瘤患者各类垂体激素的整体水平及“垂体总体激素”对垂体腺瘤分泌功能的评估价值。方法选择福州总医院神经外科自2009年1月至2013年4月收治并手术治疗的66例临床无功能性垂体腺瘤患者。收集患者手术前后的垂体激素水平及MRI资料．根据腺瘤直径分为大型腺瘤组（1cm〈腺瘤直径〈3cm）与巨大型腺瘤组（腺瘤直径≥3cm），根据手术切除程度分为大部分切除组（切除程度〉60％）和部分切除组（切除程度≤60％）。应用自制的评分量表评估患者垂体总体激素水平，比较2组患者手术前后6项激素及“垂体总体激素”水平的差异。结果（1）大型腺瘤组（38例）与巨大型腺瘤组（28例）患者术前6项激素水平比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。大型腺瘤组患者术前“垂体总体激素””评分高于巨大型腺瘤组，差异有统计学意义（P〈0．05）。大型腺瘤组、巨大型腺瘤组术前分别有13例（34．2％）、17（60．7％）例患者一项或多项腺垂体激素低于正常参考值，比较差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）大部分切除组（57例）与部分切除组（9例）患者术后6项激素水平比较差异均无统计学意义（胗0．05）。部分切除组患者术后“垂体总体激素”评分高于大部分切除组，差异有统计学意义（P〈0．05）。大部分切除组、部分切除组术后分别有34例（59．6％）、2例（22．2％）患者一项或多项腺垂体激素低于正常参考值，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论“垂体总体激素”可以独立评估6项垂体激素的水平，更准确地体现垂体腺瘤患者残存腺垂体的分泌功能。

关键词：垂体腺瘤垂体激素腺垂体功能减退

垂体腺瘤患者血浆神经肽Y与垂体激素水平相关性研究

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中华神经外科杂志 2005年第10期21卷 612-615页

作者：甄自刚马景砲阎学江天津医科大学总医院神经外科天津环湖医院

目的探讨垂体腺瘤患者血浆神经肽Y(NPY)与垂体激素之间的相关关系。方法收集82例垂体腺瘤患者及20例对照组空腹静脉血3ml,进行血浆NPY放免测定分析,并与垂体激素水平进行相关分析。初步探讨NPY与部分其他临床指标之间的相关性。结果⑴... 详细信息

目的探讨垂体腺瘤患者血浆神经肽Y(NPY)与垂体激素之间的相关关系。方法收集82例垂体腺瘤患者及20例对照组空腹静脉血3ml,进行血浆NPY放免测定分析,并与垂体激素水平进行相关分析。初步探讨NPY与部分其他临床指标之间的相关性。结果⑴垂体腺瘤患者、泌乳素细胞腺瘤、生长激素细胞腺瘤、无内分泌功能细胞腺瘤及多分泌功能细胞腺瘤组中血浆NPY与PRL呈负相关。⑵垂体腺瘤患者血浆NPY与ACTH呈正相关。⑶促性腺激素细胞腺瘤中NPY与LH呈正相关而与GH呈负相关。⑷NPY在垂体腺瘤组与对照组中血浆含量明显不同,而且部分不同垂体腺瘤组之间也存在明显差异。⑸全组垂体腺瘤手术后血浆NPY的含量下降。结论NPY参与了垂体腺瘤病理生理中下丘脑-垂体轴许多激素的调节,可能与垂体腺瘤的发生有关。

关键词：血浆神经肽Y 垂体腺瘤垂体激素相关性激素水平患者血浆NPY 细胞腺瘤内分泌功能血浆含量

重型颅脑损伤中远期垂体激素变化的临床因素分析

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中华神经医学杂志 2015年第6期14卷 614-618页

作者：梁观钦潘军漆松涛陆云涛南方医科大学南方医院神经外科广州510515 佛山市顺德区乐从医院神经外科

目的探讨重型颅脑损伤中远期垂体激素变化的特点及临床影响因素. 方法选择南方医院神经外科自2011年1月至2013年12月收治的79例重度颅脑损伤患者,在伤后6个月～2年回访检测垂体激素及皮质醇、睾酮、雌二醇、游离甲状腺素的基础水平,... 详细信息

目的探讨重型颅脑损伤中远期垂体激素变化的特点及临床影响因素. 方法选择南方医院神经外科自2011年1月至2013年12月收治的79例重度颅脑损伤患者,在伤后6个月～2年回访检测垂体激素及皮质醇、睾酮、雌二醇、游离甲状腺素的基础水平,分析垂体激素异常改变的发生率及激素类型特点,采用单因素分析及多因素Logistic回归分析探讨影响重型颅脑损伤中远期垂体激素异常改变的相关临床因素. 结果 79例重度颅脑损伤患者中35例发生垂体激素异常改变,发生率为44.30％;激素类型主要包括催乳素（PRL） 18例（26.87％）、甲状腺激素（TSH）16例（23.88％）、促肾上腺皮质激素（ACTH）9例（13.43％）、生长激素（GH）8例（11.94％）、卵泡刺激素（FSH）10例（14.93％）、黄体生成素（LH）6例（8.96％）.多因素Logistic回归分析显示,重型颅脑损伤后中远期垂体激素异常改变的相关临床因素包括弥漫性损伤（OR=5.252,95％CI：1.176～23.465,P=0.030）、脑疝（OR=4.119,95％CI：1.261～13.452,P=0.019）、蛛网膜下腔出血（OR=3.966,95％CI：1.179～13.337,P=0.026）及颅底骨折（OR=4.222,95％CI：1.087～16.396,P=0.037）. 结论重型颅脑损伤中远期易并发垂体激素异常改变,弥漫性损伤、脑疝、蛛网膜下腔出血及颅底骨折是其高危因素.

关键词：颅脑损伤中远期垂体激素临床因素

硫酸镍对大鼠垂体组织Caspase-3表达、激素和病理学影响

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职业与健康 2022年第11期38卷 1473-1477页

作者：杜阳陈慧杨晶晶兰州大学第二医院内分泌代谢科甘肃兰州730000

目的了解硫酸镍腹腔注射染毒对大鼠垂体功能和病理产生的损伤及凋亡蛋白Caspase-3表达的情况。方法健康雄性Wister大鼠24只,按体质量随机分为4组,正常对照组和3个实验组,实验组依据不同硫酸镍浓度又分为低剂量组(2.5 mg/kg)、中剂量组(5... 详细信息

目的了解硫酸镍腹腔注射染毒对大鼠垂体功能和病理产生的损伤及凋亡蛋白Caspase-3表达的情况。方法健康雄性Wister大鼠24只,按体质量随机分为4组,正常对照组和3个实验组,实验组依据不同硫酸镍浓度又分为低剂量组(2.5 mg/kg)、中剂量组(5 mg/kg)和高剂量组(10 mg/kg),6只/组,等体积(5 mL/kg)腹腔注射硫酸镍染毒,1次/天,连续40日。正常对照组以生理盐水5 mL/kg等体积腹腔注射。染毒结束后检测大鼠促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、生长激素(growth hormone,GH)、催乳素(prolactin,PRL)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和皮质醇水平的变化,观察垂体组织病理改变和凋亡蛋白Caspase-3表达情况。结果与对照组相比,低剂量组[(1.87±0.43)mU/L]和中剂量组[(2.28±0.93)mU/L]TSH水平明显降低(P0.05),LH水平随着镍染毒剂量增加有升高趋势,仅高剂量组[(3.18±0.17)mIU/L]差异有统计学意义(P0.05)。病理下中高剂量组垂体组织见少量淋巴细胞浸润。染镍组垂体Caspase-3表达均未见上调。结论硫酸镍能导致部分激素分泌异常,较高剂量引起垂体出现轻微病理改变,但是亚急性低剂量镍暴露不能引起凋亡指标明显改变。

关键词：硫酸镍 Caspase-3蛋白垂体激素病理损伤

垂体腺瘤患者的围手术期垂体激素监测及临床意义

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山东医药 2003年第15期43卷 3-5页

作者：孔军王厚忠丰育功张兵吴唏青岛市立医院山东青岛266011

为了对垂体腺瘤患者进行手术前后激素测定、分型、并监测术后垂体功能以及寻求一种判断手术切除程度及术后有无复发的方法 ,对 5 0例垂体腺瘤手术患者采用放免法测定手术前、后激素水平 ,对测定值进行回顾性分析 ,判断检测结果的相互关... 详细信息

为了对垂体腺瘤患者进行手术前后激素测定、分型、并监测术后垂体功能以及寻求一种判断手术切除程度及术后有无复发的方法 ,对 5 0例垂体腺瘤手术患者采用放免法测定手术前、后激素水平 ,对测定值进行回顾性分析 ,判断检测结果的相互关系并分析其临床意义。结果 :泌乳素 (PRL)腺瘤及生长激素 (GH)腺瘤全切组及未全切组术后激素水平均较术前明显降低 (P 激素水平与未全切组比较有明显差异 (P垂体瘤患者术前高激素水平状态 ,手术治疗有着肯定的治疗价值。其切除程度将决定着术后内分泌的改善水平。

关键词：垂体腺瘤外科手术围手术期垂体激素监测临床意义手术入路