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坏死梭杆菌44.5ku外膜蛋白的免疫原性分析

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 512-515页

作者：徐晶陈立志李淑艳冯二凯齐齐哈尔医学院生化教研室黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学省部共建实验室吉林长春130112

为分析从坏死梭杆菌中获得的44.5 ku外膜蛋白(OMP)免疫小鼠后的免疫原性,用SLS和LDS等试剂从坏死梭杆菌中提取44.5 ku外膜蛋白,将其作为免疫抗原经弗氏不完全佐剂乳化免疫小鼠,3次免疫后采血,获取血清并进行抗体效价、Western-blotting... 详细信息

为分析从坏死梭杆菌中获得的44.5 ku外膜蛋白(OMP)免疫小鼠后的免疫原性,用SLS和LDS等试剂从坏死梭杆菌中提取44.5 ku外膜蛋白,将其作为免疫抗原经弗氏不完全佐剂乳化免疫小鼠,3次免疫后采血,获取血清并进行抗体效价、Western-blotting免疫原性和保护力检测。结果显示,三免后试验组小鼠血清抗体效价高,同时在攻毒试验中具有较好的保护力,Western-blot显示具有较好的反应特异性。结果表明,坏死梭杆菌44.5 ku外膜蛋白具有较好的免疫应答水平,为坏死梭杆菌亚单位疫苗的研究提供了基础数据。

关键词：坏死梭杆菌外膜蛋白抗原性

坏死梭杆菌FN(A)型毒力株保护性抗原筛选及初步鉴定

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畜牧兽医学报 2008年第7期39卷 930-934页

作者：苗利光杨福合刘艳环王志刚李艳王克坚肖佳美中国农业科学院特产研究所吉林132109 厦门大学环境科学研究中心／海洋环境科学教育部重点实验室厦门361005

通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌FN(A)型毒力菌株菌体,分别以菌体裂解物上清和沉淀作为抗原免疫家兔制备血清。利用SDS-PAGE/Western-blot技术在菌体中筛选出4种具有免疫原性的组分,通过免疫后的攻毒试验,筛选出1种具有免疫保护性的抗原。... 详细信息

通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌FN(A)型毒力菌株菌体,分别以菌体裂解物上清和沉淀作为抗原免疫家兔制备血清。利用SDS-PAGE/Western-blot技术在菌体中筛选出4种具有免疫原性的组分,通过免疫后的攻毒试验,筛选出1种具有免疫保护性的抗原。抗原分离纯化后,进行N端氨基酸序列测定、免疫试验及生物学特性研究,据试验结果可初步判定该抗原为溶血素类似物或一种新发现的抗原物质。该抗原不仅能使机体产生保护性免疫反应,而且不同菌株中此种抗原间可产生明显的交叉免疫。

关键词：坏死梭杆菌保护性抗原筛选

坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段的原核表达及抗血清制备

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 906-910页

作者：张秀华陈立志赵利芳刘晓颖路伟中国农业科学院特产研究所吉林左家132109

本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增BSBSE片段,克隆到pMD18-T载体上,鉴定并测序正确后,构建pET32a-BSBSE表达质粒,转化*** BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE检测重组蛋白表达、Western blot检测重组蛋白... 详细信息

本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增BSBSE片段,克隆到pMD18-T载体上,鉴定并测序正确后,构建pET32a-BSBSE表达质粒,转化*** BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE检测重组蛋白表达、Western blot检测重组蛋白反应原性。以该重组蛋白免疫兔制备抗血清,经间接ELISA检测抗血清效价。结果表明,PCR扩增得到1100bp的BSBSE片段,以此片段构建了pET32a-BSBSE表达质粒,经诱导后获得了目的蛋白表达,以Western blot检测该重组蛋白证明为本研究的目的蛋白,并且与抗体具有反应原性。以间接ELISA检测该重组蛋白免疫兔制备的抗血清效价达105。研究结果将为坏死梭杆菌毒力因子(lkt)的深入研究奠定了物质基础。

关键词：坏死梭杆菌 1kt BSBSE 表达

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坏死梭杆菌致Lemierre综合征一例

中华结核和呼吸杂志 2021年第12期44卷 1106-1109页

作者：张悦悦王田乔邢小康张舸浙江大学医学院附属邵逸夫医院重症医学科杭州310000

Lemierre 综合征是一种罕见但病死率极高的一种感染性疾病,最常见的致病菌为坏死梭杆菌,专性厌氧,培养条件苛刻且阳性率低。本文报道了一例坏死梭杆菌引起的Lemierre 综合征,表现为发热、咽痛、左侧颈内静脉血栓形成及重症肺炎,经肺泡... 详细信息

Lemierre 综合征是一种罕见但病死率极高的一种感染性疾病,最常见的致病菌为坏死梭杆菌,专性厌氧,培养条件苛刻且阳性率低。本文报道了一例坏死梭杆菌引起的Lemierre 综合征,表现为发热、咽痛、左侧颈内静脉血栓形成及重症肺炎,经肺泡灌洗液宏基因组测序检出病原菌,通过充分有效的抗感染治疗后好转出院。这提示病原学快速诊断及早期有效的抗生素治疗对改善患者预后具有重要意义。

关键词：抗生素治疗重症肺炎肺泡灌洗液坏死梭杆菌感染性疾病抗感染治疗快速诊断宏基因组测序

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坏死梭杆菌导致Lemierre综合征1例

中华急诊医学杂志 2022年第11期31卷 1539-1540页

作者：王长远邢芫珍刘利欣王涛王晶首都医科大学宣武医院急诊科北京100053

1资料与方法患者男性,21岁,主因“间断发热、寒战伴头晕头痛2周”于2021年11月18日急诊收入院。患者诉2周前进食烧烤后出现发热,体温最高可达42℃,伴畏寒、寒战、咽痛、头晕、头痛、乏力,就诊于本院耳鼻喉科后,查体见扁桃体有脓点,快测... 详细信息

1资料与方法患者男性,21岁,主因“间断发热、寒战伴头晕头痛2周”于2021年11月18日急诊收入院。患者诉2周前进食烧烤后出现发热,体温最高可达42℃,伴畏寒、寒战、咽痛、头晕、头痛、乏力,就诊于本院耳鼻喉科后,查体见扁桃体有脓点,快测降钙素原(procalcitonin,PCT)为37.27 ng/mL,胸部CT检查未见异常,考虑诊断为“急性化脓性扁桃体炎”,先后给予左氧氟沙星、阿奇霉素抗感染及甲泼尼龙控制炎症后上述症状未见明显好转,为进一步治疗,收入急诊病房治疗,既往体健,入院时查体:体温41℃。

关键词：急性化脓性扁桃体炎降钙素原急诊病房左氧氟沙星坏死梭杆菌寒战阿奇霉素甲泼尼龙

坏死梭杆菌120ku血凝素相关外膜蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国畜牧兽医 2015年第11期42卷 2843-2849页

作者：吴洪超刘晓颖冯二凯朱言柱万洪理冯卓闫喜军陈立志中国农业科学院特产研究所长春130112 吉林特研生物技术有限责任公司长春130112

为了揭示坏死梭杆菌(***)120ku血凝素相关外膜蛋白的免疫原性,根据***120ku血凝素相关外膜蛋白基因的抗原表位分布情况设计特异性引物,扩增出3个彼此重叠、覆盖整个开放阅读框的基因片段p1、p2、p3,分别构建重组表达质粒pET-28a-p1、pET... 详细信息

为了揭示坏死梭杆菌(***)120ku血凝素相关外膜蛋白的免疫原性,根据***120ku血凝素相关外膜蛋白基因的抗原表位分布情况设计特异性引物,扩增出3个彼此重叠、覆盖整个开放阅读框的基因片段p1、p2、p3,分别构建重组表达质粒pET-28a-p1、pET-32a-p2、pET-32a-p3,在大肠杆菌中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting分析重组蛋白的表达情况和反应原性;以纯化的重组蛋白为抗原免疫试验兔,分析重组蛋白的免疫原性。结果显示,重组蛋白P1、P2、P3在大肠杆菌中均得到表达,分子质量分别约为48、59、62ku,能与***阳性的小鼠血清反应,可以刺激试验兔产生特异性抗体,说明***120ku血凝素相关外膜蛋白具有良好的免疫原性,为***基因工程亚单位疫苗的研制提供参考依据。

关键词：坏死梭杆菌血凝素相关外膜蛋白原核表达免疫原性分析

坏死梭杆菌毒力菌株FN(AB)94免疫原对鹿的初步免疫试验

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中国预防兽医学报 2002年第1期24卷 32-34页

作者：王克坚陈立志刘晓颖徐敏崔学哲张洪英张洪涛苗立光吴建新中国农业科学院特产研究所吉林左家132109 吉林农垦特产专科学校

本研究将坏死梭杆菌毒力菌株FN(AB) 94厌氧培养后 ,裂解制备抗原 ,与等量福氏完全佐剂混合 ,制备乳化佐剂疫苗。将疫苗分别接种 4头不同年龄的健康成年鹿 (每头接种 4ml)。 3头鹿作为对照组。接种前 ,静脉采血 ,进行对流免疫电泳检查。... 详细信息

本研究将坏死梭杆菌毒力菌株FN(AB) 94厌氧培养后 ,裂解制备抗原 ,与等量福氏完全佐剂混合 ,制备乳化佐剂疫苗。将疫苗分别接种 4头不同年龄的健康成年鹿 (每头接种 4ml)。 3头鹿作为对照组。接种前 ,静脉采血 ,进行对流免疫电泳检查。 30天后 ,分别用 15 0～ 40 0亿菌感染试验动物 ,然后混群饲养观察 ,并定期采血检查被免鹿血清中抗体消长变化。结果对照组鹿分别于 3个月后开始出现明显的临床症状 ,而免疫组不表现任何临床症状 ,6个月仍表现临床健康。 4头免疫鹿 6个月时都能检测到血清抗体 ,3头免疫鹿血清抗体可维持到 7个月后。试验表明 ,坏死梭杆菌毒力菌株FN(AB) 94疫苗接种鹿后 ,可刺激鹿产生很好的免疫力 ,从而通过本动物初步证明坏死梭杆菌毒力菌株FN(AB) 94免疫原具有良好的免疫原性 ,可以用于制备坏死杆菌病疫苗。

关键词：鹿 FN(AB)94免疫原免疫原性坏死梭杆菌毒力菌株

坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

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中国畜牧兽医 2019年第1期46卷 215-222页

作者：肖璐谢晶康润敏叶勇刚于吉锋曹冶李兴玉魏勇林毅廖党金潘梦叶健强戴卓建四川省畜牧科学研究院成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室成都610066

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn... 详细信息

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。

关键词：坏死梭杆菌原核表达外膜蛋白免疫原性杀菌试验

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坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达

中国畜牧兽医 2013年第6期40卷 57-60页

作者：徐晶陈立志刘晓颖冯二凯汪孙杰曹阅江苏科技大学生物与化学工程学院江苏镇江212018 中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学省部共建实验室吉林长春130112

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重... 详细信息

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。

关键词：坏死梭杆菌 OMP 诱导表达免疫活性

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