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地黄饮子调节PI3K/Akt信号通路保护AD小鼠脑组织星形胶质细胞损伤及糖酵解的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第8期29卷 10-18页

作者：余虹霓孙梦捷王凤丽康盛华韩广卉李东岳甄伟哲马涛北京中医药大学东方医院北京100078 北京中医药大学中医学院北京100029 中日友好医院北京100029

目的:研究地黄饮子调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,改善阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织星形胶质细胞损伤和糖酵解,提高AD小鼠认知功能的作用机制。方法:将40只4月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、模型+地黄饮... 详细信息

目的:研究地黄饮子调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,改善阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织星形胶质细胞损伤和糖酵解,提高AD小鼠认知功能的作用机制。方法:将40只4月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、模型+地黄饮子(2.5 g·kg^(-1))组,每组20只;同背景、同月龄C57BL/6J小鼠40只,随机分为正常组、正常+地黄饮子(2.5 g·kg^(-1))组,每组20只。正常+地黄饮子组和模型+地黄饮子组给予地黄饮子灌胃,正常组和模型组均给予等量无菌生理盐水,每天灌胃1次,连续给药150 d。Morris水迷宫实验测试小鼠定位航行与空间探索能力。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脑组织PI3K、Akt蛋白及其磷酸化水平,以及磷酸果糖激酶-1(PFK-1)、乙醛脱氢酶3家族B2(ALDH3B2)蛋白表达。免疫荧光法评估星形胶质细胞形态及ALDH3B2的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠在定位航行实验第2~5天中逃避潜伏期明显延长(P地黄饮子组小鼠的上述实验指标差异无统计学意义。与模型组比较,模型+地黄饮子组小鼠在定位航行实验第2~5天中逃避潜伏期明显缩短(P地黄饮子通过激活PI3K/Akt信号通路,上调PFK-1、ALDH3B2蛋白表达量,保护AD小鼠脑组织星形胶质细胞损伤,提高糖酵解活性,改善AD小鼠学习记忆能力。

关键词：地黄饮子阿尔茨海默病(AD) 星形胶质细胞糖酵解磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt) 磷酸果糖激酶-1(PFK-1)

地黄饮子通过PI3K/Akt和MAPK信号通路双重调节db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常的机制研究

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中华中医药学刊 2023年

作者：武东燕王小丹桂婉威柴金苗李钦青贺文彬张俊龙郭蕾山西中医药大学

目的：探讨地黄饮子通过磷脂酰肌醇三激酶-蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt）和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路双重调节db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢... 详细信息

目的：探讨地黄饮子通过磷脂酰肌醇三激酶-蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt）和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路双重调节db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常，探究地黄饮子多途径发挥治疗DR作用的分子机制。方法：10只db/m小鼠作为空白组，30只db/db小鼠随机分为模型组、地黄饮子组（地黄饮子，30.03 g/kg）、阳性对照组（二甲双胍，0.61 g/kg）。药物干预4周，每周检测小鼠体质量、空腹血糖。末次给药后进行口服糖耐量试验（oral glucose tolerance test，OGTT）及胰岛素耐量试验（insulin tolerance test，ITT）并计算曲线下面积（area under the curve，AUC）；葡萄糖氧化酶法检测小鼠视网膜葡萄糖含量；酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠视网膜胰岛素含量；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠视网膜组织病理改变；免疫组化法检测视网膜组织IRS1、GLUT4表达；实时荧光定量聚合酶链式反应法（RT-qPCR）检测视网膜PI3K、Akt、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated kinase，ERK）、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kainse，JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）mRNA表达量。结果：与空白对照组相比，模型组小鼠空腹血糖显著升高（P＜0.01）；OGTT、ITT试验各时间点血糖均升高（P＜0.05，P＜0.01）；视网膜组织水肿，新生血管生成；视网膜葡萄糖、胰岛素含量升高（P＜0.01）；IRS1蛋白表达量显著升高而GLUT4蛋白表达量显著降低（P＜0.01）；PI3K、Akt mRNA表达量降低（P＜0.05，P＜0.01）、ERK、JNK、p38MAPK mRNA表达量升高（P＜0.05，P＜0.01）。地黄饮子和阳性对照药物均可降低小鼠OGTT、ITT试验AUC（P＜0.01）；改善视网膜水肿，减少新生血管；降低视网膜葡萄糖、胰岛素含量（P＜0.05，P＜0.05）；降低小鼠视网膜IRS1蛋白表达，提高GLUT4蛋白表达（P＜0.05，P＜0.01）、升高PI3K、Akt mRNA表达量，降低ERK、JNK、p38MAPK mRNA表达量（P＜0.05，P＜0.01）。结论：地黄饮子可通过激活PI3K/Akt信号通路和抑制MAPK信号通路双重调节GLUT4表达从而改善db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常。

关键词：糖尿病视网膜病变地黄饮子胰岛素抵抗糖代谢异常双重调节

地黄饮子改善AD小鼠星形胶质细胞损伤调节突触结构功能的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第8期29卷 27-35页

作者：余虹霓孙梦捷韩广卉王凤丽康盛华李东岳马涛北京中医药大学东方医院北京100078 北京中医药大学中医学院北京100029

目的:探讨地黄饮子改善AD小鼠脑中星形胶质细胞损伤及保护突触结构功能的作用机制。方法:40只4月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、模型+地黄饮子(2.5 g·kg^(-1))组,每组20只;40只同背景、同月龄C57BL/6J小鼠,随机分为正常组、... 详细信息

目的:探讨地黄饮子改善AD小鼠脑中星形胶质细胞损伤及保护突触结构功能的作用机制。方法:40只4月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、模型+地黄饮子(2.5 g·kg^(-1))组,每组20只;40只同背景、同月龄C57BL/6J小鼠,随机分为正常组、正常+地黄饮子(2.5 g·kg^(-1))组,每组20只。正常+地黄饮子组和模型+地黄饮子组给予地黄饮子灌胃,正常组和模型组均给予等量无菌生理盐水,每天灌胃1次,连续给药150 d。采用小鼠避暗箱实验和Y迷宫自由交替实验测试小鼠学习记忆能力。采用液质联用质谱仪(LC-MS)测定样品中谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)含量;长时程增强(LTP)实验检测脑组织的突触可塑性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脑组织兴奋性氨基酸转运蛋白2(EAAT2),突触后致密物-95(PSD95)及突触素(SYN)的表达水平;免疫荧光法评估EAAT2的定位及表达;比色法检测小鼠脑组织Na^(+)-K^(+)ATP酶活性。结果:与正常组比较,模型组小鼠在避暗箱实验中停留潜伏期显著缩短(P地黄饮子组小鼠的上述实验指标差异没有统计学意义。与模型组比较,模型+地黄饮子组小鼠在避暗箱实验中停留潜伏期明显增加(P地黄饮子通过保护星形胶质细胞,增加Glu摄取,减少其异常累积,保护突触结构与功能,改善AD小鼠认知功能障碍。

关键词：地黄饮子阿尔茨海默病星形胶质细胞突触结构谷氨酸长时程增强

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地黄饮子抗衰老机制的实验研究进展

中国老年学杂志 2023年第4期43卷 987-990页

作者：周妍妍姜璐璐井宏颖黑龙江中医药大学基础医学院黑龙江哈尔滨150040 哈尔滨体育学院运动人体科学学院

衰老是生物体随着时间推移而自然发生的过程,是复杂的生理现象。随着我国人口老龄化进程加快,有关衰老的机制已成为医学界的研究热,针对抗衰老药物的探索研究也越来越多。中医中药在抗衰老的研究中占比很大,其中补肾方剂抗衰老的研究甚... 详细信息

衰老是生物体随着时间推移而自然发生的过程,是复杂的生理现象。随着我国人口老龄化进程加快,有关衰老的机制已成为医学界的研究热,针对抗衰老药物的探索研究也越来越多。中医中药在抗衰老的研究中占比很大,其中补肾方剂抗衰老的研究甚多,阴阳双补代表方剂地黄饮子的抗衰老研究尤为突出。

关键词：地黄饮子抗衰老

地黄饮子对 APP /PS1 双转基因小鼠肠道菌群的影响

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时珍国医国药 2023年第1期34卷 74-77页

作者：陈靖王健王生化宁天一李阳迟海月梁喜才辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

目的采用16S rRNA测序技术,检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组,其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^(-... 详细信息

目的采用16S rRNA测序技术,检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组,其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^(-1),西药组灌胃给予安理申0.8mg·kg^(-1),正常组ig给予同等体积的生理盐水,1次/d,连续28 d。提取试剂盒抽提各组粪便样本中DNA,对V3-V4区进行PCR扩增,再使用Illumina Miseq PE300高通量测序平台进行Paired-end测序。最后对数据进行生物信息学分析,结果本研究共得到1003个OTUs。物种累积曲线表明本研究所收集的样本量充足。Alpha多样性分析,中药组与其余组相比显著提高了菌群的多样性,Beta多样性分析,各组数据组间差异明显,物种韦恩图显示,中药组和西药组均能降低APP模型小鼠的微生物菌群OTU丰度,但较正常组增加了OTU丰度。菌种分类水平提示地黄饮子更倾向提升菌群的多样性,尤其是在厚壁菌门的菌种,优势菌种的比例更接近正常组;LEfSe分析中药组的优势菌群是梭菌纲o_Clostridia_vadinBB60_group,疣微菌g_UCG_005。结论地黄饮子可能通过肠道菌群改变菌群差异性和多样性,提高厚壁菌门、芽孢杆菌属、乳杆菌属、毛螺旋菌属等菌种丰度,以肠脑轴的方式改善AD的认知症状。

关键词：肠-脑轴 16S rRNA 地黄饮子 App小鼠

地黄饮子对db/db小鼠海马和视网膜神经元凋亡机制的研究(英文)

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2024年

作者：王小丹李钦青桂婉威武东燕柴金苗贺文彬张俊龙山西中医药大学中医脑病学山西省重点实验室山西中医药大学分子中医药学国家国际联合研究中心

本研究使用地黄饮子对db/db小鼠进行干预，以期研究db/db小鼠脑和视网膜神经元凋亡的机制。首先，选取8–9周龄雄性db/db小鼠30只，随机分为模型组、地黄饮子组(30.03 g·kg-1)、二甲双胍组(0.58 g·kg-1)，每组10只。选取同背景、... 详细信息

本研究使用地黄饮子对db/db小鼠进行干预，以期研究db/db小鼠脑和视网膜神经元凋亡的机制。首先，选取8–9周龄雄性db/db小鼠30只，随机分为模型组、地黄饮子组(30.03 g·kg-1)、二甲双胍组(0.58 g·kg-1)，每组10只。选取同背景、同周龄dbm小鼠10只作为空白组。通过对各组小鼠进行配对联想学习测试，评价小鼠学习记忆功能。苏木素-伊红(HE)染色观察脑部海马CA1区和视网膜改变，尼氏染色观察海马CA1区和视网膜神经元情况，免疫组化检测海马和视网膜抗凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子Bax阳性表达，实时荧光定量PCR检测海马和视网膜抗凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子Bax mRNA的表达， Western blot检测JNK、p-JNK、p38Mapk、p-p38Mapk蛋白表达水平。实验结果显示模型组配对联想学习实验测试结果正确率降低(P地黄饮子组和二甲双胍组配对联想学习实验测试正确率增高(P地黄饮子可以通过抑来制JNK/p38MAPK信号通路，从而增加抗凋亡因子Bcl-2和降低促凋亡因子Bax表达抑制db/db小鼠海马CA1区和视网膜神经元凋亡。

关键词： db/db小鼠地黄饮子凋亡视网膜海马

地黄饮子加减方对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元损伤的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第8期26卷 53-61页

作者：周雨慧苗明三芦锰郭金栋武博文李晓宁高维娟武密山河北中医学院基础医学院方剂学教研室石家庄050200 河南中医药大学郑州450046 河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室石家庄050091

目的:观察地黄饮子加减方对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的影响。方法:将84只SD雄性大鼠,按随机原则选出12只大鼠作为假手术组,其余72只大鼠采用两血管阻断法制备血管性痴呆模型,筛选60只模型大鼠,每组12只,随机分... 详细信息

目的:观察地黄饮子加减方对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的影响。方法:将84只SD雄性大鼠,按随机原则选出12只大鼠作为假手术组,其余72只大鼠采用两血管阻断法制备血管性痴呆模型,筛选60只模型大鼠,每组12只,随机分为模型组,尼莫地平组(0.011 g·kg^-1),地黄饮子加减方高、中、低(4.54,2.27,1.14 g·kg^-1)剂量组。连续灌胃30 d后,Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)观察海马CA1区神经元形态结构改变,透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构变化,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测海马CA1区细胞凋亡水平,免疫组化(IHC)检测海马CA1区组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越原平台次数显著减少(P地黄饮子加减方可改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力和海马CA1区神经元损伤,潜在机制可能与PI3K/Akt信号转导途径的激活,抑制大鼠海马CA1区神经细胞的凋亡有关。

关键词：地黄饮子血管性痴呆神经元凋亡磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B

地黄饮子辅助治疗肾虚髓减型2型糖尿病合并轻度认知功能障碍的临床疗效观察

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时珍国医国药 2022年第2期33卷 410-412页

作者：李全贾斯婷关慧波黑龙江中医药大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150040 黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

目的观察地黄饮子辅助治疗肾虚髓减型2型糖尿病(T2DM)合并轻度认知功能障碍(MCI)患者的临床疗效观察。方法将64例肾虚髓减型T2DM合并MCI患者随机分为地黄饮子辅助组和多奈哌齐组。根据病情制定整体式降糖方案,多奈哌齐组给予口服盐酸多... 详细信息

目的观察地黄饮子辅助治疗肾虚髓减型2型糖尿病(T2DM)合并轻度认知功能障碍(MCI)患者的临床疗效观察。方法将64例肾虚髓减型T2DM合并MCI患者随机分为地黄饮子辅助组和多奈哌齐组。根据病情制定整体式降糖方案,多奈哌齐组给予口服盐酸多奈哌齐片治疗,地黄饮子辅助组在此基础上予以地黄饮子辅助治疗,4周一个疗程,共治疗2个疗程。治疗后,比较两组患者血糖相关指标、MMSE评分、MoCA评分以及中医证候积分的变化,并对比两组疗效。结果2个疗程后,两组血糖相关指标与治疗前比较明显降低(P0.05);两组患者MMSE、MoCA量表评分均明显改善(P地黄饮子辅助组具有明显统计学意义(P地黄饮子辅助组治疗后中医证候积分显著降低(P地黄饮子辅助组总有效率90.63%,优于多奈哌齐组的71.88%(P地黄饮子辅助治疗肾虚髓减型2型糖尿病合并轻度认知功能障碍临床疗效显著,能在稳定血糖基础上有效改善患者的认知功能障碍,且安全性良好。

关键词：地黄饮子肾虚髓减型中医药辅助治疗 2型糖尿病合并轻度认知功能障碍临床疗效

地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用及其机制

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中国实验方剂学杂志 2019年第4期25卷 42-48页

作者：王俊杰楼琦汤娟娟白亚平李倩张培璐杜月光浙江中医药大学杭州310053 浙江省医学科学院杭州310013

目的:探讨地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其初步机制。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.01 g·kg^(-1)),地黄饮子高、中、低剂量组(38.80,19.40,9.70 g·kg^(-1))... 详细信息

目的:探讨地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其初步机制。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.01 g·kg^(-1)),地黄饮子高、中、低剂量组(38.80,19.40,9.70 g·kg^(-1)),每组20只,连续给药28 d;术后第7,14,28天通过改良神经功能缺损评分(m NSS),第28天行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,苏木素-伊红(HE)染色观察地黄饮子的保护作用,应用免疫荧光技术观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)阳性细胞数(第28天)以分析神经干细胞(NSCs)增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达情况。结果:术后第7,14,28天地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组的m NSS明显低于同时间段的模型组(P地黄饮子高、中剂量组和尼莫地平组的脑梗死体积占脑组织体积的百分比均低于模型组(P地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组大鼠脑组织坏死和软化灶不明显,并可见神经元细胞和神经胶质细胞增生;术后第28天,上述3组SVZ的Brd U阳性细胞数显著高于模型组(P地黄饮子高剂量组Brd U阳性细胞数高于尼莫地平组(P地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组SVZ的Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达水平明显高于模型组(P地黄饮子高、中、低剂量组(P地黄饮子能改善MCAO大鼠模型的神经功能缺损,减小脑梗死体积,减轻脑组织病理改变,从而对脑缺血再灌注损伤大鼠起到保护作用,可能与激活Notch信号通路,上调Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达,从而促进NSCs增殖有关。

关键词：地黄饮子脑缺血再灌注损伤实验研究神经干细胞