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地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用

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畜牧兽医学报 2005年第6期36卷 585-589页

作者：刁有祥丁家波姜世金孙淑红崔治中陈本龙山东农业大学动物科技学院泰安271018

利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌... 详细信息

利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌地高辛标记探针支气管败血波氏杆菌多杀性巴氏杆菌应用猪肺炎支原体流行病学调查 PCR反应 PCR产物核酸探针大肠杆菌沙门氏菌葡萄球菌核酸杂交检测结果病变组织扁桃体 DNA Apx 特异性血清型

地高辛标记探针检测鼻气管鸟杆菌的研究与应用

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第4期38卷 19-23页

作者：李瑶瑶刁有祥李宏梅山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

【目的】建立鼻气管鸟杆菌(Ornithobacteriumrhinotracheale,ORT)快速、准确的检测方法。【方法】利用PCR扩增鼻气管鸟杆菌16 S rRNA基因的671 bp特异性片段,经回收纯化后用地高辛标记,建立了地高辛标记探针诊断ORT的方法。【结果】特... 详细信息

【目的】建立鼻气管鸟杆菌(Ornithobacteriumrhinotracheale,ORT)快速、准确的检测方法。【方法】利用PCR扩增鼻气管鸟杆菌16 S rRNA基因的671 bp特异性片段,经回收纯化后用地高辛标记,建立了地高辛标记探针诊断ORT的方法。【结果】特异性试验表明,地高辛标记探针可与ORT不同血清型参考菌株的核酸发生特异性杂交,而与鸡大肠杆菌、副鸡嗜血杆菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌的核酸杂交均为阴性;敏感性试验结果表明,地高辛标记探针对ORT的最低检出量为100 pg/μL;利用该探针对分离菌株和疑似病料进行检测,结果均与PCR检测结果一致。【结论】建立了地高辛标记探针检测ORT的方法,为ORT的诊断提供了一种敏感性高、特异性强、简便且易行的方法。

关键词：鼻气管鸟杆菌地高辛标记探针杂交检测

地高辛标记探针检测重组双功能水蛭素中的DNA残留量

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药物生物技术 2004年第6期11卷 392-394页

作者：蔡旭马端刘康达宋后燕复旦大学分子医学教育部重点实验室上海200032 复旦大学附属中山医院中心实验室上海200032

为检测注射用重组双功能水蛭素半成品中的DNA残留量 ,应用地高辛标记重组双功能水蛭素工程菌DNA ,并以此为DNA探针进行点杂交 ,同时做特异性及灵敏度实验。结果证明 ,该方法检测最低限值可达1pg ,且重复性好 ,特异性强 ,操作较简便。

关键词：地高辛标记探针点杂交法水蛭素 DNA残留量

地高辛标记探针检测五种葫芦科作物病毒的斑点杂交方法

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地高辛标记探针检测五种葫芦科作物病毒的斑点杂交方法

作者：孟娟中国农业科学院

学位级别：硕士

本研究探索了5种葫芦科作物病毒即小西葫芦黄花叶病毒（Zuccini yellow mosaic virus，ZYMV）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、番木瓜环斑病毒-西瓜株系（Papaya ringspo... 详细信息

本研究探索了5种葫芦科作物病毒即小西葫芦黄花叶病毒（Zuccini yellow mosaic virus，ZYMV）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、番木瓜环斑病毒-西瓜株系（Papaya ringspot virus watermelon strain，PRSV-W）和南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus，SqMV）的斑点杂交检测技术，为葫芦科作物种子带毒的快速准确鉴定、流行病学研究和转基因检测等提供技术和方法。以构建的重组质粒为模板，用PCR方法合成了相应的地高辛标记cDNA探针。通过斑点杂交检测西葫芦病叶汁液来考察探针的灵敏性和特异性。同时设计了3种不同长度的SqMV探针（0.55、1.6、2.7 kb）对杂交效果进行了研究。并用建立的方法检测了采自河南郑州、开封、海南三亚等不同地区不同年份的18份样本以及2007年采自郑州果树所根据3种症状类型分类的15份西葫芦样本，以考察本方法的实际应用效果。结果显示：ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W和SqMV的5种探针检测各自侵染西葫芦病汁液的稀释低限分别为1：160、1：160、1：320、1：160、1：320，而每种探针与健康西葫芦和其它4种病毒的反应均为阴性：不同长度的SqMV探针杂交结果相同。得出结论：用PCR方法合成的地高辛标记的探针，能够直接在植物组织中将5种病毒检测出来，具有较好的灵敏性、特异性和重复性;探针的长度对杂交的灵敏性和特异性没有影响;用建立的检测方法能够将5种病毒在采集的样本中检测出来。

关键词：聚合酶链反应（PCR）地高辛标记探针斑点杂交 ZYMV WMV CMV PRSV-W SqMV

地高辛标记探针在Sou the rn杂交分析中的技术要点

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生物学通报 2003年第1期38卷 52-53页

作者：陆小平周文军小岛峰雄苏州大学生命科学学院江苏苏州215006 日本信州大学纤维学部

外源基因是否成功导入受体材料的基因组中,必须从转化植株中找到分子生物学的检测证据.

关键词：地高辛标记探针 Southern杂交分析技术要点

用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究

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畜牧兽医学报 2008年第11期39卷 1621-1624页

作者：刘志杰任慧英温建新刘文华邹玲韩先杰魏笑笑青岛农业大学动物科技学院青岛266109

利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、... 详细信息

利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4 pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。

关键词：伪狂犬病毒 gE基因地高辛标记探针斑点杂交野毒株

用PCR法制备地高辛标记探针诊断DMD基因缺失

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中华医学遗传学杂志 1995年第5期12卷 298-299页

作者：余元勋安徽医科大学安徽省优生优育遗传医学中心

用ＰＣＲ法制备地高辛标记探针诊断ＤＭＤ基因缺失余元勋杜氏肌营养不良（ＤＭＤ）是一种对人危害严重的Ｘ－连锁隐性遗传病，大约每３５００名出生男婴中就有１名罹患此病［１］。约２／３的患者基因突变由遗传而来，而另１／３为新突... 详细信息

用ＰＣＲ法制备地高辛标记探针诊断ＤＭＤ基因缺失余元勋杜氏肌营养不良（ＤＭＤ）是一种对人危害严重的Ｘ－连锁隐性遗传病，大约每３５００名出生男婴中就有１名罹患此病［１］。约２／３的患者基因突变由遗传而来，而另１／３为新突变所致。肌营养不良蛋白（ｄｙｓｔｒ...

关键词：肌营养障碍基因缺失地高辛标记探针 DMD PCR

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

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泸州医学院学报 1997年第2期20卷 94-97页

作者：郭大为泸州医学院附属医院 646000

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测HBVDNA的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和(32)P标记探针进行平行检测对照．结果表明，地高辛探针检测灵敏度为0．1Pg，已达到(32)P中标记探针水平。生物素探针为1～10Pg。两种... 详细信息

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测HBVDNA的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和(32)P标记探针进行平行检测对照．结果表明，地高辛探针检测灵敏度为0．1Pg，已达到(32)P中标记探针水平。生物素探针为1～10Pg。两种探针与32P标记探针相比。符合率分别96．65％和89．13％；敏感性分别为94．44％和83．33％；特异性分别为96．43％和92．86％。两种探针在－20℃存放6月后检测结果前后一致。研究结果表明，地高辛标记探针和生物素标记探针斑点杂交检测HBV．DNA都具有较高的敏感性、特异性和稳定性，其中以地高辛标记探针更优。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA 地高辛标记探针生物素标记

地高辛标记探针检测生物制品中残余DNA含量

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微生物学免疫学进展 2002年第4期30卷 23-25页

作者：李玉姚伟张岩锐王跃兰州生物制品研究所兰州730046

用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗、重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗、出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量。结果表明 ,该方法特异性强 ,灵敏度高。

关键词：地高辛标记探针检测生物制品残余DNA含量