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地高辛标记cDNA探针检测苹果茎痘病毒

植物病理学报 2006年第5期36卷 470-472页

作者：杨俊玲董雅凤李世访张尊平何峻中国农业科学院果树研究所辽宁兴城125100 中国农业科学院植物保护研究所北京100094

Partial sequence(314 bp) of ASPV was cloned and used as a probe labelled with *** total RNA extracted from samples with Apple stem pitting virus and a series of dilutions of plasmid with ASPV-cDNA were detected by dot blot *** results showed that the probe was sensitive and *** probe couldn’t hybridize with total RNA of Apple stem grooving virus,Apple mosaic virus and Apple chlorotic leaf spot virus samples as well as negative control,only hybridized with that extracted from dormant shoot infected with *** sensitivity for detection of plasmid contained ASPV-cDNA was 1.64 μg.

关键词：苹果茎痘病毒 cDNA探针地高辛标记检测无病毒苗木病毒病害 virus stem

地高辛标记的cDNA探针检测IL-6mRNA表达的方法

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解剖学杂志 2001年第2期24卷 189-191页

作者：姜蓉王莎莉王亚平郑敏王勇重庆医科大学基础医学院重庆400016

IL-6(interleukin-6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子,在血液病及心、脑疾病时有异常表达.IL-6被认为是目前治疗各种血小板减少症的最佳药物,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用.迄今,IL-6的检测多... 详细信息

IL-6(interleukin-6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子,在血液病及心、脑疾病时有异常表达.IL-6被认为是目前治疗各种血小板减少症的最佳药物,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用.迄今,IL-6的检测多采用以细胞培养为基础的生物学活性检测,该方法不仅难以反映IL-6基因转录水平,而且特异性和灵敏度均受到限制.本文采用随机引物法对人IL-6cDNA探针进行地高辛标记,核酸分子原位杂交技术,建立了在转录水平上直观检测IL-6mRNA表达的实验技术,为研究IL-6的基因表达与调控奠定了基础.

关键词：地高辛标记 cDNA探针白细胞介素6 mRNA 基因表达

地高辛标记的cDNA探针检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒及马铃薯Y病毒

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植物病理学报 2004年第1期34卷 75-79页

作者：杜国英王锡锋周广和中国农业科学院植物保护研究所

根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行... 详细信息

根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行体外扩增,分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段,并克隆到pGEM-T easy质粒载体上,以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1:1 000、1:10 000、1:320,检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1:100、1:100、1:10,而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。

关键词：地高辛标记 cDNA探针检测技术烟草花叶病毒黄瓜马铃薯 Y病毒

地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 902-903页

作者：贺艳施柯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的... 详细信息

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

关键词：地高辛标记 DNA探针核酸疫苗宿主菌基因组 DNA含量乙肝 DNA疫苗制品

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地高辛标记C15A核酸探针检测牛巴贝斯虫

中国兽医学报 1998年第6期18卷 560-562页

作者：吴鉴三谢明权张肖正吴惠贤王志亮谢宏料杜元钊彭新宇农业部动物检疫所广东省农业科学院兽医研究所

为了提高牛巴贝斯虫核酸探针的检测性能，制备了地高辛标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针。该探针检测牛巴贝斯虫ＤＮＡ的灵敏度为３２ｐｇ，检测探针ＤＮＡ的灵敏度为０．１ｐｇ；检测其他对照血液原虫（双芽巴贝斯虫、边缘无浆体、瑟... 详细信息

为了提高牛巴贝斯虫核酸探针的检测性能，制备了地高辛标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针。该探针检测牛巴贝斯虫ＤＮＡ的灵敏度为３２ｐｇ，检测探针ＤＮＡ的灵敏度为０．１ｐｇ；检测其他对照血液原虫（双芽巴贝斯虫、边缘无浆体、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫、卵圆巴贝斯虫）和牛血细胞的ＤＮＡ，均未出现非特异性反应。与光敏生物素标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针比较，光敏生物素标记探针能检出１０％带虫血１２．５μＬ，而地高辛标记探针能检出１０％带虫血０．０１５μＬ，且杂交背景浅，显色深。

关键词：牛巴贝斯虫核酸探针地高辛标记

地高辛标记的大鼠NGF RNA探针的制备和应用

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神经解剖学杂志 2005年第4期21卷 435-438页

作者：沈宓丁斐南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001

制备用地高辛标记的神经生长因子(NGF)的RNA探针并用其研究NGF在海马组织中的表达。设计NGF引物,构建NGF/pGEMT重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针... 详细信息

制备用地高辛标记的神经生长因子(NGF)的RNA探针并用其研究NGF在海马组织中的表达。设计NGF引物,构建NGF/pGEMT重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针。运用点膜杂交的方法检测探针的敏感度;运用该探针的原位杂交法分析NGF在海马中的表达。本研究成功地构建了NGF/pGEMT质粒,获得了正、反义digNGFRNA探针,并应用该探针在海马中观察到NGFmRNA的表达。本研究的结果为深入探讨NGF在海马发育和损伤过程中的表达奠定了基础。

关键词：地高辛标记大鼠 RNA探针制备神经生长因子海马原位分子杂交

PCR系统制备地高辛标记的探针检测脊髓灰质炎病毒核酸

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中华流行病学杂志 1997年第3期18卷 164-166页

作者：刘明团王树声朱田风韦一知广西壮族自治区卫生防疫站南宁530021

笔者应用聚合酶链反应（PCR）合成系统，以逆转录的SabinⅠ、Ⅱ、Ⅲ型病毒cDNA为模板，在反应液中加入标记的Dig-dUTP，经扩增制备了地高辛配基标记的脊髓灰质炎病毒cDNA探针、该法比PCR扩增产物后，电泳，片段回收到标记、提纯，常需3... 详细信息

笔者应用聚合酶链反应（PCR）合成系统，以逆转录的SabinⅠ、Ⅱ、Ⅲ型病毒cDNA为模板，在反应液中加入标记的Dig-dUTP，经扩增制备了地高辛配基标记的脊髓灰质炎病毒cDNA探针、该法比PCR扩增产物后，电泳，片段回收到标记、提纯，常需3天。结果比较PCR技术直接制备地高辛标记cDNA探针方便，快速，标记率高，用于型别鉴定比中和试验快，敏感，特异性强等优点。

关键词：脊髓灰质炎病毒核酸斑点杂交地高辛标记 PCR

地高辛标记PPV-DNA-C及PUP重组质粒探针的比较研究

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中国兽医杂志 1997年第3期23卷 3-4页

作者：侯喜林甘孟侯余丽芸黑龙江八一农垦大学

应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型ＤＮＡ的ＰｓｔⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切片段Ｃ及被克隆到ＰＵＣ１９中的Ｃ片段形成的重组质粒ＰＵＰ利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒ＤＮＡ及ＰＵＰ重组质粒... 详细信息

应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型ＤＮＡ的ＰｓｔⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切片段Ｃ及被克隆到ＰＵＣ１９中的Ｃ片段形成的重组质粒ＰＵＰ利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒ＤＮＡ及ＰＵＰ重组质粒于硝酸纤维素膜上打点杂交，免疫呈色后均为阳性反应，而对照的猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病毒、ＰＫ－１５细胞的核酸均为阴性反应。通过对已知量的ＰＰＶ－ＤＮＡ检测发现Ｃ探针及ＰＵＰ探针的最低检出限量分别为４０ｐｇＤＮＡ和４ｐｇＤＮＡ。

关键词：重组质粒核酸探针地高辛标记

地高辛标记cDNA探针检测猪繁殖与呼吸综合征病毒

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畜牧与兽医 2007年第5期39卷 43-45页

作者：李广明姜平李玉峰秦承学南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF7基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出394 bp的cDNA。用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,并以此为模板制备出地高辛标记的cDNA探针。特异性试验表明,该探针仅与PRRSV核酸反应,与PPV、PRV、FMDV、HCV... 详细信息

本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF7基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出394 bp的cDNA。用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,并以此为模板制备出地高辛标记的cDNA探针。特异性试验表明,该探针仅与PRRSV核酸反应,与PPV、PRV、FMDV、HCV及PCV2的核酸反应为阴性。敏感性检测表明,采用CSPD化学发光检测时,硝酸纤维素膜上最低检出量为62.5 pg;尼龙膜上最低检出量为0.5 pg。应用该探针,在尼龙膜上对10份PRRSV阳性病料的组织RNA样品进行检测,结果均为阳性,与RT-PCR检测结果一致,证明该方法可用于PRRSV临床样品检测。

关键词：地高辛标记探针斑点杂交化学发光猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒