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地衣内生菌Myxotrichum sp.的代谢产物的研究

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天然产物研究与开发 2014年第4期26卷 513-516,560页

作者：元超李刚吴长生李铭郭玉华赵遵田娄红祥中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所云南分所西双版纳州傣药南药重点实验室景洪666100 山东大学药学院济南250012 山东师范大学生命科学学院济南250014

采用硅胶柱色谱，重结晶，高效液相色谱等分离方法从地衣内生菌Myxotrichum sp．的发酵液中共分离得到10个化合物，根据理化性质和波谱数据分别鉴定为：麦角甾醇（1），（3β，5α，8α，22E，24R）-5，8-epidioxy-ergos—ta-6，9（11）... 详细信息

采用硅胶柱色谱，重结晶，高效液相色谱等分离方法从地衣内生菌Myxotrichum sp．的发酵液中共分离得到10个化合物，根据理化性质和波谱数据分别鉴定为：麦角甾醇（1），（3β，5α，8α，22E，24R）-5，8-epidioxy-ergos—ta-6，9（11），22-trien-3-ol（2），麦角甾醇过氧化物（3），7-羟基-2，5-二甲基色原酮（4），7，8-dihydro-7，8-dihydroxy-3，7-dimethyl-2-benzopyran-6-one（5），7-hydroxy-2-（2-hydroxypropyl）-5-methylchromone（6），Anhydroful vicacid（7），柠檬霉素（8），2，3二羟柠檬菌素（9），柠檬菌素（10）。化合物4—10的体外抑制人白血病细胞K562实验表明，该七种化合物均表现非常弱的细胞毒活性。

关键词：地衣内生菌代谢产物细胞毒 Myxotrichum sp

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浙江省清凉峰地衣内生菌的初步研究

浙江省清凉峰地衣内生菌的初步研究

作者：刘静山东师范大学

学位级别：硕士

地衣（lichens）是由真菌（fungi）和藻类(algae)组成的互利共生的“二元”生物体，其中的藻类通常为绿藻，真菌多为子囊菌或担子菌。地衣体分布广泛，可适应多种极端环境。地衣内生菌主要生长于地衣体的髓层，且呈现出高度的物种多样... 详细信息

地衣（lichens）是由真菌（fungi）和藻类(algae)组成的互利共生的“二元”生物体，其中的藻类通常为绿藻，真菌多为子囊菌或担子菌。地衣体分布广泛，可适应多种极端环境。地衣内生菌主要生长于地衣体的髓层，且呈现出高度的物种多样性，目前，研究发现，分离培养的地衣内生菌产生的次生代谢产物具有多种重要的生物活性，如抗氧化、抗病虫害、抗菌、抗肿瘤、免疫抑制等，且很多化合物具有新颖的化学结构。本实验以浙江省清凉峰地衣为实验材料分离培养内生菌，实验结果显示了该地区地衣内生菌的物种多样性，并对地衣内生菌的次生代谢产物进行活性分析以及化合物的分离提取的初步研究。该研究一改往常的Yamomoto法采用独特的刮皮层挑取菌丝法对清凉峰19个属共168份地衣进行分离，共获得270株内生菌菌株。选取其中菌落形态、颜色差异较大的76株地衣内生真菌进行ITS和28S片段的序列测定。并通过GenBank数据库搜索，ClastalX1.83多重序列比对以及MEGA4.0最小进化(ME)法构建系统发育树，经鉴定，其中的75株内生真菌都属于子囊菌门（Ascomycota），另外1株属于担子菌门（Tremellomycetes）银耳目的无性型（mitosporic Tremellales）。子囊菌门的75株内生真菌分属于4个纲：座囊菌纲、散囊菌纲、锤舌菌纲和粪壳菌纲，9个目及其少数的地位未知的类群。其分类地位的鉴定表明清凉峰地衣内生真菌具有丰富的生物多样性。该实验中还分离到5株大团囊虫草属（Elaphocordyceps）内生菌菌株。实验室之前也曾有人从云南丽江老君山以及南极等地采集的地衣体标本中分离到多株大团囊虫草属真菌，从而显示了虫草属真菌以地衣体为宿主的的特殊性以及地衣虫草属真菌无区域限制性。虫草通过调节机体的免疫系统，以增强机体的免疫能力，可以抵御体内肿瘤细胞的生殖，清除机体坏死的细胞、组织，对外界的病毒、细菌等具抗菌作用，因此该大团囊虫草属菌株为开发抗菌药物提供了重要的生物新资源，具有较高的科研价值。对清凉峰分离得到的76株地衣内生真菌的次生代谢产物分别利用滤纸片法、96孔板法和MTT法进行抗细菌、真菌、抗肿瘤活性的筛选。其中，有5株菌株对鳗弧菌、大肠杆菌、枯草杆菌的抗菌能力较强，但对金黄色葡萄球菌的抗菌能力都较弱，有4株菌株对白色念珠菌有较强的抗菌能力，其中菌株20104794c的抗白念活性最强，其MIC为8μg/ml。抗肿瘤活性的筛选结果表明这些菌株都不具抗人乳腺癌细胞MCF-7生长的能力。将菌株20104730d进行发酵，获得菌株发酵液的乙酸乙酯粗提物，对该粗提物结合硅胶柱和凝胶柱层析以及高效液相进行单体化合物的分离提取，共分离得到两个已知化合物，分别为麦角甾醇(ergosterol)和过氧麦角甾醇(ergosterolperoxide)，其中过氧麦角甾醇具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、免疫抑制、对DNA拓扑异构酶活性的抑制作用等多种活性有很高的药用价值。

关键词：地衣内生菌分离培养 ITS 28S 系统发育多样性生物活性分离提取

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浙江清凉峰地衣内生菌物种多样性及活性研究

山东科学 2013年第2期26卷 48-52页

作者：刘静胡玲王海英赵遵田山东师范大学生命科学学院山东济南250014

采用挑取地衣体髓层菌丝法对浙江省清凉峰的地衣内生菌进行分离培养。基于ITS序列和28S序列的系统发育分析表明,选取的55株内生菌都属于子囊菌门且具高度的物种多样性。用滤纸片法检测该内生菌次生代谢产物的抗细菌、真菌活性,发现其中... 详细信息

采用挑取地衣体髓层菌丝法对浙江省清凉峰的地衣内生菌进行分离培养。基于ITS序列和28S序列的系统发育分析表明,选取的55株内生菌都属于子囊菌门且具高度的物种多样性。用滤纸片法检测该内生菌次生代谢产物的抗细菌、真菌活性,发现其中有8株具抗菌活性,占所测菌株的14.55%,抑菌圈的直径最大达到3 cm。研究表明地衣内生菌可产生丰富的具抑菌活性的次生代谢产物,可作为对多种病原物具有抑菌活性物质筛选的资源,是抑菌活性物质潜在的、丰富的资源库。

关键词：地衣内生菌 ITS序列和28S序列抑菌活性

斗篷山自然保护区地衣内生菌的分离及次生代谢产物研究

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斗篷山自然保护区地衣内生菌的分离及次生代谢产物研究

基于学习进阶理论的“微生物的纯培养”实验教学

多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：周璇杨彩玲孟庆峰付少彬遵义医科大学

地衣是共生的完美典型。地衣中除了共生菌外还有大量内生菌,近年来,由于地衣内生菌中化合物的出新率高而报道越来越多,目前已成为新结构活性化合物发现的新热点之一。本论文首次对斗篷山地衣资源进行调查研究,已从采集的地衣标本分离出4... 详细信息

地衣是共生的完美典型。地衣中除了共生菌外还有大量内生菌,近年来,由于地衣内生菌中化合物的出新率高而报道越来越多,目前已成为新结构活性化合物发现的新热点之一。本论文首次对斗篷山地衣资源进行调查研究,已从采集的地衣标本分离出40余株地衣内生菌,包括内生真菌和内生细菌,对其中的20余株进行了生物种属鉴定,并结合抗菌实验筛选到一株地衣内生真菌DPS165-9,菌丝紧密,无水滴,蔓延生长,呈绒毛状,初期呈白色,后期会分泌,黑色色素,生物学鉴定为Daldinia childiae,对表面葡萄球菌Z12、布氏杆菌Brucella sp. B103、金黄色葡萄球菌S. aureus 6538、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis163、耐药藤黄微球菌Micrococcus luteus 261等均显示抑制活性,尤其对耐药藤黄微球菌显示较强的抗菌活性（抑菌圈直径达到34mm）,同时还具有一定的抗氧化能力。对其扩大发酵培养,经过乙酸乙酯萃取,采用硅胶柱色谱法、制备薄层色谱等方法分离纯化次生代谢产物,结合核磁共振波谱法、质谱法等已分出萘环类和环已二烯酯类的化合物,为斗篷山自然保护区的升级及开发利用其地衣资源奠定基础,具有深远地研究意义。

关键词：地衣地衣内生菌分离次生代谢产物

来源： cnki会议评论

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生物学教学 2024年

作者：高微山东省青岛市西海岸中学

在“微生物的纯培养”实验教学过程中,基于学习进阶理论,以地衣内生菌的分离、纯化和培养为主线任务,引导学生依托文献生成课题,完成对“髓层刮离法”的自主设计和操作,在真实科研情境中发展学生的技术和工程等高阶思维。实验结果表明,... 详细信息

在“微生物的纯培养”实验教学过程中,基于学习进阶理论,以地衣内生菌的分离、纯化和培养为主线任务,引导学生依托文献生成课题,完成对“髓层刮离法”的自主设计和操作,在真实科研情境中发展学生的技术和工程等高阶思维。实验结果表明,“髓层刮离法”在提高分离率和降低污染率方面均要优于传统方法。

关键词：微生物培养地衣内生菌学习进阶实验教学

地衣内生真菌Pestalotiopsis sp.次生代谢产物

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菌物学报 2018年第2期37卷 237-245页

作者：元超李刚王海英赵俊凌郭玉华丁刚中国医学科学院/北京协和医学院药用植物研究所云南分所西双版纳州傣药南药重点试验室云南景洪666100 青岛大学药学院山东青岛266021 山东师范大学生命科学学院山东济南250014 中国医学科学院/北京协和医学院药用植物研究所北京100193

拟盘多毛孢属Pestalotiopsis真菌由于能够产生大量结构新颖活性显著的次生代谢产物,特别是从中发现抗肿瘤药物紫杉醇,成为近年来研究的热点。本研究通过对1株地衣内生真菌Pestalotiopsis sp.的固体培养基次生代谢产物的UPLC-Q-TOF-MS分... 详细信息

拟盘多毛孢属Pestalotiopsis真菌由于能够产生大量结构新颖活性显著的次生代谢产物,特别是从中发现抗肿瘤药物紫杉醇,成为近年来研究的热点。本研究通过对1株地衣内生真菌Pestalotiopsis sp.的固体培养基次生代谢产物的UPLC-Q-TOF-MS分析,发现该菌株能够产生分子量比较特殊的两个色谱峰。通过进一步的菌株大量发酵,结合硅胶柱色谱,高效液相色谱等技术跟踪分离,得到了2个单体化合物。采用核磁共振波谱技术、质谱技术等方法确定这2个单体化合物平面结构,分别为已知torrenyanic acid衍生物(1)和新化合物pestalotiopsin(2)。比对化合物的CD谱及考虑生源关系,确定了新化合物(2)的绝对构型。化合物1和2的体外抑制人白血病细胞K562实验显示二者均具有抗肿瘤活性,IC50值分别为25.2和32.1μmol/L。

关键词：地衣内生菌 Pestalotiopsis torrenyanic acid ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q-TOF-MS) 图分析

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梅衣和黄梅衣内生真菌物种多样性的比较研究

梅衣和黄梅衣内生真菌物种多样性的比较研究

作者：张洪霞山东师范大学

学位级别：硕士

现代研究证明地衣（lichens）是一种多元共生生物，是由共生藻类、共生真菌以及共生细菌组合成的互利共生的多元共生体，其中藻类大多为绿藻，也有一部分为蓝藻，真菌通常为担子菌或子囊菌，具有丰富的物种多样性。研究证明，地衣内生... 详细信息

现代研究证明地衣（lichens）是一种多元共生生物，是由共生藻类、共生真菌以及共生细菌组合成的互利共生的多元共生体，其中藻类大多为绿藻，也有一部分为蓝藻，真菌通常为担子菌或子囊菌，具有丰富的物种多样性。研究证明，地衣内生真菌能够产生具有新颖的化学结构和重要的生物活性的次生代谢产物。地衣“内生真菌”的角色是怎样的？其营养来源若为共生藻，则“内生真菌”是地衣型真菌的竞争者;其营养来源若为共生菌，则“内生真菌”可能是地衣型真菌的病原菌;如植物内生真菌一样，地衣内生真菌对宿主抵御外来入侵是否同样具有辅助作用，是我们探讨的内容。本实验以内蒙阿尔山市鸡冠山的梅衣和黄梅衣标本为实验材料分离培养内生菌，本实验旨在分析梅衣和黄梅衣内生真菌的物种多样性。本实验选用鸡冠山的两种地衣标本各60份，实验没有采用传统的Yamomoto法来分离内生菌而是采用了刮皮层法，每份标本挑取了14个组织块，共840个组织块，最终从梅衣中共分离获得238株内生真菌菌株，从黄梅衣中共分离获得42株内生真菌菌株。提取菌株的DNA，对所有的菌株运用PCR技术扩增菌株的ITS序列并进行分子生物学鉴定，由于有一部分菌株没有找到合适的引物，最终共有206株内生菌成功扩增了ITS序列。并最终通过GenBank数据库搜索，以DNAman软件调整序列方向，MAFFT软件进行序列比对，以MAGA5软件构建系统进化树。ITSnrDNA序列分析表明，分别属于57个种。多数内生真菌种类仅仅出现了1-3次，其中松、柏科树干上的梅衣内生真菌与松、柏科内生真菌密切相关，落叶层上的梅衣内生真菌与落叶层或土壤真菌密切相关。将梅衣内生真菌做系统发育树，我们发现梅衣内生真菌中有4个优势种群，其中株盘菌亚门49株，茶渍纲33株，子囊菌门22株，虫草类16。而黄梅衣标本中分离出的内生菌分属于17个种，在分离出的黄梅衣内生真菌中未发现优势菌株。而在梅衣内生真菌中的4个优势种群中黄梅衣内生真菌的菌株数为，盘菌亚门1株，茶渍纲1株，子囊菌门0株，虫草类6株。黄梅衣中内生真菌的数量远远少于梅衣中内生真菌的数量，这是因为黄梅衣中存在松萝酸这种著名的抗菌素，这一物质的存在大大减少了黄梅衣中内生菌的数量。这些研究结果显示松萝酸能够显著抑制多数地衣内生菌的定植率。梅衣中内生真菌的多样性指数大于黄梅衣的，这说明梅衣的内生真菌多样性要高于黄梅衣内生真菌的多样性。本实验发现绝大多数内生真菌不能通过ITS鉴定到属，显示地衣内生真菌的物种特殊性。优势种群中存在寄生真菌类群，显示所谓的内生真菌有可能是地衣的病原菌。优势种群中存在大量的茶渍纲类群，显示地衣共生体中可能存在许多脱地衣化的真菌种类。梅衣内生真菌中存在明显优势种群，为研究内生真菌在地衣共生系统中的角色问题提供了很好的素材。黄梅衣内生真菌数量显著少于梅衣内生真菌数量;未发现黄梅衣内生真菌的优势种群，梅衣内生真菌的4个优势种群中只有一个种群在黄梅衣中有较多定植，而这一优势种群为真菌寄生真菌。这些研究结果暗示：所谓的地衣“内生真菌”与共生菌存在竞争或寄生关系。

关键词：梅衣黄梅衣地衣内生菌分离培养 ITS 优势种群系统发育多样性

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地衣共生菌分离培养的新方法

山东科学 2011年第1期24卷 33-35页

作者：邱振鲁王海英赵遵田山东师范大学生命科学学院山东济南250014

介绍了一种分离培养地衣共生菌和内生菌的新方法。该方法直接挑取地衣体髓层菌丝进行培养,PDA培养基25℃培养14 d后观察,发现共生菌菌落生长率80.43%,而杂菌污染率为7.14%,具有简单、高效和污染率低的优点。

关键词：地衣共生菌地衣内生菌分离培养