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地榆不同炮制品促进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合作用的研究

地榆不同炮制品促进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合作用的研究

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作者：雷明豪湖北民族大学

学位级别：硕士

目的:探讨地榆不同炮制品的有效成分含量差异及其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌的体外抑菌活性,分析其对点状温热灼伤法诱导的深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响。方法:(1)通过超高效液相色谱串联质谱法检测地榆不... 详细信息

目的:探讨地榆不同炮制品的有效成分含量差异及其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌的体外抑菌活性,分析其对点状温热灼伤法诱导的深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响。方法:(1)通过超高效液相色谱串联质谱法检测地榆不同炮制品中的没食子酸、鞣花酸、地榆皂苷Ⅰ、地榆皂苷Ⅱ的含量差异。色谱柱为UPLC BEH C柱(100mm×2.1 mm,1.7μm),0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,柱温为50℃,体积流量为0.4 m L/min。ESI负离子模式下采集数据,毛细管电压为3.0 k V,离子源温度为550℃,锥孔电压为45 V,脱溶剂气流和锥孔气流均为氮气,流速分别为1000 L/h和40 L/h,碰撞气为氩气,没食子酸、鞣花酸、地榆皂苷Ⅰ、地榆皂苷Ⅱ均采用多级反应监测模式(MRM)检测。(2)采用牛津杯法测定生地榆、焦地榆、地榆炭、完全炭化地榆水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌的抑菌圈直径,采用倍比稀释法测定地榆四种不同炮制品对上述四种致病菌的最低抑菌浓度。(3)采用点状温热灼伤法复制深Ⅱ度烧伤大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、生地榆组、焦地榆组、地榆炭组、完全炭化地榆组、芝麻油组,每组6只。生地榆组、焦地榆组、地榆炭组、完全炭化地榆组分别以对应的药材制备的软膏外敷,芝麻油组以芝麻油外敷,模型对照组以空白敷贴外敷创面,每天换药1次。21 d后,以透明膜描记法计算创面愈合率,取各组大鼠创面组织制作HE染色切片,观察创面组织的病理改变情况,筛选出疗效最佳组。(4)采用点状温热灼伤法复制深Ⅱ度烧伤大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、芝麻油组、地榆炭组(n=18)。正常组和模型组以空白敷贴外敷,地榆炭组和芝麻油组分别以地榆炭膏和芝麻油外敷,每天换药1次。于给药后第7、14、21 d每组随机取6只大鼠,取创面组织制作HE染色切片,观察病理改变情况;采用ELISA法检测血清中IL-1β和IL-6的水平,Western-Blot法测定创面组织中p38磷酸化水平。结果:(1)4种待测成分在各自考察浓度范围内,线性关系良好(r≥0.9990),精密度、稳定性、重复性实验的RSD均小于3.0%,平均加样回收率在101.05%～103.2%之间,RSD小于3.55%。没食子酸、鞣花酸、地榆皂苷Ⅰ、地榆皂苷Ⅱ在地榆不同炮制品中的质量分数分别为0～3.45、0.66～11.5、0～24.2、0～0.86mg/g。(2)地榆不同炮制品中地榆炭对金黄色葡萄球菌、产气杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌作用最强,其次是焦地榆和生地榆;生地榆对大肠杆菌的抑菌作用最强,其次是焦地榆和地榆炭;完全炭化地榆在浓度低于0.5g/m L时对四种细菌几乎无抑菌作用。生地榆、焦地榆、地榆炭对金黄色葡萄球菌的MIC分别是15.63、15.63、7.82 mg/m L,对大肠杆菌的MIC分别是7.82、15.63、15.63 mg/m L,对产气杆菌的MIC分别是125、62.5、31.25 mg/m L,对铜绿假单胞菌的MIC分别是125、125、62.5 mg/m L。(3)给药7、14、21 d后,模型组创面愈合率分别为9.55±1.54%、47.48±0.84%、83.49±2.57%;芝麻油组创面愈合率分别为10.05±1.41%、48.85±1.80%、87.11±1.10%;生地榆组创面愈合率分别为18.62±1.23%、51.55±1.17%、91.00±1.48%;焦地榆组创面愈合率分别为19.03±1.24%、51.66±1.34%、90.07±1.03%;地榆炭组创面愈合率分别为23.51±1.37%、54.82±1.34%、95.25±1.21%;完全炭化地榆组创面愈合率分别为18.65±1.22%、51.65±0.99%、93.48±0.20%。给药21 d后,地榆炭组和正常组皮肤结构最接近,然后依次是完全炭化地榆组、生地榆组、焦地榆组、芝麻油组和模型组。(4)烧伤后模型组血清中IL-1β和IL-6水平高于正常组,差异有统计学意义。给药14、21 d后,地榆炭组的IL-1β和IL-6水平均低于模型组和芝麻油组,差异有统计学意义。给药7 d后,模型组、芝麻油组、地榆炭组p38磷酸化水平均高于正常组,差异有统计学意义。给药14 d后,模型组、芝麻油组、地榆炭组p38磷酸化水平均高于正常组,但地榆炭组p38磷酸化水平低于模型组和芝麻油组,差异有统计学意义。给药21 d后,地榆炭组p38磷酸化水平和正常组间无统计学差异,且均低于模型组和芝麻油组,差异有统计学意义。结论:炮制可以改变地榆中不同成分的含量,影响地榆的抑菌作用。地榆不同炮制品中,地榆炭对烧伤创面愈合作用最强,可能与降低促炎因子IL-1β、IL-6的

关键词：地榆炮制品深Ⅱ度烧伤抑菌活性创面愈合 IL-1β IL-6 p-p38

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