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土鳖虫活性组分F2-2抗凝机制研究

土鳖虫活性组分F2-2抗凝机制研究

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作者：杜清华北京中医药大学

学位级别：硕士

目的：土鳖虫为通心络胶囊处方中虫类药之一,与赤芍、蝉蜕共为佐药,发挥逐瘀通络的作用。课题组前期通过仿生酶解法提取,经葡聚糖凝胶柱分离得到有体外抗凝作用的组分F2-2。本研究拟从动物实验和细胞实验两个层面探讨土鳖虫F2-2发挥抗... 详细信息

目的：土鳖虫为通心络胶囊处方中虫类药之一,与赤芍、蝉蜕共为佐药,发挥逐瘀通络的作用。课题组前期通过仿生酶解法提取,经葡聚糖凝胶柱分离得到有体外抗凝作用的组分F2-2。本研究拟从动物实验和细胞实验两个层面探讨土鳖虫F2-2发挥抗凝作用的机制。方法：①正常大鼠随机分组,分别灌胃给予不同剂量土鳖虫F2-2。7d后眼眶取血,检测血浆中t-PA和PAI-1含量。②通过细胞存活率(MTT)法确定给药剂量;建立HUVEC细胞损伤模型,测定不同培养时间下细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),一氧化氮(NO)含量。③用酶联法检测空白组和给药组细胞培养48h后细胞培养液中t-PA和PAI-1含量。结果：①与空白组比较,各剂量土鳖虫F2-2组t-PA和PAI-1含量均降低,且用药剂量越高,两者含量越低;其中中、高剂量组PAI-1含量降低有统计学差异,t-PA含量降低有显著差异。②F2-2在0-4000mg·L-1浓度范围内,培养24h、48h、72h细胞存活率均高于80%。与空白组比较,H2O2(37.4mg·L-1)损伤2h可导致细胞存活率降低;模型组SOD、GSH-Px含量显著降低,细胞分泌NO水平降低,LDH漏出率升高,生成MDA增多。与模型组比较,土鳖虫抗凝活性组分在250-4000mg·L-1浓度范围内能使LDH漏出率降低,显著升高SOD、GSH-Px含量,抑制MDA生成。③在250-4000mg-L-1浓度范围内,PAI-1含量呈浓度依赖性显著降低;t-PA含量却均有不同程度升高,但未表现出浓度依赖性或其他规律性。结论：土鳖虫抗凝组分F2-2发挥抗凝作用的机制可能是其对损伤的血管内皮细胞保护作用以及一定程度的促纤溶系统作用。

关键词： F2-2 过氧化氢人脐静脉血管内皮细胞土鳖虫抗凝组分细胞保护纤溶作用

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