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土茯苓总黄酮改善ISO诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症的预防作用及机制

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中国实验动物学报 2024年第8期32卷 1023-1031页

作者：富丹婷施佳君杨钦钦郑纯威黄强陈宇浙江省中医药研究院实验动物中心杭州310007

目的研究土茯苓总黄酮(Smilax glabra flavonoids,SGF)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症的作用及机制。方法C57/6J小鼠随机分为正常组、ISO模型组(1.25 mg/(kg·d))、SGF低剂量组(50 mg/(kg·d))、SGF高剂量组(100 mg/(kg·d))。SGF低剂量组和SGF高剂量组均在造模前预防给药7 d,之后各组进行ISO皮下注射,连续注射7 d后进行超声心动图测定;眼眶取血分离血清,检测血清中N端脑钠肽前体(N-terminal brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)及炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)含量;收集心肌标本,观察心肌组织的病理学改变,二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)染色法检测心肌活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,检测心脏相关肥大基因mRNA水平变化以及NOD样受体热蛋白结构域蛋白3/半胱天冬酶-1/白介素18(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3/cysteinyl aspartate specific proteinase-1/interleukin-18,NLRP3/Caspase-1/IL-18)炎症级联通路上关键因子蛋白水平表达的变化。结果SGF预防给药可降低超声心动图中的左室舒张末期室间隔厚度(left ventricular end-diastolic inter ventricular septal thickness,IVSd)、左室收缩末期室间隔厚度(left ventricular end-systolic interventricular septal thickness,IVSs)和射血分数(ejection fraction,EF),提高左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVIDd)、左室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVIDs)和左心室收缩末期容积(left ventricular end systolic volume,LVESV),降低血中IL-1β、IL-6、TNF-α和NT-proBNP含量,抑制心脏相关肥大基因心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、β-肌球蛋白重链(beta-myosin heavy chain,β-MHC)mRNA表达水平上调,抑制心肌ROS水平增加,下调NLRP3/Caspase-1/IL-18炎症级联通路上关键因子NLRP3、Caspase-1(p20)和IL-18的蛋白表达,改善心肌细胞肥大和排列紊乱的情况,减少心肌纤维外的成纤维细胞增多,减轻炎症细胞浸润和心肌组织纤维化情况。结论SGF可改善ISO诱导的小鼠心肌肥大和心脏炎症,可能通过NLRP3/Caspase-1/IL-18炎症级联通路起作用。

关键词：土茯苓总黄酮异丙肾上腺素 NLRP3/Caspase-1/IL-18 心肌肥大

土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的研究

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中华中医药学刊 2018年第6期36卷 1392-1395页

作者：田崇梅夏道宗邢梦雨浙江中医药大学药学院

目的：探讨土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的影响。方法：采用双硫腙-PAR-铅分光光度法检测溶液中的铅离子含量，从而衡量出样品对铅离子的螯合能力；体外试验测定土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与... 详细信息

目的：探讨土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的影响。方法：采用双硫腙-PAR-铅分光光度法检测溶液中的铅离子含量，从而衡量出样品对铅离子的螯合能力；体外试验测定土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物清除自由基的能力和总的抗氧化能力。结果：土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物均在体外有很好的螯合作用，能够有效清除ABTS＋、DPPH·和羟基自由基，并且具有很好的抗氧化能力。结论：土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子有显著的螯合能力，以及具有良好的自由基清除和抗氧化能力。

关键词：土茯苓总黄酮亚硒酸钠铅螯合能力抗氧化

土茯苓总黄酮对断乳后铅中毒大鼠肾脏的保护作用及其机制研究

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土茯苓总黄酮对断乳后铅中毒大鼠肾脏的保护作用及其机制研究

作者：方月娟浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的本研究通过观察土茯苓总黄酮(TFSG)对断乳后铅中毒大鼠肾功能、肾氧化损伤指标的影响,探讨TFSG对断乳后铅中毒大鼠肾脏氧化损伤的保护作用;通过观察TFSG对断乳后铅中毒大鼠肾脏NF-κB/IκB/IKK通路以及Caspase-3 mRNA和蛋白表达的影... 详细信息

目的本研究通过观察土茯苓总黄酮(TFSG)对断乳后铅中毒大鼠肾功能、肾氧化损伤指标的影响,探讨TFSG对断乳后铅中毒大鼠肾脏氧化损伤的保护作用;通过观察TFSG对断乳后铅中毒大鼠肾脏NF-κB/IκB/IKK通路以及Caspase-3 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其对断乳后铅中毒大鼠肾脏的保护作用及机制。方法取成年SD大鼠,雌雄各半。雌雄1:1合笼交配,成功后,雌性大鼠随机分为正常组、造模组,其中正常组4只,造模组20只。待雌性大鼠分娩后,挑出雄性幼鼠,断乳后,处死母鼠。其中造模组随机分成模型组、阳性对照二巯基丁二酸组(DMSA 70 mg/kg)、土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)共5组每组10只。除正常对照组饲喂去离子水外,其他组再继续给予0.5%醋酸铅溶液直至实验结束。正常组、模型组动物灌胃给予去离子水,其余组动物灌胃给予不同受试物28 d。实验结束后测定血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量;测定血液、尿液及不同组织中铅的浓度;测定肾脏超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)水平;并对肾脏组织切片进行病理学观察;采用RT-PCR以及Western blot法测定NF-κB/IκB/IKK通路以及Caspase-3 mRNA和蛋白在肾脏中的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠的体重增重明显下降(P土茯苓总黄酮对断乳后铅中毒大鼠肾脏氧化损伤有明显的保护作用,其机制是调控ROS可介导的NF-κB/IκB/IKK通路相关蛋白的表达,在治疗由铅中毒引起的肾脏损伤方面有很大的应用前景。

关键词：土茯苓总黄酮铅中毒氧化损伤 NF-κB/IκB/IKK信号通路

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土茯苓总黄酮与肠道菌群相互作用的研究

土茯苓总黄酮与肠道菌群相互作用的研究

作者：赵磊苏州大学

学位级别：硕士

目的通过研究土茯苓总黄酮(Flavonoidsfrom Smilax Glabra Roxb,FSGR)对高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠肠道菌群、血脂、肝脂和短链脂肪酸等因素的影响,明确大鼠肠道菌群对FSGR成分的代谢过程,分析FSGR对高脂大鼠的治疗机制。方法1.建立UHPL... 详细信息

目的通过研究土茯苓总黄酮(Flavonoidsfrom Smilax Glabra Roxb,FSGR)对高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠肠道菌群、血脂、肝脂和短链脂肪酸等因素的影响,明确大鼠肠道菌群对FSGR成分的代谢过程,分析FSGR对高脂大鼠的治疗机制。方法1.建立UHPLC-Q-TOF/MS方法分析FSGR和落新妇苷在体内和体外胃肠道中的代谢。2.涂布平板法和16S rDNA法分析FSGR和落新妇苷对大鼠肠道菌群的体外调节作用。3.短链脂肪酸浓度和血脂肝脂等指标的测定,探究FSGR对脂肪肝大鼠的降脂护肝作用。4.宏基因组学分析FSGR对高脂大鼠肠道菌群的调节作用。结果***中的落新妇苷及其异构体可被肠道菌代谢,首先生成花旗松素、异花旗松素和槲皮素-鼠李糖苷;其次发生氧化还原反应,生成槲皮素、白矢车菊素、圣草酚和4-羟基槲皮素;最后母核裂解,生成间苯三酚、3,4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸和4-甲基邻苯二酚。落新妇苷及其异构体在大鼠体内代谢生成花旗松素和槲皮素。***在体外对双歧杆菌和乳酸杆菌有促进作用,对梭菌有抑制作用,落新妇苷的结果与FSGR相似,两者在门水平上降低Firmicutes丰度,增加Bacteroidete丰度。***不改变脂肪肝大鼠的体重,显著降低血清和肝脏中TC、TG和FFA的水平,降低血清中ALT和AST的水平,且呈现一定的的剂量依赖趋势。还可增加肝脏中SOD酶的活性,降低MDA水平,改善肝细胞的脂肪变性程度,一定程度调节肠道内SCFAs的含量。***显著改善由高脂饮食所造成的肠道菌群失调,在门水平上增加Bacteroidetes 和 Proteobacter的丰度,降低 Firmicutes和Verrucomicrobia的丰度,F/B值显著下降。KEGG和GO数据库检测到不同代谢通路的差异。非诺贝特在门水平上对肠道菌群的调节能力较弱。结论大鼠肠道菌群可使FSGR中的落新妇苷及其异构体向苷元花旗松素转化,并代谢使黄酮母核发生一系列氧化还原反应,最终代谢生成小分子酚酸类物质。FSGR及其代谢产物在不影响高脂大鼠体重的情况下,恢复大鼠血脂和肝脂等相关指标,调节失调的肠道菌群,显著降低F/B值。非诺贝特发挥降脂作用的机制与调节肠道菌群的相关性较弱。本研究从FSGR与大鼠肠道菌群的相互作用有利于预防疾病发生的角度,诠释了其作为功能性食物预防由高脂饮食所引起脂肪肝的内涵。

关键词：土茯苓总黄酮肠道菌群代谢产物高脂饮食脂肪肝

土茯苓总黄酮对尿酸性肾病大鼠的保护作用及机制研究

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土茯苓总黄酮对尿酸性肾病大鼠的保护作用及机制研究

作者：王思为浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的本研究通过观察土茯苓总黄酮(TFSG)对尿酸性肾病大鼠血清尿酸、血脂代谢、肾功能及肾氧化损伤指标的影响,探讨TFSG对尿酸性肾病大鼠肾氧化损伤的保护作用;通过观察TFSG对尿酸性肾病大鼠肾脏尿酸盐转运蛋白和肾小管上皮细胞多种因子m... 详细信息

目的本研究通过观察土茯苓总黄酮(TFSG)对尿酸性肾病大鼠血清尿酸、血脂代谢、肾功能及肾氧化损伤指标的影响,探讨TFSG对尿酸性肾病大鼠肾氧化损伤的保护作用;通过观察TFSG对尿酸性肾病大鼠肾脏尿酸盐转运蛋白和肾小管上皮细胞多种因子mRNA和蛋白表达的影响,探讨其对尿酸性肾病大鼠的肾脏保护作用机制。方法雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、别嘌呤醇组(40 mg/kg)、TFSG低中高(100、300、500 mg/kg)剂量组。除正常组外,其余大鼠给予酵母颗粒饲料并灌胃腺嘌呤(50 mg/kg)。同时,正常组、模型组灌胃蒸馏水,其余各组灌胃给予相应受试物,持续28天。实验结束后测定血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量,测定血清总蛋白、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,测定肾脏丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平及超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;并对肾脏切片进行组织病理学观察。采用荧光定量PCR及Western blot法测定尿酸盐转运蛋白ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、有机阴离子转运体1(OAT1)、有机阳离子转运体2(OCT2)、有机阳离子/肉毒碱转运体2(OCTN2)以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、环氧合酶2(COX-2)、促纤维化细胞因子β1(TGF-β1)mRNA和蛋白质在肾脏中的表达情况。结果①与正常组相比,模型组大鼠肾体指数,血清中UA、Cr、BUN、GLB以及TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著下降(P<0.05);模型组大鼠肾MDA、GSSG水平显著上升(P<0.05),肾SOD、CAT和GSH水平显著下降(P<0.05),且模型组大鼠肾组织肾小管细胞结构破坏,出现凋亡趋势。与正常组相比,模型组大鼠肾脏尿酸盐转运蛋白ABCG2、OAT1、OCT2、OCTN2mRNA及蛋白质表达量显著下降(P<0.05),而bFGF、COX-2、TGF-β1 mRNA及蛋白质表达量显著上升(P<0.05)。②与模型组相比,TFSG能显著改变尿酸性肾病大鼠肾体指数以及降低血清尿酸、肌酐和尿素氮浓度,降低血清GLB、TC、TG和LDL-C含量,降低肾MDA和GSSG水平(P<0.05);显著升高血清HDL-C水平以及肾GSH、SOD、CAT活性(P<0.05);中高剂量TFSG能显著改善模型大鼠肾脏组织的病理学改变。TFSG能够显著上调ABCG2、OAT1、OCT2、OCTN2 mRNA 及蛋白质水平(P<0.05),显著下调 bFGF、COX-2、TGF-β1 mRNA及蛋白质水平(P<0.05)并且具有一定剂量依赖性。结论TFSG对尿酸性肾病大鼠肾氧化损伤有明显保护作用,且可介导多个肾脏尿酸盐转运蛋白以及炎性因子和细胞生长因子的表达,在痛风并发症的治疗方面有很大潜力。

关键词：土茯苓总黄酮尿酸性肾病痛风尿酸盐转运蛋白氧化损伤

基于 NLRP3 炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

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中国实验方剂学杂志 2018年第4期24卷 90-95页

作者：金晓敏张晓熙郭璐李杨蕾邢梦雨田崇梅夏道宗浙江中医药大学药学院

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）... 详细信息

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P〈0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P〈0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P〈0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P〈0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。

关键词：土茯苓总黄酮急性痛风性关节炎核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体轴

土茯苓总黄酮通过p38/ERK MAPK通路调控膜性肾病大鼠足细胞上皮-间充质转化的作用机制研究

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中医药导报 2022年第4期28卷 1-5,22页

作者：孙杰瑜孙博蕊中国医科大学附属第一医院辽宁沈阳110000

目的:探讨土茯苓总黄酮(SGF)对膜性肾病大鼠足细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及对p38/细胞外调节蛋白激酶(ERK)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调节作用。方法:将76只造模成功的膜性肾病SD大鼠随机分为模型组、SGF低剂量组(15 mg/kg)... 详细信息

目的:探讨土茯苓总黄酮(SGF)对膜性肾病大鼠足细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及对p38/细胞外调节蛋白激酶(ERK)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调节作用。方法:将76只造模成功的膜性肾病SD大鼠随机分为模型组、SGF低剂量组(15 mg/kg)、SGF高剂量组(30 mg/kg)和阳性药物组(环孢素,10 mg/kg),每组19只,另取20只正常SD大鼠作为对照组。各组采用相应药物干预6周。HE染色和TUNEL法观察大鼠肾皮质组织病变和PC凋亡。检测24 h尿蛋白(24 h UTP)、血清血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,血清白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,肾皮质组织细胞外调节蛋白激酶(ERK)mKNA、p38MAPK mKNA、Nephrin mKNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA,以及ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA蛋白水平。结果:模型组大鼠肾小球体积增大,细胞萎缩,系膜与基质出现明显增生,肾小管扩张;SGF低剂量组、SGF高剂量组及阳性药物组大鼠肾脏病理损伤均有不同程度减轻。与模型组比较,SGF低剂量组、SGF高剂量组及阳性药物组大鼠IL-4、TGF-β1水平,Nephrin mRNA和蛋白水平均明显升高(P<0.05),24h UTP、Scr、BUN、TNF-α、肾小球足细胞凋亡指数(AI)、α-SMA mRNA、p-ERK蛋白、p-p38MAPK蛋白、α-SMA蛋白水平均明显降低(P<0.05),其中以阳性药物组大鼠各指标变化最显著,其次是SGF高、低剂量组(P<0.05)。结论:SGF可有效改善膜性肾病大鼠炎性反应和细胞凋亡,抑制EMT过程,可能是通过调控p38/ERK MAPK通路发挥作用。

关键词：膜性肾病土茯苓总黄酮足细胞上皮-间充质转化大鼠

小鼠骨髓源树突状细胞的分离鉴定及用于土茯苓总黄酮抗痛风初步评价

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小鼠骨髓源树突状细胞的分离鉴定及用于土茯苓总黄酮抗痛风初步评...

作者：郑慧浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的1.通过加入细胞因子GM-CSF、IL-4体外联合诱导方法成功培养分离出小鼠骨髓源树突状细胞(DCs),用于体外实验研究。2.对培养出的细胞从形态学观察、细胞表面分子检测两方面鉴定树突状细胞纯度,为后续实验研究提供实验基础。3.以痛风... 详细信息

目的1.通过加入细胞因子GM-CSF、IL-4体外联合诱导方法成功培养分离出小鼠骨髓源树突状细胞(DCs),用于体外实验研究。2.对培养出的细胞从形态学观察、细胞表面分子检测两方面鉴定树突状细胞纯度,为后续实验研究提供实验基础。3.以痛风细胞模型为研究对象,给予中药土茯苓总黄酮(TFSG),通过对痛风关键因子IL-1β、TNF-α以及相关蛋白Caspase-1的研究,初步评价土茯苓总黄酮的抗痛风作用,为进一步研究TFSG抗痛风的作用机制提供基础。方法1、细胞培养:颈椎脱位法处死小鼠,无菌取股骨,冲洗出骨髓细胞,以1×106细胞/孔加入6孔板在RPMI1640完全培养基中培养,在胎牛血清(FBS)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、rmIL-4中分化7天,制备小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞(BMDCs)。2、小鼠骨髓源树突状细胞鉴定:2.1倒置显微镜下对DCs形态观察。2.2流式细胞仪检测CD86细胞表面分子:收集细胞培养板中的悬浮细胞,经离心、洗涤、计数、定容、标记后分别加入抗体和同型对照组IgG,室温避光孵育20分钟后离心、洗涤后使用流式细胞仪检测DCs表面CD86的表达情况。3、确定TFSG作用于小鼠DCs的安全浓度范围:采用MTT法研究不同浓度土茯苓总黄酮对小鼠DCs的生长情况,约5×103个/孔细胞接种于96孔板,分别加入不同浓度TFSG后,在培养箱中分别孵育24h,48h,72h,结束后分别加入MTT溶液,继续避光孵育3h(待紫色晶体形成),再加入DMSO溶液溶解晶体,最后在酶标仪上(570nm波长)检测各孔OD值。4、土茯苓总黄酮干预作用:将DCs(1×106cells/ml)分为6组,即正常组、模型组、秋水仙碱组、土茯苓总黄酮组(低、中、高剂量组),除正常组外,然后加入尿酸钠(MSU)晶体(100μg/ml)在与一定体积土茯苓总黄酮(100、300、500μg/ml)或阳性对照药秋水仙碱(0.1μg/ml)混合后,37℃共同孵育20h。正常组、模型组用培养液代替药物,试验均重复3次,最后,收集上清液用ELISA法测定细胞因子IL-1β、TNF-α水平,通过Western blot法检测Caspase-1表达水平。结果1、倒置荧光显微镜观察:小鼠骨髓细胞培养24h后去上清,再经rmGM-CSF、rmIL-4诱导培养48h,此时大部分细胞贴壁生长,细胞形态不规则,有集落形成,培养72 h后悬浮细胞增多,集落增多。培养第6天可见悬浮细胞更多,有少量树突样突起。加入LPS培养24h后细胞表面出现典型树突样突起,符合DCs形态。2、流式细胞仪检测DCs表面分子:第4d,6d小鼠骨髓源成熟树突状细胞对细胞表面CD86表达出现很大变化,第6d细胞表面CD86阳性率增加到32.5%,查阅文献,符合DCs的表达特征。3、通过ELISA法测得,与正常组相比,模型组上清液中IL-1β、TNF-α水平升高,与模型组相比,较高剂量TFSG使IL-1β、TNF-α水平下降;通过Western blot检测得发现,模型组Caspase-1的相对表达水平升高,较高浓度TFSG组中Caspase-1的相对表达水平降低。结论1、本实验利用GM-CSF、IL-4及LPS体外诱导培养的方法成功培养并扩增出符合实验要求的DCs,具有典型的树突状突起。2、较高浓度TFSG对痛风中的主要因子IL-1β、TNF-α有一定的影响,相关蛋白Caspase-1的相对表达水平下调,可初步评价TFSG对痛风有一定的治疗作用。

关键词：树突状细胞痛风土茯苓总黄酮 Caspase-1 IL-1β TNF-α

从NLRP3/ASC/Caspase-1轴探讨土茯苓总黄酮防治痛风性关节炎的机制

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从NLRP3/ASC/Caspase-1轴探讨土茯苓总黄酮防治痛风性关节炎的机制

作者：金晓敏浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的研究土茯苓总黄酮(TFSG)对尿酸钠(MSU)诱导的THP-1细胞及急性痛风性关节炎小鼠关节滑膜中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达的影响,并通过测定TFSG对NLRP3炎性体轴相关的NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白和m RNA表达的影响,探讨其抗痛... 详细信息

目的研究土茯苓总黄酮(TFSG)对尿酸钠(MSU)诱导的THP-1细胞及急性痛风性关节炎小鼠关节滑膜中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达的影响,并通过测定TFSG对NLRP3炎性体轴相关的NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白和m RNA表达的影响,探讨其抗痛风性关节炎的机制。方法(1)THP-1细胞经PMA诱导成巨噬细胞,MTT法测定不同浓度的秋水仙碱、MSU和TFSG对细胞毒性的影响;将细胞分为正常组、LPS组、LPS+MSU组、秋水仙碱组(100 ng/m L)、TFSG低、中、高剂量组(100、200、400μg/m L),除正常组外,加入LPS处理(终浓度1μg/m L),培养箱放置2 h后加入MSU,继续放至24 h。酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达情况。(2)将120只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.65 mg/kg),TFSG低、中、高剂量组(100、300、500mg/kg),每组20只。正常组与模型组灌胃蒸馏水,其余组别给与相应药物,持续灌胃7天;除正常组外,其余各组在灌胃第6天后采用MSU复制小鼠痛风性关节炎模型,正常组注射生理盐水。实验结束后测定小鼠踝关节肿胀情况;ELISA检测不同组别滑膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平;Western blot测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达情况;实时荧光定量PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 m RNA含量的表达;对小鼠踝关节切片进行组织病理学观察。结果(1)细胞实验中,与正常组比较,LPS+MSU组IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P土茯苓总黄酮能降低尿酸钠晶体诱导的炎症因子的释放水平,调控NLRP3/ASC/Caspase-1轴上相关蛋白和m RNA的表达,表现出一定的抗痛风性关节炎的作用,对于研究痛风的发病机制及治疗奠定了基础。

关键词：土茯苓总黄酮痛风性关节炎 THP-1细胞 NLRP3炎性体